药理学实验指导探究.docx
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药理学实验指导探究
目 录
第一章 绪言…………………………………………………………………
(1)
第二章 常用的仪器及器械…………………………………………………(6)
一、BL-410生物机能实验系统……………………………………(6)
二、721分光光计………………………………………………………(10)
三、电刺激器具…………………………………………………………(11)
四、常用手术器材………………………………………………………(11)
第三章 动物实验的基本操作技术…………………………………………(14)
一、实验动物的选择……………………………………………………(14)
二、实验动物的捉持法、给药法及取血法……………………………(14)
三、实验动物的编号……………………………………………………(21)
四、实验动物的麻醉……………………………………………………(22)
五、实验动物的固定……………………………………………………(26)
六、实验动物的处死方法………………………………………………(27)
七、急性动物实验常用手术方法………………………………………(27)
第四章实验设计……………………………………………………………(31)
一、实验设计的基本要求………………………………………………(31)
二、实验设计的基本步骤和内容………………………………………(32)
三、实验设计的组织实施………………………………………………(33)
附:
医用统计学的基本知识……………………………………………(34)
第五章 实验…………………………………………………………………(37)
第一节基础实验…………………………………………………………(37)
实验一蟾蜍神经肌肉标本制备………………………………………(37)
实验二坐骨神经标本制备……………………………………………(40)
实验三神经干动作电位的测定………………………………………(41)
实验四刺激强度与刺激持续时间之间的关系………………………(42)
实验五刺激强度与组织反应的关系…………………………………(43)
实验六神经冲动传导速度的测定……………………………………(45)
实验七神经干不应期现象的观察……………………………………(46)
实验八刺激频率与骨骼肌收缩的关系………………………………(47)
实验九骨骼肌动作电位和机械收缩的同时记录……………………(50)
实验十影响血液凝固的因素…………………………………………(53)
实验十一红细胞渗透脆性的测定……………………………………(56)
实验十二红细胞沉隆率试验…………………………………………(57)
实验十三蛙心起搏点分析……………………………………………(58)
实验十四蛙心搏动的描记及兴奋性变化的观察……………………(60)
实验十五蛙心搏动与心肌动作电位(宏电极)的同时记录………(62)
实验十六离体蛙心灌流………………………………………………(63)
实验十七心肌单细胞跨膜电位(录像)……………………………(65)
实验十八蟾蜍肠系膜微循环观察(示教)…………………………(66)
实验十九减压神经放电(录像)……………………………………(67)
实验二十胸内负压与气胸观察………………………………………(68)
实验二十一胃肠运动的观察…………………………………………(69)
实验二十二大脑皮层体感诱发电位…………………………………(71)
实验二十三大脑皮层运动机能定位(录像)………………………(72)
实验二十四去大脑僵直(录像)……………………………………(73)
实验二十五药物的基本作用…………………………………………(74)
