高效液相色谱仪验证方案10A讲解.docx

高效液相色谱仪验证方案10A讲解.docx

《高效液相色谱仪验证方案10A讲解.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱仪验证方案10A讲解.docx（16页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

高效液相色谱仪验证方案10A讲解

LC-10AT高效液相色谱仪确认报告

****药业有限公司

1概述

2验证目的

3验证依据及标准

4验证小组成员及职责

5验证确认

5.1再确认

5.2运行确认

5.3性能确认

6再验证周期

7验证结论及评价报告

6验证报告书批准

1.概述

LC-10AT型高效液相色谱仪为岛津公司生产的产品，为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，计划对该仪器进行必要的验证。

2.验证目的

确认LC-10AT高效液相色谱仪的运行、性能确认符合相应的要求，为日常检验提供准确的检测结果。

3.验证依据及标准

《药品GMP指南》2010年版

《LC-10AT型高效液相色谱仪标准操作规程》

《中国药典》2010年版二部附录

4.验证小组成员及职责

4.1化验室职责

负责起草确认方案、总结报告；

负责整个确认方案的实施，并做记录、总结报告；

4.2质量部职责

做好过程监控，确保方案执行过程符合法规要求；

负责确认方案的审核；

负责确认实施的协调。

4.3人员组成

部门

成员

化验室

质量部

5.验证确认

5.1再确认

仪器名称：

型号：

生产厂家：

所在地点：

5.1.1检查有关资料完整性。

名称

是否齐全

存放处

LC-10AT高效液相色谱仪使用说明书

SPD-10AV紫外-可见光检测器使用说明书

柱温控制箱使用手册

合格证

保修卡

备件清单

检定合格证

仪器使用记录

5.1.2安装场地

项目

要求

检查情况

位置

应无强震动源,无强电磁干扰源,通风良好，无明火

环

境

洁净度

室内应保持清洁,无腐蚀性气体

温度

20～30℃，全天温度变化较小

相对湿度

40～85%

电

路

电源

AC220V±10V、50HZ±1HZ

接地

应接地

5.2运行确认：

严格按《LC-10AT高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，

5.3性能确认

5.3.1泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定

可执行标准：

流量设定值（ml/min）

0.5

1.0

2.0

测量次数

3

3

3

流动相收集时间/min

10

5

5

允许误差

SS

5%

3%

2%

SR

3%

2%

2%

测试方法：

将输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以甲醇为流动相，将流速稳定后，分别设定0.5、1.0、2.0ml/min三段，在流动相出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按下式计算SS和SR。

Fm=（W2-W1）/ρ·t      Ss = （Fm-Fs）/Fs ×100% SR=（Fman-Fmin）/F ×100% 

其中：

Fm为流量实测值（ml/min）， Fs为流量设定值（ml/min），

 W2为容量瓶加流动相的重量（g）， W1为容量瓶的重量（g）， 

ρ为实验温度下流动相的密度（g/cm3）， t为收集流动相的时间（min）, 

Fmax为同一组测量中流量最大值（ml/min）, 

Fmin为同一组测量中流量最小值（ml/min）, 

F为同一组测量值的算数平均值（ml/min）。

5.3.2柱温箱：

柱箱温度设定值误差ΔTs和控温稳定性Tc的检定 

 将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃进行检定。

按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。

平均值与设定值之差为ΔTs（〈±2℃），7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性Tc（≤1℃）。

5.3.3SPD-10A紫外可见光液相色谱检测器

5.3.3.1噪声与漂移

可执行标准：

噪声＜±1.0×10-2mv（250nm），漂移＜±5.0×10-2mv/hr

测试方法：

取用C18色谱柱，将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线30~40分钟，计算基线漂移和噪声。

（基线漂移应≤5×10-3（AU/h）, 基线噪声应≤2×10-4（AU））。

5.3.3.2最小检测浓度的测定【要求：

≤1×10-7g/ml（萘的甲醇溶液）】 

取用C18色谱柱，将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，开机预热，待稳定后用注射器注入1×10-7g/ml萘的甲醇溶液20μl，样品峰高应大于或等于两倍基线燥声峰高，按下式计算最小检测浓度。

 CL=2·Hs .C/H 

式中：

CL:

最小检测浓度（g/ml）;Hs:

