常用培养基的配制.docx
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常用培养基的配制
附录三常用培养基的制备
目录
一、肉浸液肉汤
二、营养琼脂
三、鲜血琼脂
四、半固体培养基
五、明胶培养基
六、乳糖胆盐发酵培养基
七、乳糖发酵培养基
八、缓冲蛋白胨水(BP)
九、氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
十、四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
十一、亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
十二、GN增菌液
十三、肠道菌增菌肉汤
十四、HE琼脂
十五、SS琼脂
十六、麦康凯琼脂
十七、伊红美蓝琼脂(EMB)
十八、三糖铁琼脂(TSI)
一、肉浸液肉汤
(一)成份
十九、三糖铁琼脂(换用方法)
二十、血消化汤
二十一、克氏双糖铁琼脂(KI)
二十二、克氏双糖铁琼脂(换用方法)
二十三、动力硝酸盐增养基(A法)(SPS)
二十四、动力硝酸盐培养基(B法)
二十五、马丁氏肉汤
二十六、察氏培养基
二十七、马铃薯萄萄糖琼脂(PDA)
二十八、马铃薯琼脂
二十九、Elek氏培养基(毒索测定用)
三十、胰蛋白胨水
三十一、3.5%氯化钠三糖铁琼脂
三十二、牛肉(或中心)消化汤
三十三、0.1%蛋白胨水稀释剂
一、肉浸液肉汤
(一)成份
绞碎牛肉500g
蛋白胨10g
磷酸氢二钾2g
氯化钠5g
蒸馏水1000ml
(二)制法将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000ml,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。
加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4~7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌30分。
(三)用途一般细菌培养用。
二、营养琼脂
(一)成份
肉水1000ml
蛋白胨10g
磷酸氢二钾1g
氯化钠5g
琼脂20~30g
(二)制法先将琼脂剪碎,用冷水洗净后加入肉汤中,划线补充水分,加热溶化。
校正pH7.4~7.6,用纱布夹棉花过滤至透明。
分装中试管或三角瓶。
高压灭菌121℃20分,灭菌后中试管摆成斜面。
(三)用途一般细菌的分离培养,纯培养,观察菌落性状及保存菌种用。
为特殊培养基的基础。
三、鲜血琼脂
(一)成份
营养琼脂
脱纤维鲜血(马、绵羊、牛、家兔)5~8%。
(二)制法将灭菌的营养琼脂加热溶化,冷至45~50℃时,加入无菌脱纤维鲜血5~8%,分装试管,即摆成斜面或倾注平皿,待凝固后,置37℃培养1日,有污染者废弃,无菌者保存于冰箱备用。
无菌脱纤维鲜血:
以无菌手术采取健康动物(马、绵羊、牛用颈静脉采血、家兔用心脏采血)血液,加到盛有玻璃殊的三角瓶内,摇匀5~10分钟,置冰箱中备用。
(三)用途用于分离培养和保存菌种。
四、半固体培养基
(一)成份
肉汤培养基(pH7.4~pH7.6)100ml
琼脂0.3g
(二)制法将琼脂加入肉汤培养基中加热溶化,校正pH至7.6,滤过后分接于试管内,以15磅高压灭菌20~30分钟,作成高层,经无菌检查合格后,置冰箱中保存备用。
(三)用途菌种保存,观察细菌的运动性。
五、明胶培养基
(一)成分
普通肉汤100ml明胶12~15g(冬天少用,夏天多用)
(二)制法将上述成分加热溶化,校正pH至7.6,趁热过滤,分装试管,用8磅15分钟灭菌或流通蒸气100℃,30分钟间歇,灭菌,经无菌检验合格的保存于冰箱内备用。
六、乳糖胆盐发酵培养基
(一)成份
蛋白胨20g
猪胆盐(或牛、羊肠盐)5g
乳糖10g
0.04%溴甲酚紫水溶液25ml
蒸馏水1000ml
(二)制法将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH7.4,加入指示剂,分装每管10ml,并先放入一个小例立的管,115℃高压灭菌15分钟。
注:
双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
七、乳糖发酵培养基
(一)成份
蛋白胨20g
乳糖10g
0.04%溴甲酚紫水溶液25ml
蒸馏水1000ml
(二)制法:
将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH7.4,加入指示剂,按检验要求分装30ml、10ml或3ml,并放入一个倒立的小管,115℃高压灭菌15分钟。
注:
1、双料乳糖发酵除蒸馏水外,其他成分加倍。
2、30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
