兽医生物制品黄淑坚.docx
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兽医生物制品黄淑坚
绪论
1、生物制品与兽医生物制品
1、生物制品:
利用微生物及其代谢产物、寄生虫及其代谢产物、动物毒素→抗毒素、人或动物的组织、血液等经过加工处理制成用于人或动物相关疾病的诊断、预防、治疗的制剂。
2、兽医生物制品:
专用于动物相关疾病的诊断、预防、治疗的制剂。
2、生物制品的发展史
3、生物制品在生产中的应用
1、诊断;2、预防;3治疗
第1章常用兽医生物制品的种类
(1)预防用兽医生物制品
1、灭活苗(灭能苗):
利用物理或化学方法将病原微生物灭活使其丧失致病性和毒性加入佐剂制成;
2、弱毒苗:
利用物理、化学或微生物方法处理或传代微生物,使其失去致病性或仅造成隐性感染,大量繁殖后加入冻干保护剂制成;
3、类毒素:
细菌的外毒素经甲醛处理脱毒后免疫原性基本保持不变,加入佐剂制成(例:
破伤风明矾沉降类毒素);
4、亚单位疫苗:
通过物理、化学方法提取病原微生物表面保护性抗原,加入佐剂制成;
5、合成肽疫苗:
根据病原性微生物表面保护性Ag的氨基酸排列顺序,体外合成后加入佐剂制成;
6、抗独特型抗体疫苗:
根据免疫网络学说原理,利用第一抗体分子中的独特抗原决定簇(抗原表位)所制备的具有抗原的“内影像”结构的第二抗体。
该抗体具有模拟抗原的特性,故称之为抗独特型疫苗;
7、基因工程苗:
包括基因缺失苗(伪狂犬基因缺失苗)、基因表达疫苗;
8、多联苗:
利用多种微生物制成疫苗;
9、多价苗:
利用一种微生物多种血清型(或者血清亚型)制成疫苗;
10、同源疫苗:
一种微生物制成疫苗免疫动物后,用于预防该微生物强毒的感染与攻击,这种疫苗称为同源疫苗;
11、异源疫苗:
①用不同种微生物的菌(毒)株制备的疫苗,接种动物后能使其获得对疫苗中并未含有的病原体产生抵抗力;②用同一种中一种型(生物型或动物源型)微生物的菌(毒)株制备的疫苗,接种动物后能使其获得对异型病原体的抵抗力。
例:
NDIV→PEG流行性腹泻;HTV→MDV鸡马立克病毒;猪瘟兔化弱毒苗→牛病毒性腹泻;
表1-1灭活疫苗与弱毒疫苗的比较
种类
优点
缺点
灭活疫苗
比较安全,一般不发生全身性副作用,无返祖现象;有利于制备多价、多联等混合疫苗;制品稳定,受外界条件影响小,有利于运输、保存
接种次数多、剂量大,免疫途径必须注射,不产生局部免疫;需要高浓度抗原物质,生产成本高。
弱毒疫苗
通常一次免疫即可成功,可采取多种感染途径(注射、滴鼻、饮水、喷雾、划痕)等。
引起整个免疫应答,产生广谱性免疫及局部和全身性抗体。
免疫力持久,有利于清除局部野毒;产量高,生产成本低。
接种次数多、剂量大,免疫途径必须注射,不产生局部免疫;需要高浓度抗原物质,生产成本高。
备注:
FMDV口蹄疫、SFV猪瘟用乙烯亚胺类衍生物(结晶紫)制灭活苗
其它细菌大都用0.3%甲醛灭活
病毒0.5%甲醛灭活
毒素0.4~0.7%甲醛灭活
大多数细菌置于37℃培养灭活
佐剂的运用:
1、油乳佐剂(病毒疫苗);2、Al(OH)3胶(细菌疫苗);3、蜂胶(细菌)
灭活剂:
1、甲醛;2、结晶紫(猪瘟);3、乙烯亚胺类衍生物
