1、贵州省黔南州中医院检验科 临检室管理SOP文件文件编号：QZJ-LJ-022版 序：A/O生效日期：2016年1月10日责任部门：检验科页 码： 第 12 页 共12页ABX DX120全自动血细胞分析仪操作程序1.检测原理1.1 RBC/PLT通过电阻抗变化原理测定RBC和PLT。这意味着血细胞通过池内微孔时会产生电场。样品稀释在电解质稀释溶液里（电流导电场），混合后被真空吸引通过校准孔的微孔。两个电极置于微孔两侧，恒定电流不断流过两电极间。当血细胞通过微孔时，它们在两电极之间的电场内产生电阻（阻抗）。测量细胞的电压与细胞的尺寸成比例。由于电流是持续不变的，大细胞会产生更大的电阻，小细胞电阻
2、也小一些（即两电极间的阻抗变化与细胞体积呈正比）。当细胞通过微孔时，电压随着脉冲振幅大小而变化。脉冲被放大、根据尺寸和阈值被引导、聚集、然后连同定标系数进行数学计算给出RBC和PLT的最终数值。1.1.1结果：单位体积内的细胞数定标系数。1.1.2直方图：a RBC: 分布在30fl到300fl间的256通道上。b PLT：分布在2fl到活动阈值间的256通道上。该阈值根据分析区域内出现的小细胞个数而移动。1.2 HGB红细胞溶解后释放的血红蛋白与氰化钾结合形成氰化高铁血红蛋白化合物。在550nm波长下，利用分光光度法测出吸光度，测得的吸光度值定标系数=血红蛋白数值。在闭管自动进样循环中，两次
3、计数池冲洗之间做一个HGB空白，与上次的空白值合并得出最终HGB的空白值（1/5新值，4/5上一次的空白值）。在手工模式下，每个循环都做HGB空白。 1.2.1结果：HGB=Log（空白值/样品值）K1.3 MCV、MCH和MCHC 1.3.1 MCV（平均红细胞体积）由RBC直方图直接计算得出。 1.3.2 MCH（红细胞平均血红蛋白含量）根据HGB值和RBC结果计算。结果：MCH（pg）=（HGB/RBC）10 1.3.3 MCHC（红细胞平均血红蛋白浓度）根据HGB值和HCT值计算。结果：MCHC（g/dL）=（HGB/HCT）1001.4 HCT细胞通过校准孔的微孔产生的脉冲高度与所分
4、析的RBC体积成正比，HCT是利用与MCV相关的函数测得。1.5 RDW 研究RBC分布可以检测与RBC大小不同相关的RBC异常。RDW（红细胞分布宽度）让你根据细胞数目和平均体积去研究曲线宽度。 1.5.1结果：RDW=KSD/MCV 其中 K=系统常数 SD=通过对细胞分布进行统计研究得出的标准差 MCV=平均RBC体积。1.6 MPV研究血小板直方图可直接得出MPV（平均血小板体积）。1.7 PCT根据下列公式计算 PCT%=（PLTMPV）/100001.8 PDWPDW（血小板分布宽度）根据PLT直方图来计算。从2fl开始的占PLT总数15%的阈值S1与从活动阈值开始向后的占PLT总
5、数15%的阈值S2之间的曲线宽度代表PDW。1.9 WBC 计数通道:检测原理与RBC计数方法相同。WBC计数在WBC/HGB通道内进行，信号处理设备在WBC和PLT（和已溶解的RBC）之间置一电子阈值。 1.9.1结果：单位体积内的细胞数定标系数。计数结果与BASO通道和LMNE通道内的测量结果作对比，以绝对值和百分数形式给出完整的分类结果。1.10 BASO检测原理与RBC的方法相同。利用特定的溶血剂（ABX嗜碱溶血剂）在独立的BASO通道内进行计数。血样与ABX嗜碱溶血剂反应后，除了嗜碱性粒细胞之外，全部白细胞失去细胞膜和胞浆，将嗜碱性粒细胞与其他白细胞裸核分开将变得十分容易。从体积坐标
