气相色谱法和液相色谱法.docx
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气相色谱法和液相色谱法
编辑:
自由小五001
气相色谱仪主要性能特点:
1.高效能:
可以分析沸点十分相近的组分和极为复杂的多组份混合物.例如,用毛细管可以分析轻油中150个组份.
2.高选择性:
通过选用高选择性的固定液可对性质极为相似的组份进行有效分离.,如同位素,烃类的异构体等.
3.高灵敏度:
配置高灵敏度的检测器可检测出10-11—10-13g/ml的物质,可用于痕量分析.
4.分析速度快:
一次分析周期几分钟或十几分钟,某些快速分析几秒钟可以分析若干组分.
5.应用范围广:
可以分析气体和易挥发的或可以转化为易挥发的液体和固体。
基本工作原理:
气相色谱仪根据试样中各组分在色谱柱中的气相和固定相间的分配系数不同,当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时,组分就在其中的两相间进行反复多次(103-106)的分配(吸附-脱附-放出),由于固定相对各种组分的吸附能力不同(即保存作用不同),因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同,经过一定的柱长后,便彼此分离;分离后的组分按保留时间的先后顺序进入检测器,检测器根据组份的物理化学性质将组份按顺序检测出来并自动记录检测信号,产生的信号经放大后,在记录器上描绘出各组分的色谱峰;最终依据试样中各组分保留时间(出峰位置)进行定性分析或依据响应值(峰高或峰面积)对试样中各组分进行定量分析。
气相色谱仪主要组成部分:
1.气路系统:
包括气源、气体净化、气体流速控制阀门和压力表等;
2.进样系统:
包括进样器、汽化室(将液体样品瞬间汽化为蒸气)等;
3.分离系统:
包括色谱柱和柱温控制装置(色谱柱箱)等;
4.检测系统:
包括检测器,控温装置等;
5.操作系统:
包括中文显示器、触摸式参数输入键盘。
6.记录系统:
包括放大器、数据处理系统(色谱工作站)等。
气相色谱使用注意事项
进样应注意问题
手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡(吸样时要慢、快速排出再慢吸,反复几次,10ul注射器金属针头部分体积0.6ul,有气泡也看不到,多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡,(指10μl注射器,带芯子注射器平感觉)进样速度要快(但不易特快),每次进样保持相同速度,针尖到汽化室中部开始注射样品。
安装色谱柱
1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。
2.填充柱有卡套密封和垫片密封,卡套分三种,金属卡套,塑料卡套,石墨卡套,安装时不易拧的太紧。
垫片式密封每次按装色谱柱都要换新的垫片(岛津色谱是垫片密封)。
3.色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。
防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。
4.毛细管色谱柱安装插入的长度要根据仪器的说明书而定,不同的色谱汽化室结构不同,所以插进的长度也不同。
需要说明的如果你用毛细管色谱柱采用不分流,汽化室采用填充柱接口这时与汽化室连接毛细管柱不能探进太多,略超出卡套即可。
氢气和空气的比例对FID检测器的影响
氢气和空气的比例应1:
10,当氢气比例过大时FID检测器的灵敏度急剧下降,在使用色谱时别的条件不变的情况下,灵敏度下降要检查一下氢气和空气流速。
氢气和空气有一种气体不足点火时发出“砰”的一声,随后就灭火,一般当你点火电着就灭,再点还着随后又灭是氢气量不足。
使用TCD检测器
1.氢气做载气时尾气一定要排到室外。
2.氮气做载气桥流不能设大,比用氢气时要小的多。
3.没通载气不能给桥流,桥流要在仪器温度稳定后开始做样前在给。
如何判断FID检测器是否点着火
不同的仪器判断方法不同,有基流显示的看基流大小,没有基流显示的用带抛光面的扳手凑近检测器出口,观察其表面有无水汽凝结。
如何判断进样口密封垫是否该换
进样时感觉特别容易,用TCD检测器不进样时记录仪上有规则小峰出现,说明密封垫漏气该更换。
更换密封垫不要拧的太紧,一般更换时都是在常温,温度升高后会更紧,密封垫拧的太紧会造成进样困难,常常会把注射器针头弄弯。
如何选择合适的密封垫
密封垫分一般密封垫和耐高温密封垫,汽化室温度超过300℃时用耐高温密封垫,耐高温密封垫的一面有一层膜,使用时带膜的面朝下。
怎样防止进样针不弯
很多做色谱分析工作的新手常常会把注射器的针头和注射器杆弄弯,原因是:
1.进样口拧的太紧,室温下拧的太紧当汽化室温度升高时硅胶密封垫膨胀后会更紧,这时注射器很难扎进去。
2.位置找不好针扎在进样口金属部位。
3.注射器杆弯是进样时用力太猛,进口色谱带一个进样器架,用进样器架进样就不会把注射器杆弄弯。
4.因为注射器内壁有污染,注射时将针杆推弯。
注射器用一段时间就会发现针管内靠近顶部有一小段黑的东西,这时吸样注射感到吃力。
清洗方法将针杆拔出,注入一点水,将针杆插到有污染的位置反复推拉,一次不行再注入水直到将污染物弄掉,这时你会看到注射器内的水变的浑浊,将针杆拔出用滤纸擦一下,再用酒精洗几次。
分析的样品为溶剂溶解的固体样时,进完样要及时用溶剂洗注射器。
5.进样时一定要稳重,急于求快会把注射器弄弯的,只要你进样熟练了自然就快了。
提高分离度的几种方法
1.增加柱长可以增加分离度.
2.减少进样量(固体样品加大溶剂量).
3.提高进样技术防止造成两次进样.
4.降低载气流速.
5.降低色谱柱温度.
6.提高汽化室温度.
7.减少系统的死体积,主要是色谱柱连接要插到位,不分流进样要选择不分流结构汽化室。
8.毛细管色谱柱要分流,选择合适的分流比.