八、缓冲蛋白胨水(BP)
(一)成份
蛋白胨10g
磷酸二氢钾1.5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)9g
氯化钠5g
蒸馏水1000ml
(二)制法按上述成分称好后,装入大烧瓶,121℃高压灭菌15分钟。
用时无菌分装,每瓶225ml。
注:
本培养基供沙门氏菌前增菌用。
九、氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
(一)成份
1.甲液:
胰蛋白胨5g
氯化钠8g
磷酸二氢钾1.6g
蒸馏水1000ml
2.乙液:
氯化镁(化学纯)40g
蒸馏水100ml
3.丙液:
0.4%孔雀绿水溶液
(二)制法分别按上述成分配好后,121℃高压,灭菌15分钟备用。
临用时取甲液90ml、乙液9ml、丙液0.9ml,以灭菌操作混合即可。
注:
本培养基亦称Rappaprt10(R10)增菌液。
十、四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
(一)成份
1.基础培养基
肠胨5g
胆盐1g
碳酸钙10g
硫代硫酸钠30g
蒸馏水1000ml
2.碘溶液
碘6g
碘化钾5g
蒸馏水20ml
(二)制法将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100ml。
分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀。
121℃高压灭菌15分钟临用时每100ml基础培养基中加入碘溶液2ml、0.1%煌绿溶液1ml。
十一、亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
(一)成份
蛋白胨5g
乳糖4g
亚硒酸氢钠4g
磷酸二氢钾5.5g
磷酸二氢钾4.5g
L—胱氨酸0.01g
蒸馏水1000ml
1%L—胱氨酸—氢氨化钠溶液的配法:
称取L—胱氨酸0.1g(或DL—胱氨酸0.2g),加1N氢氧化钠1.5ml,使溶解,再加入蒸馏水8.5ml即成。
(二)制法将除亚硒酸氢钠和L—胱氨酸以外的各成份溶解于900ml蒸馏水中,加热煮沸,冷却后备用。
另将亚硒酸氢钠溶解于100ml蒸馏水中,加热煮沸,冷却后以无菌操作与上液混合。
再加入1%L—胱氨酸—氢氧化钠溶液1ml。
分装于灭菌瓶中,每瓶100ml,pH应为7.0±0.1。
十二、GN增菌液
(一)成份
胰蛋白胨20g
葡萄糖1g
甘露醇2g
柠檬酸钠5g
去氧胆酸钠0.5g
磷酸氢二钾4g
磷酸二氢钾1.5g
氯化钠5g
蒸馏水1000ml
(二)制法按上述成分配好,加热使溶解,校正pH7.0。
分装每瓶225ml,115℃高压灭菌15分钟。
十三、肠道菌增菌肉汤
(一)成份
蛋白胨10g
葡萄糖5g
牛胆盐20g
磷酸氢二钠8g
磷酸二氢钾2g
煌绿0.015g
蒸馏水1000ml
(二)制法按上述成分配好,加热使溶解,校正pH7.2。
分装每瓶30ml,115℃高压灭菌15分钟。
十四、HE琼脂
(一)成份
1.基础液:
肘胨12g
牛肉膏3g
乳糖12g
蔗糖12g
水杨苷2g
胆盐20g
氯化钠5g
琼脂10g~20g
0.4%溴香酚蓝溶液16ml
蒸馏水1000ml
2.Andrade指示剂:
酸性复红0.5g
1N氢氧化钢溶液16ml
蒸馏水100ml
将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液,数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2ml。
3.甲液:
硫代硫酸钠34g
柠檬酸铁铵4g
蒸馏水100ml
4.乙液:
去氧胆酸钠10g
蒸馏水100ml
(二)制法将前面八种成分溶解于400ml蒸馏水内作为基础液,将琼脂加入于600ml蒸馏水内,加热溶解。
加入甲液20ml和乙液20ml于基础液内,校正pH7.5。
再加入Andrade指示剂20ml,并与琼脂液合并,待冷至50~55℃,倾注平板。
注:
此培养基不可高压灭菌
十五、SS琼脂
(一)成份
1.基础培养基
牛肉膏5g
肘胨5g
三号胆盐3.5g
琼脂17g
蒸馏水1000ml
制法:
将牛肉膏、肘胨和胆盐溶解于400ml蒸馏水中,将琼脂加入于600ml蒸馏水中,煮沸使其溶解,再将二液混合,121℃高压灭菌15分钟,保存备用。
2.完全培养基
基础培养基1000ml
乳糖10g
柠檬酸钠8.5g
硫代硫酸钠8.5g
10%柠檬酸铁溶液10ml
1%中性红溶液2.5ml
0.1%煌绿溶液0.22ml
制法:
加热溶化培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
注:
①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48小时内使用。
②煌绿溶液配好后应在10天以内使用。
③可以购用SS琼脂的干燥培养基。
十六、麦康凯琼脂
(一)成份
蛋白胨17g
肘胨3g
猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g
氯化钠5g
琼脂17g
乳糖10g
0.01%结晶紫水溶液10ml
0.5%中性红水溶液5ml
蒸馏水1000ml
(二)制法
1.将蛋白胨、肘胨、胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中,校正至pH7.2。
将琼脂加入于600ml蒸馏水中,加热溶解。
将两液合并,分装于烧瓶内,121℃高灭菌15分钟备用。
2.临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖。
冷至50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。
注:
结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
十七、伊红美蓝琼脂(EMB)
(一)成份
蛋白胨10g
乳糖10g
磷酸氢二钾2g
琼脂17g
2%伊红y溶液20ml
0.65%美蓝溶液10ml
蒸馏水1000ml
(二)制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH7.1,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15分钟备用。
临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷却至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。
十八、三糖铁琼脂
(一)成份
蛋白胨20g
牛肉膏5g
乳糖10g
蔗糖10g
葡萄糖1g
氯化钠5g
硫酸亚铁铵[Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O]0.2g
硫代硫酸钠0.2g
酚红0.025g
琼脂12g
蒸馏水1000ml
(二)制法将除琼脂和酚红以外的各成份溶解于蒸馏水中,pH7.4。
加入琼脂,加热煮沸,以融化琼脂。
加入0.2%酚红水溶液12.5ml,摇匀。
分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。
121℃高压灭菌15分钟。
放置高层斜面备用。
十九、三糖铁琼脂(换用方法)
(一)成份
蛋白胨15g
肘胨5g
牛肉膏3g
酵母膏3g
乳糖10g
蔗糖10g
葡萄糖1g
氯化钠5g
硫酸亚铁0.2g
疏代硫酸钠0.3g
琼脂12g
酚红0.025g
蒸馏水1000ml
(二)制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中校正pH7.4。
加入琼脂,加热煮沸,以融化琼脂。
加入0.2%酚红水溶液12.5ml,摇匀。
分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。
121℃高压灭菌15分钟,放置高层斜面备用。
二十、血消化汤
(一)成份
绞碎猪胃100g
绞碎猪血块100g
磷酸二氢钾1g
2N碳酸钠溶液50ml
浓盐酸10ml
蒸馏水1000ml
(二)制法
1.洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机续碎。
2.用绞肉机将猪血块绞碎。
3.将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃、猪血块和盐酸,置55℃水浴中24小时,常加以摇动。
4.从水浴锅内取出,加入2N碳酸钠液5ml,煮沸10分钟,置于冰箱内一夜。
5.吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入2N碳酸钠溶液45ml,煮沸,校正pH7.2~7.4。
6.用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20分钟。
注:
①本培养基不含糖可供作鉴别培养基的基础,不需加蛋白胨和氯化钠。
②2N碳酸钠溶液的配法:
无水碳酸钠10.6g,溶于1000ml蒸馏水中。
二十一、克氏双糖铁琼脂(KI)
(一)成份
下层:
血消化汤(pH7.6)500ml
琼脂2g
葡萄糖1g
0.2%酚红溶液5ml
上层:
血消化汤(pH7.6)500ml
琼脂6.5g
硫代硫酸钠0.1g
硫酸亚铁按0.1g
乳糖5g
0.2%酚红溶液5ml
(二)制法