实验二十六溶液PH值对药物转运速率的影响……………………(75)
实验二十七药物的协同作用…………………………………………(77)
实验二十八磺胺药血浆半衰期测定…………………………………(78)
实验二十九传出神经系统药对动物血压的影响……………………(81)
实验三十Ach量效关系曲线及阿托品PA2测定…………………(83)
实验三十一药物对离体气管的作用…………………………………(86)
第二节综合性实验………………………………………………………(88)
实验一心血管活动的神经体液调节及药物的影响…………………(88)
实验二心律失常与治疗………………………………………………(91)
实验三呼吸运动的调节与药物对呼吸的影响………………………(92)
实验四理化因子及药物对消化道平滑肌的生理特性的影响………(95)
实验五影响尿生成的因素及利尿药的作用…………………………(97)
实验六血液凝固过程及DIC发生发展机理和救治原则……………(101)
实验七氨在肝性脑病发生中的作用及救治原则……………………(104)
第三节人体实验…………………………………………………………(105)
实验一ABO血型鉴定…………………………………………………(105)
实验二人体动脉血压的测定…………………………………………(107)
实验三人体心电图(ECG)的描记…………………………………(110)
第四节动物疾病模型的复制实验………………………………………(113)
实验一药物对抗尼可刹米的致惊厥作用……………………………(113)
实验二杜冷丁镇痛作用………………………………………………(113)
实验三有机磷酸酯类中毒及解救……………………………………(114)
实验四药物的平喘作用………………………………………………(115)
实验五药物LD50及ED50的测定……………………………………(116)
实验六急性心力衰竭…………………………………………………(120)
实验七急性缺氧………………………………………………………(121)
实验八失血性休克……………………………………………………(122)
实验九急性心功能不全………………………………………………(123)
第六章处方学………………………………………………………………(125)
附录:
常用生理溶液的成分及用途…………………………………………(131)
实验动物用药剂量的计算方法………………………………………(131)
机能实验学教学的目标………………………………………………(136)
机能实验学教学的内容要求…………………………………………(137)
第一章绪言
随着自然科学的发展,医学科学逐渐形成了许多分支学科,实验学就是其中的一个重要组成部分。
目前,医学实验技术一般分为形态学、机能学、分子生物学和细胞生物学4大类,掌握实验学的基本技术,对于从事医学的学生来说是具有重要意义的。
机能实验学的研究包括临床研究和动物实验研究。
机能实验学的研究多采用动物实验方法进行(因为前者只允许在不损害机体健康、不耽误病情、不加重病人痛苦的条件下进行)。
实验者可以根据设计的意图、控制或改变某些条件,探讨正常、病理或药物干预的情况下有关器官功能的变化的规律及其机制,或进行实验性治疗和预防,为临床工作提供线索和依据。
机能实验学的特点:
它是一门理论性较强的学科,也是一门实践性较强的学科,其目的和任务是:
从不同角度、用不同方法去研究正常和患病机体的生命活动规律,阐明疾病的原因、发生发展的过程,研究疾病过程中的机体功能、代谢和形态结构改变的特征,为认识和掌握疾病发生发展的规律、为防病治病提供必要的理论基础和实验研究依据。
实验教学是机能实验学主要的教学形式,但它也不是附属于某门理论课,它独立开课,独立考核,自成体系。
机能实验学的研究方法:
从研究对象来看,可分为细胞、器官和系统、整体三个水平的研究。
