1、葡萄糖氧化酶法的实验报告葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一:葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖 原理 葡萄糖氧化酶 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 试剂 1 /L 磷酸盐缓冲液 称取无水磷酸氢二钠 及无水磷酸二氢钾 溶于蒸馏水 800ml 中,用 1mol/L 氢氧化钠 调 pH 至 ,用蒸馏水定容至 1L 。 2 酶试剂 称取过氧化物酶 1 200U ,葡萄糖氧
2、化酶 1 200U , 4- 氨基安替比林 10mg ,叠氮钠 100mg ,溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中,用 1 mol/L NaOH 调 pH 至 ,用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ,置 4 保存,可稳定 3 个月。 3 酚溶液 称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中,用棕色瓶贮存。 4 酶酚混合试剂 酶试剂及酚溶液等量混合, 4 可以存放 1 个月。 5 12mmol/L 苯甲酸溶液 溶解苯甲酸 于蒸馏水约 800ml 中,加温助溶,冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖 ,溶于 12mmol/L 苯甲酸溶
3、液约 70ml 中,以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。 2h 以后方可使用。 7 5mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液 放于 100ml 容量瓶中,用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度,混匀。 操作步骤 1 自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定。 2 手工操作法取试管 3 支,按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 计算 参考范围 空腹血清葡萄糖为 /L 。 临床意义 1 生理性高血糖可见摄入高糖食物后,或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 病理性高血糖 糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 内分泌腺功能障碍:甲状腺功能亢进,
4、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖,现已归入特异性糖尿病中。 颅内压增高:颅内压增高刺激血糖中枢,如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。 脱水引起的高血糖:如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3 生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动。 4 病理性低血糖 胰岛 细胞增生或胰岛 细胞瘤等,使胰岛素分泌过多。 对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。 严重肝病患者,由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下,肝脏不能有效地调节血糖。 注意事项 1 葡萄糖氧化酶
5、对 - D 葡萄糖高度特异,溶液中的葡萄糖约 36% 为 型, 64% 为 型。葡萄糖的完全氧化需要 型到 型的变旋反应。国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶,可加速这一反应,但在终点法中,延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是 型,故须放置 2h 以上 ,待变旋平衡后方可应用。 2 葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。 3 测定标本以草酸钾氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾 6g ,氟化钠 4g 。加水溶解至 100ml 。吸取 到试管内,在 80
6、以下烤干使用,可使 2 3ml 血液在 3 4 天内不凝固并抑制糖分解。 4 本法用血量甚微,操作中应直接加标本至试剂中,再吸试剂反复冲洗吸管,以保证结果可靠。 5 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行测定。 评价 线性范围至少可达 /L ,回收率 94% 105% ,批内 CV 为 % % 。批间 CV 为 2% 左右,日间 CV 为 2% 3% 。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较, 73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 /L ,已糖激酶法均值 /L ,相关系数为 ,回归方程 y= 。 本法测定葡萄糖非常特异,从原理反应式中可知第一步是特异反应,第二步特异性较差。误差往往发生
7、在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等,可与色原性物质竞争过氧化氢,从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢,产生竞争性抑制,使测定结果偏低。然而,在本法的测定条件下,溶血标本血红蛋白的浓度达 10g/L ,黄疸标本胆红素浓度达 342 mol /L ,维生素 C 小于 30mg/L ,均不影响测定结果。氟化钠浓度达 2g/L 不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达 /L ,尿酸浓度达 /L ,肌酐浓度达 /L 。半胱氨酸浓度达 /L ,甘油三酯浓度达 /L ,胆固醇 mmol/L ,对测定结果均无显著影响。 左旋多巴 100mg/L ,维生素 C 5mg/L 以上,谷胱
8、甘肽 100mg/L 时,可引起负误差;半胱氨酸达 10mmol/L 时,产生相当 /L 葡萄糖的正误差。篇二:葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 实验名称:葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖 实验原理 葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢,后者在过氧化物酶的作用下,能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。醌化合物呈红色,其颜色深浅与葡萄糖含量成正比,在500nm出测定其吸光度,对照标准科计算出葡萄糖的含量。 实验准备 一、材料 (1)血清 (2)血浆:以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆 二、试剂 (1)试剂R1:磷酸盐缓冲液100mmol,苯酚10mmo
9、l/L。 (2)试剂R2:磷酸盐缓冲液100mmol,葡萄糖氧化酶16 000U/L,过氧化物酶1 000U/L,4-氨基安替比林/L。 (3)葡萄糖校准液:/L(1mg/ml) (4)生理盐水。 (5)工作试剂(酶酚混合液):取R1试剂与R2试剂混合在10ml试管中。三、器材 (1)试管和试管架 (2)移液枪 (3)722型分光光度计 (4)酶标仪 (5)恒温水浴箱 (6)酶标板 (7)板条 (8)生化培养箱 实验步骤 (1) 取酶标板一块,板条一条,设定空白孔A1,标准孔A2、A3,测定孔A4、A5,按实验结果 葡萄糖(GLU)浓度(mmol/L)=(A测定孔平均值/A校准孔平均值) 参考
10、值:/L 测得数据为 A2 A3 A4 A5/2 /L (+/2 实验讨论 移液枪操作熟练程度直接影响测定结果,吸样前需多练习 测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。 由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,会干扰过氧化物酶反应,出现结果假性偏低,因 此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量,但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。 本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应,第二步特异性较差,所以第二步易引 起误差。 葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖的反应15min达不到反应终点,应延长到25min1。 新生儿高胆红素血对葡萄糖氧化酶法测定血糖有负干扰影响,除去胆红素后可以较准确 测定血糖2。 参
11、考文献 1. 王彦明,实用医技杂志,2008(05) 2. 邹焕荣;何国坚;叶有玩,江西医学检验,2004(03)篇三:葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖背景知识 葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖 实验原理 葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林(4-AAP)和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。在500nm处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。 临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。 2.病理性高血糖 (1)糖尿病患者。(2)内分泌腺功能障碍:甲状腺功
12、能亢进,肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖,现已归入特异性糖尿病中。(3)颅内压增高:颅内压增高刺激血糖中枢,如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。(4)脱水引起的高血糖:如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3.生理性低血糖 见于长期饥饿和剧烈运动后。 4.病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见,依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等)。(1)胰岛细胞增生或胰岛细胞瘤等,使胰岛素分泌过多。(2)对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。(3)严重肝病患者,由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下,肝脏不能有效地调节血糖。
13、注意事项 1.葡萄糖氧化酶对-D葡萄糖高度特异,溶液中的葡萄糖约36%为型,64%为型。葡萄糖的完全氧化需要型到型的变旋反应。目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶,可加速这一反应,但在终点法中,延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是型,故须放置2h以上(最好过夜),待变旋平衡后方可应用。 2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量,这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。 3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g,氟化钠4g,加水溶解至100ml。吸取到试管内,在80摄氏度以下烤干使用,可使23ml血液在34d内不凝固并抑制糖分解。 4.本法用血量甚微,建议使用微量加样器进行加样。如果使用吸管加样,应直接加标本至试剂中,再吸试剂反复冲洗吸管,以减小误差的产生。 5.严重黄疸.溶血及乳糜烂血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行测定。 方法评价 本法线性范围至少可达L,回收率94%105%,批内CV为%,批间CV为2%左右,日间CV为2%3%。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较,相关系数为。