噪声峰高（记录仪格数或实测高度mm）

 C:

样品浓度（g/ml） ;H:

样品峰高（记录仪格数或实测高度mm） 

5.3.4整机性能的检定（定性、定量重复性）

精密量取二甲苯和苯适量，置棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释成每1ml含上述两种物质都为0.002ml的溶液，摇匀；以甲醇为流动相，精密量取上述溶液20μl注入色谱仪中，连续进样5次，记录色谱图，计算，即得。

以此检查仪器的定性重复性和定量重复性，定性重复性RSD≤1.0%，定量重复性RSD≤2.0%。

6偏差处理：

检验方法确认中，应严格按照确认方案、《中国药典》2010年版二部等进行操作和判定。

如出现个别项目不符合标准的结果时，应按下列程序进行处理：

6.1按检验结果超标（OOS）进行调查和处理。

6.2若确认为方法不适用的问题，则应建立适用的新方法，新方法应经过确认并经过批准。

7确认结果及评价

8再验证及周期

8.1资料确认：

检查有关资料完整性。

8.2性能验证：

泵的流量准确度、流量精确度；柱箱温度设定值误差ΔTs和控温稳定性Tc；检测器的噪声与漂移、定性定量重复性、最小检出浓度。

8.3正常情况下每年做一次验证。

8.4实验条件发生改变（如关键设备或系统的改动）性须重新验证。

8.5仪器更新或大修。

9.验证报告书批准

LC-10AT高效液相色谱仪确认报告

****药业有限公司

1.概述

2.确认结果

2.1安装再确认

2.2运行确认

2.3性能确认

3.偏差处理

4.确认结果及评价

5.再确认周期

6.验证报告书批准

7.附录

1.概述

LC-10AT型高效液相色谱仪为岛津公司生产的产品，为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，计划对该仪器进行必要的验证。

2.确认结果

2.1安装再确认

仪器名称：

型号：

生产厂家：

所在地点：

2.1.1检查有关资料完整性。

名称

是否齐全

存放处

LC-10AT高效液相色谱仪使用说明书

SPD-10AV紫外-可见光检测器使用说明书

柱温控制箱使用手册

合格证

保修卡

备件清单

检定合格证

仪器使用记录

2.1.2安装场地

项目

要求

检查情况

位置

应无强震动源,无强电磁干扰源,通风良好，无明火

环

境

洁净度

室内应保持清洁,无腐蚀性气体

温度

20～30℃，全天温度变化较小

相对湿度

40～85%

电

路

电源

AC220V±10V、50HZ±1HZ

接地

应接地

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

2.2运行确认：

严格按《LC-10AT高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，

2.3性能确认

2.3.1泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定

可执行标准：

流量设定值（ml/min）

0.5

1.0

2.0

测量次数

3

3

3

流动相收集时间/min

10

5

5

允许误差

SS

5%

3%

2%

SR

3%

2%

2%

测试方法：

将输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以甲醇为流动相，将流速稳定后，分别设定0.5、1.0、2.0ml/min三段，在流动相出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按下式计算SS和SR。

Fm=（W2-W1）/ρ·t      Ss = （Fm-Fs）/Fs ×100% SR=（Fman-Fmin）/F ×100% 

其中：

Fm为流量实测值（ml/min）， Fs为流量设定值（ml/min），

 W2为容量瓶加流动相的重量（g）， W1为容量瓶的重量（g）， 

ρ为实验温度下流动相的密度（g/cm3）， t为收集流动相的时间（min）, 

Fmax为同一组测量中流量最大值（ml/min）, 

Fmin为同一组测量中流量最小值（ml/min）, 

F为同一组测量值的算数平均值（ml/min）。

输液泵流量设定值误差Ss、流量温度定性误差SR的检定原始记录见附录一。

结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

2.3.2柱温箱：

柱箱温度设定值误差ΔTs和控温稳定性Tc的检定 

 将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃进行检定。

按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。

平均值与设定值之差为ΔTs（〈±2℃），7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性Tc（≤1℃）。

柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTc的检定原始记录见附录二。

结论：

。

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

2.3.3SPD-10A紫外可见光液相色谱检测器

2.3.3.1噪声与漂移

可执行标准：

噪声＜±1.0×10-2mv（250nm），漂移＜±5.0×10-2mv/hr

测试方法：

取用C18色谱柱，将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线30~40分钟，计算基线漂移和噪声。