6、轴开始到阈值1之间可见细胞溶解后剩余的碎片，从阈值2到直方图尾部是嗜碱性粒细胞。WBC总数包括全部裸核数目加上嗜碱性粒细胞。嗜碱性粒细胞百分数根据阈值2和上限间的细胞数计算。1.10.1结果：1.10.1.1计数细胞（BASO+WBC裸核）总数=单位体积细胞数定标数100%；1.10.1.2 BASO通道的结果也与其它通道（WBC和LMNE）的结果作对比，以绝对值和百分数形式给出完整的分类结果。1.11双矩阵 双矩阵基于三条原理： DHSS（双鞘流）原理（ABX专利） 体积检测：阻抗变化 细胞化学法染色和吸光度测量。采样阈LMNE管路内的全血样本注入LMNE池，与ABX嗜酸染色剂混合，此试剂溶
7、解掉RBC，并使WBC 稳定在原始状态并分别染色。在加热池反应/稀释后在进入测量池分析之前，溶液被吸引送到光学反应通道。在双层鞘流作用下，该溶液通过LMNE流式细胞通道的光窗和60um微孔，每个细胞均被检测吸光度（细胞化学法）和阻抗（体积）。通过上述测量以体积为X轴，以吸光度为Y轴绘制WBC散点图。2.试剂2.1 稀释液（DILUENT)2.1.1试剂品牌：ABX,包装规格，20L.2.1.2储存条件：5-30避光保存。2.1.3使用期限：有效期内使用，试剂开封后科可稳定60d。2.1.4安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，必要时寻求医疗救助。2.1.5注意事项：注意防尘
8、。2.2 嗜碱溶血剂（BASOLYSE）2.2.1试剂品牌：ABX；包装规格,5L.2.2.2储存条件：18-25避光保存。2.2.3使用期限：有效期内使用，试剂开封后科可稳定60d。2.2.4安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，必要时寻求医疗救助。2.2.5注意事项：在试剂使用前须确认是否有污染或颜色变化，一经发现，须速更换。若试剂出现冻结现象，用前将其解冻充分混匀后使用。2.3嗜酸溶血剂（LEUCODIFF）2.3.1试剂品牌：ABX，包装规格1L。2.3.2储存条件：18-25避光保存。2.3.3使用期限：有效期内使用，试剂开封后科可稳定60d。2.3.4安全事项：
9、避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，必要时寻求医疗救助。2.3.5注意事项：在试剂使用前须确认是否有污染或颜色变化，一经发现，须速更换。若试剂出现冻结现象，用前将其解冻充分混匀后使用。2.4血红蛋白溶血剂（LYSEBIO）2.4.1试剂品牌：ABX，包装规格1L.2.4.2储存条件：15-30避光保存。2.4.3使用期限：有效期内使用，试剂开封后科可稳定60d。2.4.4安全事项：避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，必要时寻求医疗救助。2.4.5注意事项：在试剂使用前须确认是否有污染或颜色变化，一经发现，须速更换。若试剂出现冻结现象，用前将其解冻充分混匀后使用。2.5清
10、洗液（CLEANER）2.5.1试剂品牌：ABX，包装规格1L。2.5.2储存条件：5-30避光保存。2.5.3使用期限：有效期内使用。2.5.4安全事项：本品为强碱性洗涤剂，避免和眼睛、皮肤、衣物接触，一旦接触，用大量清水冲洗，必要时寻求医疗救助。2.5.5注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须速更换。若试剂发生凝固，须替换。2.6网织红细胞染液（Fluoyte）2.6.1试剂品牌：ABX，包装规格0.5L。2.6.2储存条件：18-25避光保存.2.6.3使用期限：有效期内使用。2.6.4安全事项：避免和眼睛、皮肤、衣物接触，一旦接触，用大量清水冲洗，必要时寻求医疗救