(一)细胞和分子水平
需将某种组织细胞从整体取下后,在一定的环境条件下对其功能进行研究。
如:
将一个或数个细胞从整体分离出来,观察其生物电活动等。
(二)器官和系统水平
以离体或在体的一个器官或系统为实验研究对象,观察其功能活动,研究其功能活动的内在机制以及各种因素对其活动的影响。
如:
离体蛙心灌流、各种因素对心血管活动的影响、各种因素对呼吸运动的影响等实验。
(三)整体水平
以完整的机体为研究对象,观察和研究在各种生理条件下不同的器官、系统之间互相联系、互相协调的规律,如体温调节的研究等。
上述三个水平的实验研究,是互相联系、互相补充的。
从实验的具体方法来看,可分为急性实验和慢性实验。
急性实验:
在较短的时间内完成。
一般是在麻醉情况下对动物施行手术,将某一器官暴露或取出,在一定的条件下对其功能活动进行观察。
急性实验费将某一器官暴露或取出,在一定的条件下对其功能活动进行观察。
急性实验用时短,教学实验多为此类实验。
慢性实验:
此类实验研究对象的状况比较接近正常情况,能够进行较长时间的连续观察,获得比较系统的实验资料。
但往往需较长时间。
一、机能实验学的教学目的
机能实验学是在保留了部分经典的电生理、人体生理和药理实验的基础上,将生理、药理、病理生理的某些实验有机的结合起来,使学生通过实验,不仅掌握基本的操作技术,而且通过各种病理动物实验模型的制备、药物及其他方法的救治等,将生理、药理、病理生理知识融会贯通,更加贴近临床。
培养并提高学生自学,独立思考,独立工作,科学思维的能力;进行实验设计和统计分析结果等分析问题、解决问题的能力;培养学生科学严谨和实事求是的工作作风。
二、机能实验学的教学要求
1.实验前
(l)仔细阅读实验指导,了解实验的目的、要求、操作方法及其实验操作重点,领会实验原理。
(2)结合实验内容,复习有关理论,做到充分理解,尽可能预测实验各个步骤应得的结果,注意和估计实验中可能发生的误差,以便及时纠正操作上的错误。
(3)根据观察指标,设计记录实验数据的表格。
2.实验时
(1)遵守课堂纪律和实验室守则。
(2)清点所用器材和药品,检查仪器的功能,并正确调试仪器,按实验步骤操作,准确计算给药量。
(3)仔细观察实验过程中出现的现象,要随时作好原始记录并结合所学理论判断实验结果。
3.实验后
(l)将实验用具整理就绪:
所用器材擦洗干净;按实验前的布置整理安放好;检查仪器性能状况,填写使用单;如有损坏短少之处,立即报告实验教师。
(2)值日同学要做好实验室清洁卫生工作,关好门、窗、水、电,方能离开实验室。
(3)整理实验记录,作出实验结论,认真填写实验报告,作到文字简练、通顺,书写清楚,客观地填写和叙述实验结果与分析,按时交给实验教师评阅。
三、实验结果的处理
学生在实验过程中通过科学方法将所观察,检测及计算出的实验结果,进行分析、统计和整理,转变为可定性、定量的数据和图表,以便研究其所获得的各种变化的规律。
在实验所得的结果中,凡属于可以定量检测的资料,如长短、高低、快慢、轻重等,均应以正确的单位和数值定量。
在可以记录到曲线的实验项目中,应尽量采用曲线来表示实验结果,在曲线上应标注说明;有些实验结果可采用表格和绘图。
制表格时可将观察的项目列在表内左侧,右侧顺序填写各项结果变化数值,亦可简要说明;绘图时,以横轴表示各种刺激条件,纵轴表示所发生的各种反应,坐标轴要有适当注解,包括剂量单位。
选择大小适宜的标度以便作图,根据图的大小确定坐标的长短。
绘制经过各点的曲线或折线要光滑。
如果不是连续性变化,也可用直方图表示,图下注明实验条件,实验名称等。
需作统计学处理的实验数据,应按卫生统计学中所规定的统计学方法进行处理后(详见第五章),才能对实验结果进行评价。
四、实验作业
实验课时或实验课后,学生应按教师的要求,按时完成实验作业。
实验作业有实验报告、填充图表、口头答辩等形式,下面主要介绍实验报告的书写要求。