(2)治疗用兽医生物制品
1、抗病血清:
Ag3~5次→动物→产生Ab,Ab主要存在于血液的血清中→提取血清→加入抗菌药物、防霉剂
2、抗毒素:
类毒素3~5次→动物→产生Ab→提取血清→加入抗菌药物、防霉剂
3、高免卵黄液:
Ag3~5次→母禽→产生Ab→移行至母禽产下蛋的蛋黄中→提取蛋黄→加入1~2倍生理盐水(含有抗菌药物、防霉剂)
(3)诊断用兽医生物制品
1、标准Ag2、标准Ab
第2章兽医生物制品的发展趋势
1、GMP(生产与管理)
2、从第一代疫苗(灭、弱、亚、类)→第二代疫苗(基因工程)→第三代疫苗(合成肽苗、抗独特型抗体疫苗)
3、更加注重诊断用兽医生物制品
4、向更浓缩、纯度更高方向发展
5、更加注重免疫佐剂、灭活剂的研究
6、更加注重产品的质量与冷链过程
第3章免疫佐剂
1、免疫佐剂的概念
本身没有免疫原性,但与Ag联合使用,能大大提高Ag的免疫原性或改变免疫应答类型,这种物质为免疫佐剂
2、免疫佐剂的要求
1、安全、无毒副作用
2、化学纯以上的试剂
3、吸附能力强
4、容易吸收
5、稳定性强、能保存1~2年
3、常用免疫佐剂的制备
(1)不溶性铝盐胶体的佐剂
1、Al(OH)3
AlCl3(无水)+NaOH→Al(OH)3胶↓(滴定法)
明矾+NH3▪H2O→Al(OH)3胶
使用注意事项:
①灭活菌液:
Al(OH)3胶=4:
1
②Al(OH)3经126℃高压,30min灭菌后使用
③Al(OH)3能诱导老年痴呆症
④配制好的疫苗应摇匀后使用
2、明矾佐剂(例:
破伤风明矾沉降类毒素)
制备:
明矾10g+dH2O→10%明矾溶液(明矾佐剂)
使用:
500ml灭活菌液加10ml10%明矾佐剂(溶液)
(2)油乳佐剂
1、弗氏不完全佐剂(FIA)
制备:
液体石蜡油3份+无水羊毛脂1份+PH7.2PBS4份→混合,116℃30min
使用:
FIA:
Ag=1:
1
2、弗式完全佐剂(FCA)
制备:
FIA加入牛结核分支杆菌(冻干粉)10mg/ml混匀
使用:
FCA:
Ag=1:
1△FIA和FCA为免疫佐剂(实验用)
3、白矿油佐剂(用于病毒疫苗)
油相:
①320ml10号白矿油(杭州杭联化工有限公司)
②7g硬脂酸铝
③22~24ml司本-80(span-80)
④6ml吐温-80(Tween-80)
把②加入①煮溶,冷却后,再加③、④
水相:
灭活病毒液150ml+6ml吐温-80
制备油相:
水相=7:
3或6:
4(高速搅拌,3min)
(3)蜂胶佐剂
30g蜂胶(研磨成粉)+500ml95%酒精→浸泡一周→4层纱布过滤→过滤液(佐剂)
使用:
500ml灭活菌液加15ml蜂胶佐剂
特点:
①没有什么毒副作用
②吸收快
③产生Ab快(7天产生保护性抗体)
④抗体维持时间不长,不超过两个月
第4章真快冷冻干燥技术(冻干)
1、真空冷冻干燥技术
将含有大量水分的生物活性物质冻结成固体,在真快条件下,利用减压升华原理,达到水分去除的目的。
2、共熔点及其测定方法
1、共熔点:
使溶液或悬浊液完全凝固的瞬间温度
2、测定方法:
不同的生物制品有不同的共熔点,是依制品中组成成分而异。
