1、溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶
2、解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于 -20。100Denhardt试剂（Denhardts regent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）水2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L D
3、TT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP混合液配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmo
4、l/L dTTP2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul20PEG 8000/2.5M NaCl质量浓度为20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约
5、0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phospha
6、te buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ml）1mol/L 磷酸氢二钠（ml）最终pH值8778508157757356856255655104503903302801231501852252653153754354905506106707206.06.16.26.36.46.
7、56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存DNA）10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8mlTris缓冲液（Tris-HCl buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.6142128.53846566671.3769.08.88.48.28.07.87.67.4二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液
8、50Tris-乙酸（TAE）缓冲液2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）5Tris-硼酸（TBE）缓冲液445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）染料1溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青F
9、F于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）6碱性凝胶上样液（室温贮存）配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青FF300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到10ml聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）0.15溴酚蓝0.15二甲苯青FF5
10、 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400 型）1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）0.25溴酚蓝15聚蔗糖（400型）2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青FF甘油凝胶上样液（4贮存）50甘油3ml3.9ml蔗糖凝胶上样液（室温贮存）40聚蔗糖4g十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）0.2溴酚蓝0.2二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1SDS20mg4ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）100ul 10 SDS5ml三.常用培养基LB培养基将下列
11、组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基0.5g1 mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0
12、.22um的滤膜过滤除菌）。TB培养基12g24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。2YT培养基16gYPD培养基葡萄糖用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100m
13、g/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于 -20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至1
