菌液稀释级数确认的方案.docx
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菌液稀释级数确认的方案
菌液稀释级数确认方案
888888888有限公司
8888年88月
1目的
2适用范围
3依据
4验证时间
5验证小组成员及职责
6验证所需要仪器设备、培养基、菌种及关键操作文件
7接受标准
8测试方法
9测试结果
10异常情况及处理
11结论
12再验证周期
1目的
建立菌液稀释级数确认方案,确定含菌量为50~100cfu/ml或10~100cfu/ml时,各试验菌应当稀释的倍数或级数。
2适用范围
2.1本确认方案适用于验证试验或日常工作中涉及的菌种稀释操作。
2.2确认对象为:
50~100cfu/ml:
大肠埃希菌MCC(B)44102、金黄色葡萄球菌CMCC(B)2600、3枯草芽孢杆菌CMCC(B)6350、1白色念珠菌霉CMCC(F)9800。
1
10~100cfu/ml:
乙型副伤寒沙门菌CMCC(B)5009。
4
3依据
《药品GMP》现行版、
《药品GMP指南》国家药监局认证中心编写2011年版《中国药典》现行版。
《中国药品检验标准操作规程》现行版。
4验证时间
验证方案于2014年月日批准后,整个验证活动应在10个工作日内完成。
5验证小组成员及职责
小组职务
岗位
姓名
责任
组长
化验室主任主任
编制验证方案,编制验证报告;进行验证过程及结论的评价与分析;组织协调实施本验证工作。
组员
QA主管
对编制的方案进行审核
质量部部长
批准再验证方案;评价与分析确认结果;对验证报告进行最终结论。
QA
监督和复核方案实施过程。
微检QC
负责方案的执行。
6验证所需要的仪器设备、培养基、菌种及关键操作文件
6.1验证需用仪器设备
器具名称
规格型号
检定日期
检定单位
有效期
细菌培养箱
霉菌培养箱
高压蒸汽灭菌器
架盘天平
水浴锅
净化工作台(阳性)
6.2试验培养基
名称
生产厂家
批号
有效期
营养琼脂培养基
营养肉汤培养基
玫瑰红钠琼脂培养基
改良马丁培养基
改良马丁琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂培养基
6.3试验菌种
菌珠名称
来源
购入日期
传代次数
大肠埃希菌
MCC(B)44102
金黄色葡萄球菌
CMCC(B)26003
枯草芽孢杆菌
CMCC(B)63501
白色念珠菌霉
CMCC(F)98001
乙型副伤寒沙门菌
CMCC(B)50094
6.4验证所需要关键文件及存放地方
关键资料名称
存放地点
《细菌培养箱使用和清洁操作规程》
《霉菌培养箱使用和清洁操作规程》
《高压蒸汽灭菌器使用和清洁操作规程》
《舒筋活血丸质量标准及检验方法》
《微生物限度检查法操作规程》
7接受标准
7.1阴性对照组测试结果应为阴性。
7.2各菌种的菌落形态在不同稀释级的平皿上应固定、一致。
7.3各菌种的菌落数在各稀释级应呈等比线性,除高级稀释未检出菌落外,相邻稀释级的菌落数应呈约10倍关系。
8测试方法
按药典方法制备菌液,取1ml菌液在若干支含9ml的0.9%无菌氯化钠溶液中,逐级稀释成100、10-1、10-2、⋯⋯10-8级数的菌悬液。
分别取各级1ml,注入平皿,倾倒在琼脂培养,按平皿计数法培养,测定各级菌落数。
该试验独立平行进行3次。
8.1菌液制备
8.1.1取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物分别接种至3支10ml营养肉汤培养基中,经32.5℃±2.5℃培养18~24h,备用。
8.1.2取色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中,经25.5℃±2.5℃培养24~48h,备用。
8.2无菌氯化钠溶液的制备
至少准备9ml/支×9支0.9%的无菌氯化钠溶液。
8.3稀释
8.3.1分别取1ml菌液(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门菌、白色念珠菌)在1支含9ml0.9%的无菌氯化钠溶液中,用吸管吹打约10下,即成10-1级,吸取该管菌液1ml至下支含9ml0.9%的无菌氯化钠溶液中,用刻度管吹打约10下,即成10-2级,依次,逐级稀释直至10-8级数,每递增一个稀释级,必须换一个吸管。
8.4注皿
分别吸取上述各菌各级菌悬液1ml于平皿中,平行制备2个皿,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门菌倾倒约15ml的营养琼脂培养基,白色念珠菌倾倒玫瑰红钠琼脂培养基。
按《微生物限度检查法操作规程》中的平皿法,培养,测定各皿各菌菌落数。
9测试结果:
见附表1、2、3。
10
QA
异常情况及处理:
质量负责人:
验证小组组长:
11结论
11.1按照本确认方案,确定了各菌达到规定含菌量时的稀释级别
大肠埃希菌
MCC(B)44102金黄色葡萄球菌
CMCC(B)26003枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501白色念珠菌霉CMCC(F)98001乙型副伤寒沙门菌
50~100cfu/ml
10~100cfu/ml
CMCC(B)50094
质量负责人:
验证小组组长:
QA:
12再验证周期
12.1当操作人员或接种方法发生变化时,需要对本方案进行调整后作方法学再验证。
12.2国家相关微生物限度检查标准修改后需要对本方法重新进行再验证。
12.3定期验证暂定为二年
附表1
菌液稀释级别确认记录(单位:
cfu)
第1次试验
试验日期:
报告日期:
培养皿性质
营养琼脂培养基
玫瑰红钠
培养基
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
乙型副伤寒沙门菌
白色念珠菌
培养温度℃
培养时间
级数
皿号
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
10-0
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
-6
10-6
10-7
10-8
接受标准
50~100cfu/ml
10~
100cfu/ml
50~
100cfu/ml
符合要求的级数
分析:
1、阴性对照组,即10-0级,测试结果应为阴性。
结果:
□符合要求□不符合要求
附表2
菌液稀释级别确认记录(单位:
cfu)
第2次试验
试验日期:
报告日期:
培养皿性质
营养琼脂培养基
玫瑰红钠
培养基
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
乙型副伤寒沙门菌
白色念珠菌
培养温度℃
培养时间
级数
皿号
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
10-0
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
-6
10-6
10-7
10-8
接受标准
50~100cfu/ml
10~
100cfu/ml
50~
100cfu/ml
符合要求的级数
分析:
1、阴性对照组,即10-0级,测试结果应为阴性。
结果:
□符合要求□不符合要求
附表3
菌液稀释级别确认记录(单位:
cfu)
第3次试验
试验日期:
报告日期:
培养皿性质
营养琼脂培养基
玫瑰红钠
培养基
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
乙型副伤寒沙门菌
白色念珠菌
培养温度℃
培养时间
级数
皿号
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
1
2
平
均
10-0
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
-6
10-6
10-7
10-8
接受标准
50~100cfu/ml
10~
100cfu/ml
50~
100cfu/ml
符合要求的级数
分析:
1、阴性对照组,即10-0级,测试结果应为阴性。
结果:
□符合要求□不符合要求
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- 稀释 级数 确认 方案
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