我们在进行冷冻干燥前,必须对其熔点进行测定,其熔点测定是根据导电溶液的电阻与温度相关关系的原理来测定,当温度降低时,电阻增大,当降到共熔点时电阻即出现突然增大的现象,此时的温度为该物质的共熔点。
下面是一些保护剂的共熔点。
表2-4一些物质的共熔点
物质
共熔点
0.85%氯化钠溶液
10%蔗糖溶液
40%蔗糖溶液
10%葡萄糖溶液
2%明胶、10%葡萄糖溶液
2%明胶、10%蔗糖溶液
10%明胶、10%葡萄糖、0.85%氯化钠溶液
脱脂牛乳
马血清
-220C
-260C
-330C
-270C
-320C
-190C
-360C
-260C
-350C
3、冻干程序
1、冻干前准备
①将冻干物品分装,用广口瓶
②盛装量1/5~1/4,厚度不超10mm
③冻干物品含干物质量达4~25%
2、预冻
①将冻干物品置于-40℃
②预冻时间3~4小时
3、干燥
①升华干燥阶段
A在冷结条件下,利用减压升华原理将水分去除
B可除去85%以上的水分
C升华干燥时间与物质品种有关,凡共熔点高的物质升华时间短而易于干燥,共熔点低的物质升华时间要长且不易干燥
②解吸干燥阶段
A利用加热方式,将剩余水分去除
B加热至25~30℃
C压强维持25~30Pa
4、加塞压盖
4、冻干物品的特点
1、多孔、疏松的结构物质,加水后能迅速溶解
2、在真空冷冻下干燥,对热敏生物活性物质影响很小
3、冻干后体积基本保持不变
4、因水分去除,微生物处于休眠状态,便于保存和运输
第5章灭活剂
1、灭活的概念
利用某些理化方法来杀死微生物和破坏毒素的生物学活性,使其失去致病性、繁殖力或脱去毒性,但其免疫原性基本保持不变
2、灭活的方法
1、物理方法:
紫外线、射线、温度、超声波等(基本不用)
2、化学方法;化学灭活剂(甲醛、结晶紫、乙烯亚胺类衍生物)
3、常用化学灭活剂
1、甲醛
①最古典、应用范围最广的灭活剂
②40%甲醛为福尔马林
③甲醛遇光后发生聚合,灭活效能会降低
④不能用于猪瘟和口蹄疫病毒灭活
⑤细菌大都用0.3%甲醛灭活
病毒0.05%~0.2%甲醛灭活
毒素0.4~0.7%甲醛灭活
⑥可用焦亚硫酸钠中和过量甲醛
2、结晶紫:
猪瘟病毒专用灭活剂
3、乙烯亚胺类衍生物
①口蹄疫病毒专用灭活剂
②常用乙烯亚胺类衍生物:
二乙烯亚胺(BEI)、2-乙基乙烯亚胺(EEI)
③用量:
0.05%(终浓度)
④加入硫代硫酸钠中和过量的乙烯亚胺类衍生物
4、缩水甘油醛(用于ND灭活优于甲醛)
4、影响灭活效果的因素
1、被灭活物品的种类与特性(细菌、病毒、外毒素等)
2、灭活剂的种类与特性
3、灭活剂的含量与浓度,在一定范围内,浓度和含量越高,灭活效果越好
4、灭活的温度与时间,在一定范围内,灭活温度越高,时间越长,灭活效果越好,一般情况下,37℃灭活24小时
5、有机物存在影响灭活效果:
有机物(组织、血清等)存在下,灭活剂需加大用量,延长灭活时间
第6章兽医生物制品生产基本技术
1、菌毒种的选育与保存
(1)菌毒种的分类
1、按菌(毒)种的毒力分类:
强毒、弱毒菌毒种
2、按用途可分为:
①生产用菌毒种②检验用菌毒种③工具用菌毒种
(2)菌(毒)种的基本要求
①具有良好的免疫原性和反应原性
②具有可靠的安全性(针对弱毒(菌)种而言)
③具有典型的生物学特性
④具有遗传稳定性和一致性