1.取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别装入琼脂,加热溶解。
2.分别加入其他各种成分。
将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌试管内,(12×100mm),每管约2ml。
10磅高压灭菌15分钟。
3.将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固。
4.俟下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5ml,放成斜面。
二十二、克氏双糖铁琼脂(换用方法)
(一)成份
蛋白胨20g
牛肉膏3g
酵母膏3g
乳糖10g
葡萄糖1g
氯化钠5g
柠檬酸铁铵0.5g
疏代硫酸钠0.5g
琼脂12g
酚红0.025g
蒸馏水1000ml
(二)制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH7.4。
加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。
加入0.2%酚红水溶液12.5ml,摇匀。
分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层。
121℃高压灭菌15分钟。
放置高层斜面备用。
二十三、动力—硝酸盐培养基(A法)
(一)成份
蛋白胨5g
牛肉膏3g
硝酸钾1g
琼脂3g
蒸馏水1000ml
(二)制法加热溶解,校正pH7.0。
分装试管,每管10ml,121℃高压灭菌15分钟。
二十四、动力—硝酸盐培养基(B法)
(一)成份
蛋白胨5g
牛肉膏3g
硝酸钾5g
磷酸氢二钠2.5g
半乳糖5g
甘油5g
琼脂3g
蒸馏水1000ml
(二)制法将上各成份混合,加热溶解,校正pH7.4。
分别装试管,121℃高压灭菌15分钟。
二十五、马丁氏肉汤
(一)成份
猪胃数个过滤清水(普通水)150ml
纯盐酸15ml
(二)制法
取猪胃去掉筋膜及脂肪,以绞肉机绞碎,每300g猪胃加盐酸15ml,过滤水150ml,于50℃消化24小时(每小时搅拌1~2次),取出后加热至80℃,使消化作用停止,并用NaOH中和,调PH至7.2,用滤纸过滤,分装试管或小三角烧瓶,15磅高压15分钟灭菌。
二十六、察氏培养基
(一)成份
硝酸钠3g
磷酸氢二押1g
梳酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g
氯化钾0.5g
硫酸亚铁0.01g
蔗糖30g
琼脂20g
蒸馏水1000ml
(二)制法加热溶解,分装后121℃灭菌20分钟。
(三)用途青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。
二十七、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)
(一)成份
马铃薯(去皮切块)300g
葡萄糖20g
琼脂20g
蒸馏水1000ml
(二)制法将马铃薯去皮切块,加1000ml蒸馏水,煮沸10~20分钟。
用纱布过滤加蒸馏水至1000ml。
加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装,121℃高压灭菌20分钟。
(三)用途:
分离培养霉菌。
二十八、马铃薯琼脂
(一)成份
马铃薯(去皮切块)200g
琼脂20g
蒸馏水1000ml
(二)制法同马铃薯葡萄糖琼脂。
(三)用途鉴定霉菌用。
二十九、Elek氏培养基(毒素测定用)
(一)成份
肘胨20g
麦芽糖3g
乳糖0.7g
氯化钠5g
琼脂15g
40%氢氧化钠溶液1.5ml
蒸馏水1000ml
(二)制法用500ml蒸馏水溶解除琼脂外的成份,煮沸,并用滤纸过滤。
用1N氢氧化钠校正pH7.8。
用另外500ml蒸馏水加热溶解琼脂。
将两液混合,分装试管10ml或20ml。
121℃
高压灭菌15分钟。
临用时加热溶化琼脂倾注平板。
三十、胰蛋白胨水
(一)成份
胰蛋白胨10g
蒸馏水1000ml
(二)制法将上述成份溶解,校正pH7.0。
分装试管,121℃高压灭菌15分钟。
三十一、3.5%氯化钠三糖铁琼脂
(一)成份
三糖铁琼脂1000ml
氯化钠30g
(二)制法按本附录十八或十九配制三糖铁琼脂,再加入氯化钠30g,分装试管,121℃高压灭菌15分钟。
放置高层斜面备用。
三十二、牛肉(或牛心)消化汤
(一)成份
绞碎牛肉(或牛心)1000g
15%氢氧化钠溶液27ml
胰蛋白酶40ml
氯仿1ml
氯化钠10g
蒸馏水200ml
(二)制法
1.称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15分钟;
2.加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷却至40℃;