(一)实验报告格式:
(l)试验者姓名、班次、组别、日期。
(2)实验序号与题目。
(3)实验目的。
(4)实验方法:
一般不必详尽描述,如有实验仪器与方法临时变动,或因操作技术影响观察的可靠性时,可作简要说明。
(5)实验结果:
是实验中最重要的部位。
目前,医学论文多采用三线表、直方图、曲线或文字描述等方式表达实验结果。
要求把实验过程获得的数据、曲线、文字等原始资料加以整理填入实验报告本的适当位置。
(6)讨论和结论:
实验结果的讨论是根据结果和现象用已知的理论和知识进行的解释和推理分析。
要判断实验结果是否为预期的,如果出现非预期结果,应该再考虑和分析其可能原因。
实验结论是从实验结果中归纳出一般的、概括性的判断,也就是这一实验所能验证的概念、原则或理论的简明总结。
结论中一般不要罗列具体的结果。
在实验中未能得到充分证据的理论分析不应写入结论。
(二)写报告应注意文字简练、通畅,书写整洁、清楚,正确使用标点符号。
(三)实验的结论和讨论的书写是富有创造性的工作,应该严肃认真,不应盲目抄袭书本,严禁抄袭别人的作业。
参考课外读物,应注明出处。
以下为实验报告的一般格式:
机能学实验报告
姓名:
班次:
组别:
日期:
实验序号与题目:
实验目的:
实验对象:
实验结果:
讨论和结论:
五、自学及病例讨论
人的知识主要是通过自学而获得的。
“学会学习”是学生的重要任务,大学生更应该重视自学能力的培养。
由于机能实验学成为一门独立的学科,实验课不可避免地与有关的理论课存在着“时间差”。
这既是“缺陷”,也是培养同学们的自学能力的机会。
因此,热切希望同学们能根据机能实验学的进程,按照有关理论课的教学大纲进行复习或自学,以求提高实验课的质量。
病例讨论课的目的是培养同学们的临床思维能力,把学习过的理论知识运用到实际病例中去,解决临床实际问题。
这包括解释疾病发生发展及临床表现的机制、提出合理的药物治疗方案和其它防治措施等。
为此,希望同学们能做到以下几点:
(l)认真预习病例及复习有关的生理学、病理生理学、药理学的基本理论;
(2)联系有关学科(如生物化学、病理学和诊断学等)的知识来分析病例;
(3)按照思考题,认真思考问题;
(4)讨论时,要积极发言,发言时,要语言简练,观点明确,言之有理,言之有据。
藉此机会,训练自己的口头表达能力。
[附]实验室守则
1.遵守学校纪律,准时到达实验室并穿好实验工作服。
2.实验时应严肃认真,不得进行任何与实验无关的活动。
保持实验室安静。
3.参加实验者应熟悉仪器和设备的性能及操作要求,而后动手使用。
如遇仪器和设备故障或损坏,应立即报告指导教师,以便及时维修或更换,干万不可擅自拆修或调换。
实验用的动物按组分发,如需补充使用,需经教师同意才能补领。
4.各实验小组的实验仪器和器材各自保管使用,不得随意与他组调换娜用;如需补发增添时,应向指导教师提出,经同意后方能补领。
每次实验后应清点一下实验器材用品。
5.爱惜公用财物,爱护实验动物,注意节约各种实验器材和用品。
6.保持实验室清洁整齐,除实验指导,相应的专业课教材及原始记录纸外,不必要的物品不要带进实验室。
实验完毕后,应将实验器材、用品和实验桌凳收拾干净;实验动物的尸体及废物应放到指定的地点,不得随地乱丢。
实验室的清洁卫生工作应由各实验小组轮流负责打扫,并最后注意关好水、电、门窗等,经指导教师检查后,方可离开实验室。
第二章常用的仪器及器械
一、BL-410生物机能实验系统。
BL-410生物机能实验系统是一种智能化的四通道生物信号采集、显示及数据处理系统,它具有记录仪+示波器+放大器+刺激器+心电图仪等传统的生理仪器的全部功能。
BL-410生物机能实验系统以中文操作的windows为基础,实现全图形化界面的鼠标操作,此外还具有自动分析、参数预置、操作提示、中文显示、鼠标驱动等功能。