⑤历史及有关资料清楚完整
(3)菌毒种选育
1、强毒(菌)毒种:
分离、纯化
2、弱毒(菌)毒种:
①人工致弱:
细菌(物理、化学)、病毒(生物方法)②自然筛选
(4)菌(毒)种保存
①菌(毒)种冻干保存
②菌种置于4~8℃保存,毒种置于-15~-20℃保存
③标准菌(毒)种由中国兽药监察所保管、分发
二、兽医生物制品的生产基本程序和原则
(一)细菌性疫苗生产的基本程序与原则
1、生产原则:
①安全②高效③方便
2、细菌性疫苗生产的基本程序
①菌种
②培养基a、牛肉汤:
牛肉(去除脂肪、筋膜),绞碎、加入dH2O(按1:
2(水)比例),煮沸30min,过滤(4层纱布、滤纸)、补足失水,加入1~2%蛋白胨,0.5%NaCl,煮溶,用1NNaCl调PH值至7.2~7.4,再加入0.1%的磷酸氢二钠,121.3℃(15磅)30min灭菌
b、营养牛肉汤:
牛肉汤+2%G+2%小牛血清+适量VB族
c、鲜血琼脂:
普通营养琼脂+3~5%脱纤血(兔血)(高温后,温度至45℃)
d、普通营养琼脂:
牛肉汤+1%琼脂粉121.3℃30min
e、巧克力琼脂+3~5脱纤血(70~80℃)
③菌种传代
第一代:
复苏37℃18~24小时
第二代:
整齐划一青壮年快速生长期37℃10~12h
④细菌的大量增殖
a、逐级培养:
菌种
5ml(37℃18~24h)
5ml(37℃10~12h)
500ml(37℃24~30h灭活苗10~16h弱毒苗)
b、培养温度:
37℃特例:
破伤风梭菌34℃钩端螺旋体29~30℃
c、气体环境
需氧厌氧兼性需氧(有氧>无氧)兼性厌氧
5、弱毒苗生产
37℃培养10~16h收获,加入冻干保护剂、分装、冻干、加塞压盖、贴标签
6、灭活苗生产
37℃培养24~30h收获,加入0.3%甲醛溶液37℃灭活24h按4:
1比例加入铝胶、摇匀、加塞压盖、贴标签
7、质量检查
①安全检查:
正常用量的几倍甚至十几倍进行免疫观察
②活菌检验:
针对灭活菌,将灭活菌接种入牛肉汤或鲜血琼脂检验灭活菌苗有无活菌
③活菌总数检验(针对弱毒苗):
a、比浊法b、平板稀释计数法
④效力检验:
定量免疫、定量攻击
弱毒苗免疫后7天可以攻毒
灭活菌免疫后15~20天可以攻毒
(2)病毒性疫苗生产的基本原则与程序
1、病毒的增殖方法a、易感动物b、敏感细胞(例如:
猪睾丸细胞、猪肾细胞、犊牛睾丸细胞)c、敏感禽胚
2、以禽胚为例
①毒种:
a、毒力与免疫原性成正相关b、传代(复壮)1~2代
②病毒的大量增殖
a、接种方法
ⓐ绒毛尿囊腔9~11d
ⓑ绒毛尿囊膜9~11d
ⓒ卵黄囊5~18d
ⓓ羊膜腔9~12d
弱毒苗→SPF(种蛋):
没有特定性抗原
灭活苗→非免疫种蛋
b、接种量:
鸡胚0.1ml/枚鸭胚0.2ml/枚鹅胚0.3ml/枚
c、复壮种毒稀释:
1:
100~10000NS稀释(青链,含双抗)
d、弃24h内死亡胚:
①细菌感染②机械损伤
e、收获24~72h死亡胚的胚液(也可以收获胚体)
③培苗:
a弱毒苗:
收获病毒液(胚液)加入冻干保护剂、分装、冻干、加塞压盖、贴标签
B灭活苗:
ⓐ收获病毒液加0.05~0.2%甲醛37℃灭活24h
ⓑ水相:
灭活病毒液150ml+6ml吐温-80
ⓒ油相:
320ml10号白矿油+7克硬脂双铝+22~24mlspan-80+6mltween-80
ⓓ油水相配比(油相:
水相=7:
3或6:
4)高速搅拌3min
④质量检查:
a安全检查:
正常用量几倍甚至十几倍免疫、攻毒
B效力检查:
定量免疫、定量攻击
(3)高免蛋黄液、高免血清的生产基本程序
1、生产原理:
①高免蛋黄液生产原理:
Ag3~5次→产蛋母禽→产生Ab→移行至母禽产下蛋的蛋黄中→提取蛋黄→加入1~2倍生理盐水(含有抗菌药物、防霉剂)
②高免血清生产原理:
Ag3~5次→动物→产生Ab,Ab主要存在于血液的血清中→提取血清→加入抗菌药物、防霉剂
2、Ag的选择:
灭活菌和弱毒苗联合使用
3、免疫程序的制定:
原则:
①量由少至多②毒力由弱至强③灭活苗和弱毒苗联合使用④弱
弱;弱
灭;灭
弱;灭
灭;灭+弱
灭+弱
4、动物的选择
①高免蛋黄液的生产:
a最好SPF;b高产蛋禽;c本体动物;d青壮年母禽
②高免血清生产动物的选择:
a健康动物(观察14天),最好SPF动物;b本体动物;c青壮年动物
5、蛋黄的提取
6、蛋黄液的制备:
提取蛋黄加1~2倍生理盐水(含双抗、防腐剂)
防腐剂:
0.01%硫柳汞、0.01%叠氮钠青、链霉素各1000~2000iv/1ml
7、血清的提取
①采取:
早上采血、采血前部喂精饲料,喂青饲料,提供充足饮水
②静脉采血和心脏采血(按一次或多次采血进行选择)
最后一次免疫后,出现抗体比较多时采血
如:
弱7~10天;强15~20天;弱+强10天
③分离血清:
a自然凝固析出法:
置于37℃→4℃(热胀冷缩原理)
b自然凝固离心法3000~5000rpm,3~5min
c柠檬酸钠血浆血清分离法:
提取血浆+30%CaCl2溶液1.3ml→3000~5000rpm(5min)→提取上清液(血清)
8、高免血清的制备:
提取血清加入双抗、防腐剂
9、高免血清、蛋黄液的应用
①发病早期应用②免疫一次一般保护7~10天,两次可保护14~20天
③为了更好吸收,最好多点免疫④置于-15~-20℃保存
⑤免疫量:
0.5~1ml/kgw(家禽特别)
⑥免疫后一周需要大剂量疫苗进行补免
保存:
细菌:
ⓐ灭活4~8℃、室温ⓑ弱毒4~8℃
病毒:
ⓐ灭活4~8℃、室温ⓑ弱-15~-20℃
10、质量检查:
①安全检查:
几倍甚至十几倍免疫、观察
②活菌检验:
需氧菌:
鲜血琼脂、马丁肉汤
厌氧菌:
厌氧肉肝汤
真菌:
沙堡苏化+培养基(沙氏培养基)
③效力检查:
早期a发病动物进行治疗;b免疫后进行攻毒
第7章集中常用兽医生物制品制备与应用实例
一、破伤风明矾沉降类毒素
1、菌种:
由中国兽药监察所鉴定、保存和供应
2、菌种复苏(存代)1~2代,厌气肉肝汤
3、毒素的大量生产
①培养基:
ⓐ牛肉胴水消化液ⓑ黄豆胃蛋白酶水解液ⓒ8%甘油冰醋酸肉汤
②培养的温度:
34~35℃
③培养时间:
4~5天
④培养环境:
厌氧
⑤毒素的收获:
ⓐ菌液高速离心(3000~5000rpm30min)
ⓑ取上清液,用滤膜过滤(0.25um),细菌≥0.45um,支原体0.25~0.45um
ⓒ取过滤液为毒素
4、类毒素的制备
类毒素
破伤风明矾沉降类毒素
5、质量检查:
①安全检查:
正常用量的几倍甚至几十倍进行免疫,一般用实验动物(300~400g豚鼠)
②效力检验:
用300-400克体重豚鼠3只,皮下注射2%破伤风明矾沉降类毒素0.2毫升/只,15-30天皮下注射破伤风标准毒素,每只为300个豚鼠MLD,另外用未经免疫的豚鼠2只对照,皮下注射1个豚鼠MLD,对照组4-5天为发病死亡,免疫组10天内全部健活。
6、应用
2-15℃保存,有效期3年。
大动物各皮下注射一毫升;幼畜减半,6个月后再注射一次。
一个月后产生免疫力,持续1年,第二年再次免疫后可维持4年
2、猪链球菌ST171弱毒苗
1、菌种:
C群链球菌(强毒)
ST171(弱毒株)
C、D群→败血型E群→局部脓肿
2、菌种复苏1~2代:
①第一代营养牛肉汤37℃18~24h
②第二代营养牛肉汤37℃10~12h整齐划一,快速生长阶段
3、细菌大量增殖
①培养基:
营养牛肉汤
牛肉汤+2%G+2%小牛血清+适量VB族
②温度:
37℃
③培养时间:
16h
④培养环境:
有氧培养更旺盛
4、按7:
1(即菌液与冻干保护剂的比例)比例加入冻干保护剂:
明胶12g,葡萄糖40g,dH2O
5、分袋、冻干、贴标签,加塞压盖
6、质量检查①安全检查②活菌数检查③纯度检验(大小、形状、染色特点一致:
纯)
7、应用:
①理论0.5亿细菌=1头份②生产实际2亿细菌=1头份
②种猪2~3次/年2~3头份/次
肉猪20天龄1头份/次
3、猪瘟兔化弱毒疫苗?
(脾淋苗为例)
1、毒种:
猪瘟强毒
猪瘟兔化弱毒(C株)→对兔有热型反应
2、兔的热型反应
①定型热:
ⓐ体温有明显上升曲线
ⓑ潜伏期超过24~48h
ⓒ超过正常体温1℃或1℃以上,每6小时测一次,三个温次,稽留18~36h
②轻型热:
ⓐ体温有明显上升曲线
ⓑ潜伏期24~72h
ⓒ0.5℃≤△X≤1℃2个温次稽留12~36h
③可疑热反应:
ⓐ体温曲线波浪起伏
ⓑ<24h或>72h
ⓒ≥0.5℃<12h或>36h
(用脾脏或胃肠细膜淋巴结)
④无热型反应:
无任何发热现象
3、中毒复化
①兔的选择:
健康(观察7~14天)1.5~3kg兔青年兔
②种毒:
恢复原液(用NS)
③接种:
1ml/只耳iv
④收获:
收获定型热的兔脾淋
收获时间为体温恢复正常后24h内
⑤复苏种毒制备:
收获兔脾淋,剪碎研磨,1:
30生理盐水稀释
四层纱布过滤,取过滤液
4、猪瘟兔化弱毒兔体反应苗
①兔的选择:
健康,1.5~3kg,青年兔(3个月左右)
②接种:
复苏种毒1:
100NS耳iv
③测温:
ⓐ24h内2次/天ⓑ24h后6小时/次
④收获:
收获定型热的兔脾淋
⑤制苗:
按1:
100比例加50%甘油NS(1:
1),1头份/ml
5、猪瘟兔化弱毒牛体反应苗(牛脾淋苗)
①牛的选择:
健康(观察7~14天)1~2头小黄牛
②接种:
复苏种毒1:
10NS稀释,4层纱布过滤,取滤液耳iv接种牛20ml/头
③检测病毒增殖情况:
ⓐ接种牛后72h,颈静脉采血脱纤后耳iv接种兔1ml/只,共接种3只兔子,1/3出现定型热或轻型热,说明病毒增殖良好
ⓑ若72h脱纤血接种兔不合格,5~6天后杀牛取牛脾淋,剪碎研磨,1:
100NS稀释,四层纱布过滤,过滤液接种3只兔,1/3出现定型热或2/3出现轻型热为合格