综上所诉要根据具体情况在实验中摸索,比如降低载气流速、降低色谱柱温度又会使色谱峰变宽,因此要看色谱峰型来改变条件。
最终目的是达到分离好,出峰时间快。
气相色谱柱的安装
色谱柱的正确安装才能保证发挥其最佳的性能和延长使用寿命。
正确的安装请参考以下步骤:
步骤1.检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查气体过滤器和进样垫,保证辅助气和检测器的用气畅通有效。
如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物,需要将进样口的衬管清洗或更换。
步骤2.将螺母和密封垫装在色谱柱上,并将色谱柱两端要小心切平
步骤3.将色谱柱连接于进样口上色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的GC仪器不同而定。
正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性。
通常来说,色谱柱的入口应保持在进样口的中下部,当进样针穿过隔垫完全插入进样口后如果针尖与色谱柱入口相差1-2cm,这就是较为理想的状态。
(具体的插入程度和方法参见所使用GC的随机手册)避免用力弯曲挤压毛细管柱,并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦,以防柱身断裂受损。
将色谱柱正确插入进样口后,用手把连接螺母拧上,拧紧后(用手拧不动了)用扳手再多拧1/4-1/2圈,保证安装的密封程度。
因为不紧密的安装,不仅会引起装置的泄漏,而且有可能对色谱柱造成永久损坏。
步骤4.接通载气当色谱柱与进样口接好后,通载气,调节柱前压以得到合适的载气流速(见下表)。
柱前压设置为Psi
15m25m30m50m100m
0.20mm10-1520-3018-3040-6080-120
0.25mm8-1213-2215-2528-4555-90
0.32mm5-108-1510-2016-3032-60
0.53mm1-22-32-44-86-14
(以上仅为建议的起始设置,具体数值要依据实际的载气流速。
)将色谱柱的出口端插入装有己烷的样品瓶中,正常情况下,我们可以看见瓶中稳定持续的气泡。
如果没有气泡,就要重新检查一下载气装置和流量控制器等是否正确设置,并检查一下整个气路有无泄漏。
等所有问题解决后,将色谱柱出口从瓶中取出,保证柱端口无溶剂残留,再进行下一步的安装。
步骤5.将色谱柱连接于检测器上其安装和所需注意的事项与色谱柱与进样口连接大致相同。
如果在应用中系统所使用的是ECD或NPD等,那么在老化色谱柱时,应该将柱子与检测器断开,这样检测器可能会更快达到稳定。
步骤6.确定载气流量,再对色谱柱的安装进行检查注意:
如果不通入载气就对色谱柱进行加热,会快速且永久性的损坏色谱柱。
步骤7.色谱柱的老化色谱柱安装和系统检漏工作完成后,就可以对色谱柱进行老化了。
对色谱柱升至一恒定温度,通常为其温度上限。
特殊情况下,可加热至高于最高使用温度10-20℃左右,但是一定不能超过色谱柱的温度上限,那样极易损坏色谱柱。
当到达老化温度后,记录并观察基线。
初始阶段基线应持续上升,在到达老化温度后5-10分钟开始下降,并且会持续30-90分钟。
当到达一个固定的值后就会稳定下来。
如果在2-3小时后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势,那么有可能系统装置有泄漏或者污染。
遇到这样的情况,应立即将柱温降到40℃以下,尽快的检查系统并解决相关的问题。
如果还是继续的老化,不仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。
一般来说,涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间长,而弱极性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。
而PLOT色谱柱的老化方法有各不相同。
PLOT柱的老化步骤:
HLZPora系列250℃,8小时以上Molesieve(分子筛)300℃12小时Alumina(氧化铝)200℃8小时以上由于水在氧化铝和分子筛PLOT柱中的不可逆吸附,使得这两种色谱柱容易发生保留行为漂移。
当柱子分离过含有高水分样品后,需要将色谱柱重新老化,以除去固定相中吸附的水分。
步骤8.设置确认载气流速对于毛细管色谱柱,载气的种类首选高纯度氮气或氢气。
载气的纯度最好大于99.995%,而其中的含氧量越少越好。
如果您使用的是毛细管色谱柱,那么依照载气的平均线速度(cm/sec),而不是利用载气流量(ml/min)来对载气做出评价。
因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度。
推荐平均线速度值:
氮气:
10-12cm/sec氢气:
20-25cm/sec载气杂质过滤器在载气的管线中加入气体过滤装置不仅可以延长色谱柱寿命,而且很大程度的降低了背景噪音。
建议最好安装一个高容量脱氧管和一个载气净化器。
使用ECD系统时,最好能在其辅助气路中也安装一个脱氧管。
步骤9.柱流失检测在色谱柱老化过程结束后,利用程序升温作一次空白试验(不进样)。
一般是以10℃/min从50℃升至最高使用温度,达到最高使用温度后保持10min。
这样我们就会的到一张流失图。
这些数值可能对今后作对比试验和实验问题的解决有帮助。
在空白试验的色谱图中,不应该有色谱峰出现。
如果出现了色谱峰,通常可能是从进样口带来的污染物。
如果在正常的使用状态下,色谱柱的性能开始下降,基线的信号值会增高。
另外,如果在很低的温度下,基线信号值明显的大于初始值,那么有可能是色谱柱和GC系统有污染。
其他:
色谱柱的保存用进样垫将色谱柱的两端封住,并放回原包装。
在安装时要将色谱柱的两端截去一部分,保证没有进样垫的碎屑残留于柱中。
注意:
当空气中氢气的含量在4-10%时,就有爆炸的危险。