(一)BL-410生物机能实验系统的主界面及窗口简介
1.主界面
使用前必须首先熟悉该系统的主界面及主界面上各个部分的用途。
进入BL-410生物机能实验系统主界面的路径:
(1)开机:
只有当计算机各接口连接完毕后,才能开机。
(2)待进入windows界面后,鼠标双击左键“BL-410”图标,显示“BL-410智能型生物信号显示与处理系统”主界面(图2-1)。
图2-1
总体上主界面从上到下依次分为:
标题条、菜单条、工具条、生物信号波形显示窗口、数据滚动条及反演按钮区、状态条等6个部分。
主界面中间部分(即“生物信号波形显示窗口”所处水平)从左到右主要分为:
标尺调节区、波形显示窗口和分时复用区三个部分。
在左侧的标尺调节区的上方是刺激器调节区。
生物信号显示窗口的右边为控制区和信息区:
控制区从上到下可分为两个部分:
(1)4个通道的参数调节及扫描速度调节与显示区;
(2)特殊实验标记选择区。
(二)BL-410生物机能实验系统使用步骤
1.开机
只有当计算机各接口连接完毕后,才能开机。
2.进入“BL-410智能型生物信号显示与处理系统”
鼠标双击左键“BL-410”图标,显示主界面。
3.选择实验项目
将鼠标拖至主界面上方菜单条的“实验项目”并单击左键,打开实验项目下拉式菜单,选择实验的系统,再选定具体实验题目。
4.调节屏幕显示方式
根据实验要求选择单通道全屏显示或多通道同时显示。
如要以全屏方式显示某通道信号,只需用鼠标左键双击该通道任何一部位,即完成单通道的全屏显示。
如要恢复原来的通道显示,同样鼠标左键双击全屏显示的任一部位。
用鼠标可随意拖动每个通道间的横分隔条以调节通道的大小。
5.调节波形显示的参数
根据被观察信号的大小及波形特点,调节该通道的增益、滤波及扫描速度,它们的控制旋钮都位于位于波形显示窗口的右侧,具体操作如下:
①增益,即信号波形的放大倍数:
将鼠标移动到增益控制旋钮(G)上,单击鼠标左键可使信号波形幅度增大,相反单击鼠标右键则可使信号波形幅度变小。
②高频滤波:
作用是衰减高频噪音而让低频信号通过。
位于增益控制旋钮的右侧,将鼠标移动到高频滤波控制旋钮(F)上,单击鼠标左键可使滤波频率增高;相反单击鼠标右键则可使滤波频率降低。
③时间常数(低频滤波):
作用是衰减地频噪音而让高频信号通过。
将鼠标移动到时间常数控制旋钮(T)上,单击鼠标左键可使滤波频率增高;相反单击鼠标右键则可使滤波频率降低。
④扫描速度调节:
将鼠标移动到所调通道的扫描速度调节区位置,在绿色柱的右边单击鼠标一次,扫描速度增快一档;而在黄色柱的左边单击鼠标一次,扫描速度减慢一档;此时该通道扫描速度显示也将同时改变。
6.调节刺激参数
一般情况下,刺激器的参数调节面板以最小化隐藏。
当需要调节刺激参
数时,用鼠标单击显示窗口左侧的刺激器调节区内“打开刺激器调节对话框”按钮,这时刺激器的参数调节面板将展开在主界面的左方。
可根据实验需要调节,调节方法为,用鼠标单击某项参数右边的两个上、下箭头为粗调,下边的两个左、右箭头为细调。
根据实验的要求,可选择下列项目:
①刺激方式:
有粗电压、细电压、粗电流、细电流等;
②刺激形式:
单刺激、双刺激、串刺激等;
③刺激强度;
④刺激波宽;
⑤刺激频率(或刺激间隔)。
7.施行刺激
实验中当需要给标本刺激时,用鼠标单击工具条中的“启动刺激”按钮;需停止刺激时,用鼠标再一次单击该按钮。
8.作刺激标记
在进行实验时常需记录刺激标记,从屏幕的右下角点击“实验标记项”,进入特殊实验标记选择区,选择实验项目名称点击选定后,在屏幕上合适的地方点击一次,即可打上相应的刺激标记。
9.结束实验
当实验完成需要结束的时候,用鼠标单击工具条上的“实验停止命令”键,此时会弹出一个存盘对话框,提示你给刚才记录的实验数据输入文件名(文件名自定),点击“保存”。