④收获:
5~6天后杀牛取牛脾淋
⑤制苗:
收获牛的脾淋,去除包膜,剪碎研磨,按1:
50比例加入50%甘三油NS,1ml/头份
⑥疫苗保存:
-15~-20℃2~8℃(加有耐热的冻干保护剂)
⑦应用:
ⓐ种猪3~4次/年15头份/年(细胞苗)
4头份/年(脾淋)2头份/年(ST苗)
ⓑ仔猪:
用量为种猪一半1天35天
4、鸽痘强毒苗生产与应用
1、采取鸽痘患鸽的痘痂
2、干燥痘痂
3、研磨成粉末状(加石英砂)
4、称重
5、配苗:
1:
505%甘油NS100头份/ml
6、保存:
-15~-20℃下保存
7、应用:
①翼膜刺种1头份/月3天产生Ab5天产生保护
②只能自己鸽场使用
③注意接种后一周内的灭蚊工作
5、兔病毒性出血症(兔瘟)组织灭活菌生产与应用
1、种毒:
组织毒1:
10稀释接种兔1ml/只兔子48~72h死亡
2、病毒的大量增殖
①兔的选择:
ⓐ健康(观察7~14天)ⓑ3kg左右的青年兔
②种毒复壮:
1~2代
③复苏种毒1;100NS稀释,接种兔1ml/只,兔36~72h全部死亡,收获死亡兔的肝、肺、脾、肾等实质器官
3、收获的组织剪碎、研磨,4层纱布过滤,1:
10NS稀释
4、灭活:
加0.4%甲醛溶液37℃灭活24~48h
5、死苗:
按4:
1比例加入Al(OH)3胶(5
)
500NS加入15g丁胺卡那和15g头孢粒啶效果更好
6、保存4~8℃或阴暗处保存即可
7、应用
种兔2次/年(半年一次)1ml/只
肉兔20d0.5ml/只
35d1ml/只
可保护一年
6、抗猪瘟血清的生产及应用
高免血清、抗病血清
1、生产原理:
Ag3~5次→猪→产生Ab,Ab主要存在于血液的血清中→采血→分离血清→加入双抗、防霉剂
2、疫苗(Ag)的选择
猪瘟兔化弱毒疫苗:
①细胞苗:
牛睾丸细胞10头份
②细胞苗(传代):
猪睾丸细胞1头份
③脾淋苗:
ⓐ兔体反应苗2头份
ⓑ牛体反应苗
3、免疫程序
30~35d猪瘟疫苗(传代)1头份/只(传代)普通
70~80d猪瘟疫苗(传代)1头份/只
屠宰前21~25d猪瘟疫苗(传代)2头份/只10头份
再过7天猪瘟疫苗(传代)5头份/只5头份
再过7天猪瘟疫苗(传代)10头份/只200头份
再过7天采血
4、猪的选择
①选择屠宰前的肥育猪或淘汰老母猪
②健康(观察7~14天)
5、采血;一次性采血
6、分离血清:
自然凝固析出法
自然凝固离心法
血浆血清分离法
7、加入双抗、防腐剂
8、质量检查:
安全
活菌
效力
9、保存:
-20℃
10、使用:
0.5~1ml/kgw
7、抗小鹅瘟血清的生产与应用(消化道和呼吸道疾病)
1、生产原理
2、抗原(疫苗的选择)
①灭活苗②弱毒苗联合使用
3、免疫程序:
弱毒苗1ml/只灭活苗1.5ml/只(原液)
弱毒苗2ml/只灭活苗2ml/只
弱毒苗3ml/只(原液)
采血
4、鹅的选择:
①育肥鹅或淘汰种鹅②健康
5、采血:
①心脏采血②枕骨静脉窦
6、分离血清
7、加入双抗、防腐剂
8、质量检查
9、保存:
-20℃
10、应用0.5~1ml/kgw雏鹅1ml/只
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