所以一定要保证实验室有良好的通风系统。
还可以用在海关检验检疫,化育赛事的兴奋剂检测,及总裁部门,科研单位,大学院校等
高效液相色谱仪使用说明
2.用途:
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
与试样预处理技术相配合,HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。
随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。
高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
3.测定原理
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
4.使用方法
4.1系统组成:
本系统由1个溶剂输送泵、手动进样阀、紫外-可见检测器、色谱数据工作站和电脑等组成,另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。
4.2准备
421准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声波脱气20min。
422根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱(注意方向)和定量环。
423配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用合适的0.45μm滤膜过滤。
324检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常,特别注意输液管道内是否有气泡。
4.3开机:
接通电源,依次开启不间断电源、溶剂输送泵、先将机器预热半小时,这时的流动相用85%甲醇溶液(已脱气),而且要时刻注意输液管道内是否有气泡,如有气泡要进行排气。
预热半小时后,开启检测器,待检测器自检结束后,打开打印机、电脑显示器、主机,最后打开色谱工作站。
4.4各种参数设定
.41波长设定:
在检测器显示初始屏幕时,按[func]键,用数字键输入所需波长值,按[Enter]键确认。
按[CE]键退出到初始屏幕。
442流速设定:
在输送泵显示初始屏幕时,按[func]键,用数字键输入所需的流速(柱在线时流速一般不超过1ml/min),按[Enter]键确认。
按[CE]键退出。
4.5更换流动相并排气泡
451将输送管道的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶(已排气)中;
452逆时针转动泵的排液阀180度,打开排液阀;
453按泵的[purge]键,pump指示灯亮,泵大约以2ml/min的流速冲洗,3min(可设定)后自动停止;
54将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。
455如管路中仍有气泡,则重复以上操作直至气泡排尽。
456如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下连接管,放入废液瓶中,设流速为5ml/min,按[pump]键,冲洗3min后再按[pump]键停泵,重新接上柱并将流速重设为规定值。
4.6平衡系统
461打开“在线色谱工作站”软件,输入实验信息并设定各项方法参数后,按下“数据收集”页的[查看基线]按钮。
462等度洗脱方式
621按输送泵的[pump]键,泵启动,pump指示灯亮。
用检验方法规定的流动相冲洗系统,一般最少需6倍柱体积的流动相。
622检查各管路连接处是否漏液,如漏液应予以排除。
623观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应不超过1MPa。
如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡,按3.5操作。
624观察基线变化。
如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min,噪声为<0.001mV时,可认为系统已达到平衡状态,可以进样。
47测定步骤
47计算校正因子
711用编辑实验参数编辑实验参数在编辑实验参数时,纪录图谱名要按照校正文件名的格式输入xxxx0101.
712用编辑积分定量参数对话框,选择单点外标法
713用编辑报告参数对话框编辑好相应的参数,选择校正实验检查框
714用编辑校正实验参数对话框编辑相应的校正参数及方式,校正文件名前缀必须与编辑∈实验参数的文件名前4位一致
715用编辑校正编辑定量峰表对话框编辑需要的校正的色谱峰的保留时间、样品名、每点的含量、峰标志及误差,编辑完成后确认,以后校正计算校正因子命令利用定量峰表进行峰的匹配及计算。
716用操作数据采集功能进行求校正因子的实验,将标准样品进样,进样前按检测器[zero]键调零,按软件中[零点校正]按钮校正基线零点,再按一下[查看基线]按钮使其弹起。
717用操作峰检测功能对图谱进行峰检测,完成后用操作校正计算校正因子及绘制标准曲线。
47进样
721进样前按检测器[zero]键调零,按软件中[零点校正]按钮校正基线零点,再按一下[查看基线]按钮使其弹起。
用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量
722进行样品分析,用操作数据采集对样品进行数据采集,并把编辑报告参数把校正文件名填入校正文件名编辑框,然后进测定样。
473用操作峰检测,对采集的色谱峰进行检测,之后工作站自动装入外标因子文件,计算出含量。
474打印报告
用打印分析报告,打印机输出分析报告。
48关机
样品测定结束后,将检测器关机,将输送管道的吸滤器放入装有85%甲醇溶液(已脱气)的储液瓶,进行测定系统清洗,半小时后关机。
5.注意事项
51流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purge键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。
原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。
处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键,清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。
打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。
即可将过滤器清洗干净。
关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。
52柱压高原因
(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;
(2)样品污染沉积。
处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
53既无压力指示,又无液体流过
原因
(1)泵密封垫圈磨损;
(2)大量气泡进入泵体。
处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
54压力波动大,流量不稳定.
原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。
处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气[2>。
如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗.
5出峰不佳,峰分叉。
原因
(1)色谱柱被污染;
(2)柱头填料塌陷。
处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。
对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。
去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平[2>。
柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。
56峰面积重复性不佳。
原因
(1)进样阀漏液;
(2)加样针不到位。
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。
日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
液相色谱仪使用及工作原理。
系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点。
1.进样系统
液相色谱仪
一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。
这对提高分析样品的重复性是有益的。
2.输液系统
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。
高压泵的一般压强为l.47~4.4X10Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。
流动相贮存器和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。
这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。
3.分离系统
该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。
色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管),内径为2~5mm,由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?
)和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样),或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。
因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。
例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。
另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。
基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。
这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。
根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大。
这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。
再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。
液相色谱仪常见故障处理
1、气泡溢出
流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。
原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓
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- 色谱