大学生创新性实验计划项目合同书.docx
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大学生创新性实验计划项目合同书
福建医科大学
大学生创新性实验计划项目
执行合同书
项目编号
C09026
项目名称
肢体缺血预适应对肝门阻断再灌注后
肠粘膜PGE2和COX-2mRNA表达的作用
学院名称
医学技术与工程学院
项目负责人
卢晨昕
联系电话
*************
*******@
指导教师
***
联系电话
**************
项目起止时间
2009年4月至2010年4月
填写日期
2009年6月28日
福建医科大学教务处制
二○○九年六月
一、执行合同填报说明
1.福建医科大学教务处为甲方,项目负责人为乙方,项目负责人所属学院为丙方。
根据《中华人民共和国合同法》等法律法规,为顺利完成本项目的研究开发任务,经三方协商一致,订立本合同。
执行合同一式三份,甲、乙、丙三方各存一份。
任何一方不得擅自修改。
2.必须按照原申报书中所列项目和核定的要求填写,要求内容完整、表达明确、文字清楚。
3.本合同自签定之日起生效。
二、本项目主要研究内容
肝脏手术中肝门阻断是减少出血的重要手段。
开放后再灌注不但有肝脏缺血再灌注损伤,还产生肠道组织淤血再灌注损伤。
阻断门静脉后肠道血液回流中断、组织淤血、出血和血栓形成。
再灌注过程中淤血组织血流恢复较缺血组织更缓慢和不完全,损伤程度较缺血性损伤更重。
肠道损伤被认为是术后多脏器功能衰竭(MOSF)引擎。
前列腺素E2(PGE2)是胃肠道中最早发现的具有细胞保护作用的物质,而环氧合酶(COX)是PGE2合成的关键酶,介导由花生四烯酸合成PGE2的起始步骤,在消化道黏膜的病理生理及黏膜保护方面发挥着重要作用。
其中COX-1是结构型酶,与内质网相连,表达于多种类型的细胞;COX-2是诱导型酶,表达于胞浆和胞核,是主要的功能性酶。
缺血预适应(IschemicPreconditioning,IPC)是机体一种内源性保护机制,许多文献已报道了IPC减轻肠IR损伤,降低IR后肝实质细胞酶溢出,对肝细胞有保护作用。
实验还表明肢体缺血预适应(LimbIschemicPreconditioning,LIP)同样能为远隔组织提供相当于脏器原位IPC的保护程度。
其机制有待于进一步揭示。
多数研究认可腺苷的介导机制,腺苷是缺氧时高能磷酸盐分解产生的复合物,再灌注后释放结合腺苷A1、A3受体,激活蛋白激酶C(PKC)使线粒体的K+通道开放,K+内流和去极化能延迟细胞在随后缺血中的死亡。
还能通过减少细胞色素C释放减少凋亡。
本研究拟在大鼠肝门阻断再灌注模型上应用下肢缺血预适应作为干预措施,通过肠损伤生化标志物PGE2和COX-2mRNA表达等指标,探讨LIP能否减轻肠黏膜屏障损害,为临床提供理论依据。
三、本项目具体实施计划
1、技术路线:
建立肢体缺血预适应模型→建立肝门阻断再灌注模型→研究肠粘膜PGE2水平和COX-2mRNA表达→评价肝门阻断再灌注后肠黏膜损伤程度→评价肢体缺血预适应的保效应→为临床提供理论依据
2、实验内容(实验方法和步骤)
动物和麻醉
选取200-250g健康SD大鼠。
术前禁食不禁水12h。
10%水合氯醛腹腔注射麻醉并肝素化。
监测尾动脉压,连续心电监测和保温。
模型建立和实验分组
肝门阻断(HPO)模型制备:
Pringle法阻断肝十二指肠韧带阻断门静脉,肝动脉和胆总管,30min后开放再灌注。
肢体缺血预适应(LIP)模型:
参考张连元模型,在右侧腹股沟处止血带法阻断下肢血流后开放复流,参考Kuntscher和Petrishchev预适应方案阻断下肢血流10min后继以30min再灌注建立LIP。
所有动物随机分为三组。
假手术组(S组,n=8):
麻醉40min后自然苏醒,18h后经正中切口入腹,切断全部肝周小血管;不作门脉血流的阻断。
肝门阻断组(HPO组,n=8):
麻醉40min自然苏醒,18h后经正中切口入腹HPO,30min后开放再灌注。
预适应组(LIP组,n=8):
麻醉后先LIP处理(需时40min),18h后再行HPO,30min后开放再灌注。
各组动物关腹24h后处死取材。
3、研究项目
1)形态学:
肠黏膜和血管内皮(光镜)。
2)肠损伤生化标志:
放射免逸法测定前列腺素E2(PGE2)
3)RT-PCR法检测COX-2mRNA表达。
四、本项目的资助经费使用计划
实验大鼠购买:
1000元
RTPCR检测费用:
2000元
放射免疫学检查测定:
1500元
实验耗材费:
500元
总计:
5000元
其中2000元由甲方资助,剩余费用由乙方筹备。
五、本项目的预期成果
1、动物模型构建成功
2、肝门阻断再灌注后肠道粘膜屏障受损:
●前列腺素E2(PGE2)水平下降
●形态学改变,血管内皮受损,PMN浸润
●肠粘膜COX-2mRNA表达降低
3、肢体缺血预适应能减轻再灌注后肠道粘膜损害。