3.加胰蛋白酶、氯仿,在36±1℃放置4~5小时,每小时摇动一、二次;
4.4小时后,吸取上层液5ml于试管中,加1%硫酸铜溶液0.1ml、4%氢氧化钠溶液5ml,混合之。
若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出;
5.加入15%乙酸溶液45ml,对pH试纸呈酸性;
6.煮沸15分钟,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜;
7.次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸;
8.校正pH7.0~7.6(加15%氢氧化钠液约10ml)加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20分钟。
注:
①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需要加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制:
称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500ml,蒸馏水1500ml,混合之,装入玻塞瓶内。
每日摇匀三次,三天后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用。
三十三、0.1%蛋白胨水稀释剂
(一)成份
蛋白胨1g
蒸馏水1000ml
(二)制法溶解蛋白胨于蒸馏水中,校正pH至7.0,121℃灭菌15分钟。
Yeastextract3酵母膏
Maltextract3
Peptonefromsoybeans5
Glucose10
Agar15
Distilledwater1000
MAmedium(Ichimura,1979)
Workingsolution
[g/l]
NaNO3
0.05
KNO3
0.1
Ca(NO3)2·4H2O
0.05
Na2SO4
0.04
MgCl2.6H2O
0.05
Β-Sodiumglycerophosphate
0.1
Na2EDTA
0.005
FeCl3.6H2O
0.0005
MnCl2.4H2O
0.005
ZnCl2
0.0005
CoCl2.6H2O
0.005
Na2MoO4.2H2O
0.0008
H3BO3
0.02
Bicine
0.5
Distilledwater
1000ml
pH
8.6
F/2培养基
WORK(mg/L)
Mother(g/L)
A:
NaNO3
75
75
B:
NaH2PO4·H2O
5
5
C:
Na2SiO3·9H2O
20
20
D:
Na2EDTA
4.36
4.36
E:
FeCl3·6H2O
3.16
3.16
F:
CuSO4·5H2O
ZnSO4·7H2O
CoCl2·6H2O
MnCl·4H2O
Na2MO4·2H2O
0.01
0.01
0.023
0.023
0.012
0.012
0.18
0.18
0.07
0.07
G:
B1
0.1ug/L
0.1mg/L
B12
0.5ug/L
0.5mg/L
生物素
0.5ug/L
0.5mg/L
H:
海盐
24g/L
对于藻体的高密度培养,将F/2培养基的A改为乙酸铵:
0.5g/L,B改为NaH2PO4:
0.2g/L
SEMedium
Workingsolution(g/l)
NaNO3
0.25g
K2HPO4.3H2O
0.075g
MgSO4.7H2O
0.075g
CaCl2.2H2O
0.025g
KH2PO4
0.175g
NaCl
0.025
Soilextract*
40ml
FeCl3·6H2O
0.005
Fe—EDTA
1ml
A5solution*
1
distilledwater
958
SoilExtract(土壤提取液)配置方法
取花园土未施过肥0。
5kg置于烧杯或三角瓶中,加入蒸馏水1000毫升,瓶口用透气塞封口,在水浴中沸水加热2小时,冷却数小时,在无菌条件下过滤,取上清液,将灭菌蒸馏水加入上清液至总体积1000毫升。
土壤提取液保存在4ºC备用。
*CompositionoftheA5solution
Addto100mlofdistilledwater:
H3BO3
286mg
MnCl2.4H2O
181mg
ZnSO4.7H2O
22mg
CuSO4.5H2O
Na2MoO4·2H2O
7.9mg
39mg
(NH4)6Mo7O24.4H2O
3.9mg
EDTA-Fe的配置方法:
将EDTA和FeCl3·6H2O分别溶于水和HCl(0.1N),混匀即可。
Na2EDTA
1g
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- 常用 培养基 配制