14、0ml。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足
15、量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。溶液配制讲义培训目标：1了解溶液及化学试剂的基本知识。2掌握溶液配制和溶液保存的方法。3了解溶液配制的注意事项。4通过培训，可以配制一些常用的溶液。一.溶液的基本知识溶液的定义溶液：一种以分子、原子或离子分散于另一种物质的均匀而又稳定的体系叫做溶液。溶液由溶质和溶剂组成。溶剂：用来溶解别物质的物质叫做溶剂；溶质：能被溶剂溶解的物质叫做溶质。溶液中的溶质和溶剂的规定没有绝对的界限，只有相对的意义。通常把单独存在和组成溶液状态相同的时的物质叫做溶剂。溶解过程溶解：在一定的温度下，将固体物
16、质放在水中，溶质表面的分子或离子由于本身的运动和受到水分子的吸引，克服固体分子间的引力，逐渐分散到水中，这个过程叫做溶解。结晶：在溶解的过程的同时，还进行着一个相反的过程，即已溶解的溶质粒子不断的运动，与未溶解的溶质碰撞，重新被吸引到固体表面上，这个过程叫做结晶。饱和状态：当溶解速度等于结晶速度时，溶液的浓度不再增加，存在着一个动态平衡，这种状态叫做饱和状态。饱和溶液：在一定条件下达到饱和状态的溶液叫做饱和溶液，还能继续溶解溶质的溶液叫做不饱和溶液。溶解过程是一个物理化学过程，而不是一个机械混合过程。加速溶解的办法：研细溶质、搅拌、振和加热溶液。溶解度溶解度：在一定的温度下，某种物质在100克
17、溶剂中达到溶解平衡状态时所溶解的克数。相似相溶规律：物质易溶于性质相似的物质之中。如：极性物质易溶于极性溶剂，非极性溶质易溶于非极性溶剂中。影响物质溶解度的因数很多，其中温度的影响较大，大多数固体物质的溶剂溶解度随温度升高而增加。易溶物质：溶解度在10克以上；可溶物质：溶解度在110克；微溶及难溶物质：溶解度在1克以下。配制饱和溶液的方法：查阅溶解度表，得知该物质在室温下的溶解度，称取稍过量的溶质，配制溶液，在溶解达到平衡后，在溶液中保持过量未溶解的溶质固体。二化学试剂进行溶液配制，要先了解相关的化学试剂。化学试剂的规格和等级级别一级品二级品三级品中文标志优级纯分析纯化学纯英文标志GRARCP
18、标签颜色绿色红色蓝色此外还有光谱纯试剂和超纯试剂等。氧化铝生产过程中化学分析所用的试剂，一般为分析纯和化学纯，作基准物质用的是优级纯。2化学试剂的合理选用根据工作要求合理地选用相应的试剂级别，在满足分析要求的前提下，选用的原则是就低不就高。痕量分析要用高纯或优级纯试剂，以降低空白值和避免杂质干扰；车间控制分析可选用分析纯、化学纯试剂。三溶液配制中常用的计量单位1物质的量（nB）物质的量表示物质基本单元多少的一个物理量，单位为摩尔，符号为mol。质量（m）单位为：千克克毫克微克 等。它们之间的关系为：摩尔质量摩尔质量即是质量除以物质的量。千克/摩、克/摩（g/mol）。体积（V）单位：升（L）、
19、毫升（Ml）。5摩尔体积摩尔体积即为体积除以物质的量。升/摩（L/mol）6元素的相对原子量（A）指元素的平均原子量与碳12原子的原子质量的1/12之比。7物质的相对分子量（M）指物质的分子或特定单元平均质量与碳12原子质量的1/12之比。四溶液浓度的表示方法溶液浓度通常是指在一定量的溶液中所含溶质的量。在溶液配制中经常用到的溶液的浓度表示方法有如下几种。物质的量浓度（C）mol/l。质量分数物质的质量与混合物的质量之比。其量纲为 1。质量分数可用分数来表示，也可以用百分含量来表示。质量浓度指物质的质量除以混合物的体积，单位为：g/l。体积分数指合前物质的体积除以混合物质的体积，适用于溶质为液
20、体或气体。体积分数可以用分数或百分数来表示。比例浓度比例浓度包括容量比浓度和质量比浓度。容量比浓度是指液体试剂相互混合或用溶剂稀释时的表示方法，例如：（15）HCL溶液，表示1体积的浓HCL和5体积蒸馏水相混而成的溶液。质量比是指两种固体试剂相互混合的表示方法，例如：五一般溶液的配制和计算一般溶液是指非标准溶液，它在常用作为溶解样品、调节PH值，分离或掩蔽离子、显色等。配制一般精确度要求不高，试剂质量可以用托盘天平称量，体积用量铜筒量取即可。物质的量浓度溶液的配制和计算由CB= nB/V 和 nB= mB/MB得mB= CBV* MB/1000式子中：mB-固体溶质B的质量， g ；CB-要配
21、制溶液物质B的量浓度，mol/l ；V-要配制溶液的体积，ml ；MB-溶质B的摩尔质量，g/mol 。（1）溶质是固体物质例如：配制浓度为0.5mol/l碳酸钠溶液500ml。计算：由公式计算可知需要碳酸钠固体的质量为26.5克。配法：称取碳酸钠26.5克溶解于水中，并用水稀释至500毫升，摇匀，即可。（2）溶质是浓溶液配制浓度为0.5mol/l的HCL溶液500ml。（浓HCL的浓度为12mol/l）。根据溶液在稀释前后，其中溶质的物质的量不变，C浓V浓=C稀V稀V浓=C稀V稀/C浓质量分数溶液的配制和计算质量浓度溶液的配制和计算体积分数溶液的配制和计算比例浓度溶液的配制和计算六标准溶液的配制和计算已知准确浓度的溶液叫做标准溶液。配制标准溶液的方法、使用仪器、量具和试剂等方面都有严格的要求。标准溶液配制方法有直接法和间接法（标定法）。直接法准确称取一定质量的物质，溶解一定的水后转入容量瓶中，用水稀释至刻度，然后根据称取物质的质量和容量瓶的体积即可算出该标准溶液的准确浓度。能用直接配制法配制的化学试剂需要具备以下条件：（1）、纯度要高；（2）、性质要稳定