（基线漂移应≤5×10-3（AU/h）, 基线噪声应≤2×10-4（AU））。

测试图谱见基线漂移测试。

结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

2.3.3.2最小检测浓度的测定【要求：

≤1×10-7g/ml（萘的甲醇溶液）】 

取用C18色谱柱，将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，开机预热，待稳定后用注射器注入1×10-7g/ml萘的甲醇溶液20μl，样品峰高应大于或等于两倍基线燥声峰高，按下式计算最小检测浓度。

 CL=2·Hs .C/H 

式中：

CL:

最小检测浓度（g/ml）;Hs:

噪声峰高（记录仪格数或实测高度mm）

 C:

样品浓度（g/ml） ;H:

样品峰高（记录仪格数或实测高度mm） 

结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

2.3.4整机性能的检定（定性、定量重复性）

精密量取二甲苯和苯适量，置棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释成每1ml含上述两种物质都为0.002ml的溶液，摇匀；以甲醇为流动相，精密量取上述溶液20μl注入色谱仪中，连续进样5次，记录色谱图，计算，即得。

以此检查仪器的定性重复性和定量重复性，定性重复性RSD≤1.0%，定量重复性RSD≤2.0%。

定性、定量重复性原始记录见附录三。

结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

3.偏差处理

检验方法确认中，严格按照确认方案、《中国药典》2010年版二部等进行操作和判断，未出现偏差。

4.确认结果及评价

根据确认结果的分析，确认过程中是否有不可接受偏差存在，确认原子吸收分光光度计各个方面是否符合规定。

说明该红外分光光度计测定数据是否准确可靠，是否可持续达到预定的效果，适用于检验要求。

1、主要试验结果：

项目

标准

验证结果

是否符合规定

安装再确认

安装的地点及条件符合要求

仪器的性能确认

泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR应符合规定

柱箱温度设定值误差ΔTs和控温稳定性Tc应符合规定

噪声＜±1.0×10-2mv（250nm），漂移＜±5.0×10-2mv/hr

最小检测浓度≤1×10-7g/ml

定性重复性RSD≤1.0%，定量重复性RSD≤2.0%

2、结果的分析、建议

报告人：

年月日

3、会签重要试验结果是否完整：

完整□欠缺□不合格□

试验结果可靠性：

可靠□尚需重试□

评价结果：

合格□不合格□

会签人：

验证小组负责人：

年月日

5再验证周期

5.1设备大修后需再确认。

5.2由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再确认。

5.3更换主要部件或对仪器性能有怀疑时，应进行再确认。

6.验证报告书批准

验证项目名称

LC-10ATVP高效液相色谱仪验证方案及报告

验证目的

1、检查并确认LC-10ATVP高效液相色谱仪安装符合设计要求。

2、确认LC-10ATVP高效液相色谱仪的运行性能。

3、LC-10ATVP高效液相色谱仪性能指标达到设定技术指标。

验证方案及验证报告编号

该验证项目及验证报告已经审核无误，予以批准。

特此证明。

本验证项目有效期

自年月日至年月日止。

验证管理部门负责人签字：

年月日

附录一：

输液泵流量设定值误差Ss、流量温度定性误差SR的检定原始记录

流动相

密度ρt

流量设定值

0.5ml/min

1.0ml/min

2.0ml/min

收集时间t

10min

5min

5min

W1

W2

W2-W1

ρt·t

Fm

Fm的平均值

Ss

SR

附录二：

柱箱温度设定值误差ΔTs和控温稳定性Tc的检定原始记录

Ts1

序号

1

2

3

4

5

6

7

平均

读数

ΔTs1

Tc1

Ts2

序号

1

2

3

4

5

6

7

平均

读数

ΔTs2

Tc2

附录三：

A、定性重复性:

取两组分保留时间差进行计算。

次数

1

2

3

4

5

组分1保留时间

组分2保留时间

组分1与组分2保留时间差

RSD%

B、定量重复性:

取两组分峰面积比进行计算。

次数

1

2

3

4

5

组分1峰面积

组分2峰面积

组分1与组分2峰面积比

RSD%