11、助。2.6.5注意事项：若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象，须速更换。若试剂发生凝固，须替换。2.7校准品及质控品2.7.1试剂品牌：ABX。2.7.2储存条件：2-8垂直保存，避免冷冻。2.7.3使用期限：有效期内使用，其中校准品开封后必须4h内使用，如未用完，应废弃剩余部分。2.7.4注意事项：校准品上清液有轻微溶血现象是正常现象。温度超出规定范围可导致严重溶血，校准品平均值超出测试限，并且实验室内质控历史数据和室间质评数据表示良好的结果时，可视为本校准品失效。应更换校准品，重新校准。2.8试剂的更换2.8.1更换试剂以后，先进行空白检查，确认空白计数符合要求（WBC0.110
12、9/L；RBC0.021012/L；HGB1g/L；PLT5.0109/L），再开始进行样本分析2.8.2以上所有试剂开封后应在外包装注明启用日期。2.8.3进入检验LIS系统试剂出库登记。3.校准程序 3.1校准周期 正常展开工作半年校准一次。仪器投入使用前；更换配件维修后，可能对检测结果有影响时；室内质控显示系统的检测结果有漂移时；比对结果超出允许误差时可校准。但校准应被视为故障排除步骤中的最后一步，执行不必要的校准会掩盖仪器性能中存在的潜在问题。 3.2校准前检查 3.2.1检查校准品批号和有效期。使用配套试剂，试剂必须充足。如果室温超过30，不能进行校准，在校准前30分钟打开仪器电源。
13、 3.2.2确认是否按厂家建议进行仪器保养。尽可能不要在进行保养或试剂更换的当天进行校准或校准验证。 3.2.3浏览最近的质控数据，确保分析仪性能稳定。 3.2.4检测手工进样模式及自动进样模式的精确性：各取1份新鲜全血标本进行仪器的精密度试验，连续检测11次，统计第211次结果的CV值。3.2.5进行自动清洗，确认空白计数没有超出规定范围。3.3校准方法3.3.1校准ABX DF120手工进样模式3.3.1.1校准品的准备a) 从冰箱或包装取出1瓶校准品，放置30分钟使其温度升至室温（18-25）。b) 保持瓶子直立的状态放在双手中轻轻搓动20秒，然后将其颠倒后再搓动20秒以上。c) 轻轻来
14、回倒转12次使其混合均匀，确保所有细胞都已经悬浮起来。d) 进行分析前在平面上静置瓶子15秒，使泡沫散去。3.3.1.2校准品检测：在手工进样模式下连续进行11次分析，在分析当中不要混匀校准品。分析结束后，使用洁净无屑的纱布擦拭干净瓶子及瓶盖螺纹，之后盖上瓶盖。3.3.1.3平均值的计算及校核数据：去除第1次分析结果，计算其余10次分析结果的平均值，确认各参数的平均值与靶值差异绝对值都在可接受范围内（WBC1.5%,RBC1.0%HGB1.0%HCT2.0%PLT3.0%)。如果某个参数的平均值与靶值差异绝对值超出了可接受范围，并且内部质控和（或）室间质评的结果也显示出类似偏差，表示需要重新校
15、准分析仪。3.3.1.4计算新的校准设定值：校准设定值的修改是非常关键的操作，只能由ABX现场技术服务代表进行。3.3.1.5校准后用另一只校准品连续测定11次，计算第211次检测结果均值与靶值的差异百分比绝对值是否在可接受范围内（WBC1.5%,RBC1.0%HGB1.0%HCT2.0%PLT3.0%)。3.3.2校准ABX DF120自动进样模式3.3.2.1校准前准备a) 校准前确认ABX DF120手工进样模式已被正确校准。b) 新鲜全血标本的准备：选择同血型各参数均正常的新鲜全血标本多份混合成约22ml全血标本，分装4ml/管，共5管，分别用于该份全血标本的定值，ABX DF120自动进样模式校准，ABX DF120自动进样模式校准验证，ABX DF120手工进样模式校准，ABX DF120手工进样模式校准验证，标本尽量在2小时内完成检测，最长不能超过4小时。3.3.2.2样品的检测及计算：先取上述标本1份在靶仪器连续检测11次，计算第211次各参数检测结果均值，以此为该新鲜全血标本的靶值；再用其他份相同的新鲜全