如没输入文件名,计算机将以“Temp.dat”作为该实验数据的文件名,并覆盖前一次相同文件名的数据。
10.实验结果处理
(1)图形反演及选择:
实验结果处理须先将存盘记录保存的图形重新播放(即反演)以供处理。
用鼠标单击菜单条上的“文件”项,显示“打开”对话窗口。
在文件名表框中找出所需文件并单击,即可打开该文件,用鼠标拖动屏幕下方的滚动条进行查找。
主界面的右下角设置有“波形横向展宽”按钮和“波形横向压缩”按钮,在反演时,可根据实验的要求,将记录波形进行展宽或压缩,以便在一幅图上获得较理想的曲线。
(2)图形剪辑
①在实时实验过程或数据反演中,按下“暂停”按钮使实验处于暂停状态,按下“图形剪辑(右上方剪刀形标记)”按钮使系统处于图形剪辑状态;
②对有意义的一段波形进行区域选择,用鼠标选定并按住左键拖动鼠标选择,剪辑区域此时被选定区域变黑,松开左键即可进入剪辑页(剪辑窗口)。
③当进行了区域选择以后,图形剪辑窗口出现,上一次选择的图形将自动粘贴进入到图形剪辑窗口中。
④选择图形剪辑窗口右边工具条上的退出按钮,退出图形剪辑窗口。
⑤重复上述步骤,剪辑其它波形段的图形,然后拼接成一幅整体图形,此时可以打印或存盘。
(3)输入实验组号及实验人员名单
实验完成,需要在实验结果上打印实验组号及实验人员名单。
输入方法为:
用鼠标单击菜单条上的“编辑”项,弹出菜单,选择“实验人员名单编辑”项并单击,屏幕上将显示“实验人员及实验组号”输入对话框,用键盘输入实验人员名单及组号,最后按“OK”即可。
(4)打印
在图形剪辑页中,用鼠标单击“打印”按钮,即可由打印机打印出一张剪辑后的图形。
(三)BL-410生物机能实验系统使用注意事项:
(1)在开机状态下,切忌插入或拔出计算机各插口的连线。
(2)切忌液体滴入计算机及附属设备内。
(3)未经允许,不得随意改动计算机系统的设置。
(4)在实验开始记录时,注意是否在记录状态下(记录按钮是否已变红),否则数据存盘没有进行,反演时无记录图形数据。
(5)未经许可不得自带软盘上机操作。
二、721型分光光度计(图2-4)
1、原理:
溶液中的物质在光照时对光有吸收作用,物质对光吸收具选择性,不同的物质都具各自的吸收光谱。
当某单色光通过溶液时,其能量就会被溶液中对其具有选择性吸收功能的物质所吸收而减弱。
光能量减弱的程度(即被吸收的程度)与物质的浓度和数量成一定比例关系,即符合比色原理:
比耳(Beer-lamebert)定律:
E=KCL。
E-消光度(吸光度),L-溶液的光径长度(比色杯厚度),C-溶液浓度。
2、主要结构
由下列几部分组成:
光源、单色器、狭缝、样品池、检测系统,如图2-5所示。
图2-4721型分光光度计
1读数表头:
2比色皿暗箱:
3电源开关:
4比色皿座架拉杆;5光量调节器;6."O”电位钮:
7波长选择钮:
8灵敏度档
3、使用方法如下:
(l)打开电源开关,使仪器预热20min。
(2)根据实验要求,转运波长选择钮,选用所需的波长。
(3)调节“0”点,轻轻旋动“0电位钮”,使表头指针读数恰好在透光度为“O处”。
(4)将盛空白溶液的比色杯放入比色杯架中的第一格内,把比色杯暗箱盖子轻轻盖上,转运光量调节器,使表头指针指在透光度为“100”处。
(5)将盛有待测溶液的比色杯放入比色杯架中的其他格内,盖上暗箱盖,拉动比色杯架的拉杆,使测定杯进入光路,此时表头指针所示即为该待测溶液的吸光度A。
读数后,打开比色杯暗箱盖切断光源。
重复上述测量操作1一2次,读取相应的吸光度,取其平均值。
(6)比色完毕后,关上电源开关,取出比色杯,将比色杯暗箱盖好,清洗比色杯并晾干.
三、电刺激器具
(一)锌铜弓(图2-6)
锌铜弓是简单的电刺激器,常用来检验神经肌肉标本的兴奋性。
锌铜弓有两臂(即刺激电极),
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