1、葡萄糖氧化酶法的实验报告葡萄糖氧化酶法的实验报告 篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 原理 葡萄糖氧化酶 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 试剂 1 /L 磷酸盐缓冲液 称取无水磷酸氢二钠 及无水磷酸二氢钾 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 调 pH 至 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 酶试剂 称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧
2、化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调 pH 至 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 保存，可稳定 3 个月。 3 酚溶液 称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 酶酚混合试剂 酶试剂及酚溶液等量混合， 4 可以存放 1 个月。 5 12mmol/L 苯甲酸溶液 溶解苯甲酸 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖 ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶
3、液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。 2h 以后方可使用。 7 5mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 操作步骤 1 自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定。 2 手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 计算 参考范围 空腹血清葡萄糖为 /L 。 临床意义 1 生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，
4、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3 生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动。 4 病理性低血糖 胰岛 细胞增生或胰岛 细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。 严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。 注意事项 1 葡萄糖氧化酶
5、对 - D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约 36% 为 型， 64% 为 型。葡萄糖的完全氧化需要 型到 型的变旋反应。国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是 型，故须放置 2h 以上 ，待变旋平衡后方可应用。 2 葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 3 测定标本以草酸钾氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾 6g ，氟化钠 4g 。加水溶解至 100ml 。吸取 到试管内，在 80
6、以下烤干使用，可使 2 3ml 血液在 3 4 天内不凝固并抑制糖分解。 4 本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。 5 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。 评价 线性范围至少可达 /L ，回收率 94% 105% ，批内 CV 为 % % 。批间 CV 为 2% 左右，日间 CV 为 2% 3% 。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较， 73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 /L ，已糖激酶法均值 /L ，相关系数为 ，回归方程 y= 。 本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生
7、在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达 10g/L ，黄疸标本胆红素浓度达 342 mol /L ，维生素 C 小于 30mg/L ，均不影响测定结果。氟化钠浓度达 2g/L 不干扰测定结果。标本中含尿素浓度达 /L ，尿酸浓度达 /L ，肌酐浓度达 /L 。半胱氨酸浓度达 /L ，甘油三酯浓度达 /L ，胆固醇 mmol/L ，对测定结果均无显著影响。 左旋多巴 100mg/L ，维生素 C 5mg/L 以上，谷胱
8、甘肽 100mg/L 时，可引起负误差；半胱氨酸达 10mmol/L 时，产生相当 /L 葡萄糖的正误差。篇二：葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 实验名称：葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖 实验原理 葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。 实验准备 一、材料 （1）血清 （2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆 二、试剂 （1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，苯酚10mmo
9、l/L。 （2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林/L。 （3）葡萄糖校准液：/L（1mg/ml） （4）生理盐水。 （5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂与R2试剂混合在10ml试管中。三、器材 （1）试管和试管架 （2）移液枪 （3）722型分光光度计 （4）酶标仪 （5）恒温水浴箱 （6）酶标板 （7）板条 （8）生化培养箱 实验步骤 （1） 取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按实验结果 葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值） 参考
10、值：/L 测得数据为 A2 A3 A4 A5/2 /L （+/2 实验讨论 移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习 测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。 由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因 此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。 本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引 起误差。 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖的反应15min达不到反应终点，应延长到25min1。 新生儿高胆红素血对葡萄糖氧化酶法测定血糖有负干扰影响,除去胆红素后可以较准确 测定血糖2。 参
11、考文献 1. 王彦明，实用医技杂志，2008（05） 2. 邹焕荣；何国坚；叶有玩，江西医学检验，2004（03）篇三：葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖背景知识 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 实验原理 葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。在500nm处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。 临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。 2.病理性高血糖 （1）糖尿病患者。（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功
12、能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3.生理性低血糖 见于长期饥饿和剧烈运动后。 4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。（1）胰岛细胞增生或胰岛细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
13、注意事项 1.葡萄糖氧化酶对-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为型，64%为型。葡萄糖的完全氧化需要型到型的变旋反应。目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。 2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g，氟化钠4g，加水溶解至100ml。吸取到试管内，在80摄氏度以下烤干使用，可使23ml血液在34d内不凝固并抑制糖分解。 4.本法用血量甚微，建议使用微量加样器进行加样。如果使用吸管加样，应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以减小误差的产生。 5.严重黄疸.溶血及乳糜烂血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。 方法评价 本法线性范围至少可达L，回收率94%105%，批内CV为%，批间CV为2%左右，日间CV为2%3%。葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，相关系数为。