六、项目参加人员及分工情况
姓名
性别
出生日期
专业年级
分工内容
***
***
***
***
***
***
男
女
女
女
男
男
1969.06
1988.01
1986.11
1987.07
1988.03
1987.02
麻醉系2006级
麻醉系2006级
麻醉系2006级
麻醉系2006级
麻醉系2006级
指导课题的立题与设计,以及课题的实施,在实验过程中提出建议,并指导完成后期的数据处理与论文的撰写
负责与指导老师、所在学院负责人以及学校教务处联系并统筹安排本次项目研究的各项事宜。
管理经费,并参与所研究项目的资料查找和整理,全程参与实验的操作过程,项目完成后负责整理研究结果
参与实验经费监督管理,负责所研究项目的资料查找并收集整理,全程参与实验的操作过程,参与试验数据的记录和整理,项目完成后参与整理研究结果
负责实验仪器的管理,参与所研究项目的资料查找并收集整理,全程参与实验的操作过程,参与试验数据的记录和整理,项目完成后参与整理研究结果
负责实验室的借用与管理,动物购买,参与所研究项目的资料查找并收集整理,全程参与实验的操作过程,参与试验数据的记录和整理,项目完成后参与整理研究结果
负责动物饲养,动物管理,参与所研究项目的资料查找并收集整理,全程参与实验的操作过程,参与试验数据的记录和整理,项目完成后参与整理研究结果
七、本项目分季度实施进度安排
2009.7.6~2009.7.12根据选择的课题,详细查找和阅读中、西文文献
2009.7.13~2009.7.19在此基础上进行文献综述
2009.7.20~2009.7.25在指导老师的帮助下完善课题设计
2009.7.25~2009.7.31联系借用实验室
2009.8.1~2009.8.6购买实验器具、药品
2009.8.7~2009.8.12购买实验动物
2009.8.13~2009.8.26开始实验操作
2009.8.27~2009.8.31实验检测
2009.10.1~2009.10.7进行阶段性总结
2010.1.28~2010.2.4进行数据整理
2010.2.5~2010.2.11数据统计分析
2010.2.17~2010.2.22总结实验结果
2010.2.23~2010.3.2撰写论文
八、本项目的成果提供形式
成果提供方式为:
课题组撰写相关医学论文1篇。
九、项目的鉴定验收
本项目研究任务按合同完成后两个月内,乙方应提交鉴定验收的完整技术资料和总结,甲方根据本合同约定内容组织鉴定验收。
十、成果的权属和保密
本项目研究取得的成果,其知识产权归属及成果转化,按国家和本省的有关规定执行。
上述研究成果涉及国家利益的,乙方有偿转让之前,应经过甲方的审查批准;涉及国家机密的,按国家《保密法》有关规定执行。
十一、风险的承担
研究计划执行过程中,因发生不可抗力、因本项目研究的预期成果已由他人公开或确因现有水平和条件难以克服的技术困难,致使研究工作成为不必要或不可能,乙方应提出书面报告(若属于难以克服的技术困难,应附上有关专家的书面认定意见),甲方经核实后提出处理意见。
所造成的损失由双方投入的经费承担,不足部分甲方不再追加投入经费,剩余部分应返还甲方。
十二、违约责任
1.各方应严格遵守本合同的各项条款,因合同执行过程中出现的客观原因,任何一方认为需要修改变更合同条款内容的,需与对方协商,签订修改变更协议后方可执行。
2.甲方有权按照合同的要求,监督检查乙方项目进展和经费使用情况,乙方应予以配合。
甲方无故未按合同约定拨付研究经费,应承担相应的违约责任。
3.乙方有权按照合同的要求,组织实施研究工作,合理使用研究经费;乙方应分季度向甲方报送项目执行情况和经费决算。
乙方未按本合同第二条、第三条、第四条、第五条、第六条、第七条、第八条的内容要求实施研究,或私自修改变更本合同其他条款内容的;乙方未按规定使用研究经费,或私自挪用研究经费的,甲方有权暂停拨款直至解除合同,收回投入的经费。
4.丙方应按照本合同的要求,协助甲方监督、检查乙方项目进展和经费使用情况,协调解决合同执行过程中出现的问题。
合同履行过程中,如丙方发现乙方存在或可能存在无力或不愿忠实履行合同义务的情形时,应及时向甲方提出相应的修改、变更合同条款、暂停拨款或解除合同等建议。
因丙方原因造成乙方研究工作延误、停滞、失败的,丙方应承担相应责任。
十三、争议的解决办法
本合同执行过程中如发生争议,应协商解决,也可以请第三方进行调解,协商、调解不成的,提请有关机构仲裁解决。
十四、其它
本合同的未尽事宜,或本合同执行过程中出现的问题,经各方协商签订的附加条款将作为本合同的组成部分。
甲方:
福建医科大学教务处
甲方法人代表或委托代理人(签字):
单位公章
年月日
乙方:
项目负责人
本人签字
指导教师签字
年月日
丙方(项目负责人所属学院):
丙方法人代表或委托代理人(签字):
单位公章
年月日
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