显微化学.docx
- 文档编号:9283187
- 上传时间:2023-02-04
- 格式:DOCX
- 页数:44
- 大小:56.99KB
显微化学.docx
《显微化学.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《显微化学.docx(44页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
显微化学
第三章显微化学(microchemistry)
显微化学(microchemistry)是应用某种化学处理,使组织或细胞的某一部分起化学变化而产生特殊的染色反应,将组织或细胞内的某种化学成分在组织切片内予以显示,并通过显微镜直接鉴定组织或细胞中内含物的存在、化学性质、含量和分布的一种方法。
它包括“组织化学(histochemistry)”与“细胞化学(cytochemistry)”两方面。
组织化学是运用化学、免疫学和分子生物学等学科的原理和知识,对组织和细胞中的化学成分、反应规律进行定性、定位和定量研究的科学和技术手段,属于一门形态学科和机能学科相结合的边缘学科。
细胞化学是化学、物理学和生物学的交叉学科,是研究细胞中无机及有机物质的定性、定量及定位的原理和方法,更重要的是研究生物大分子结构与功能的科学。
它在显微、亚显微及超微三个不同层次上揭示生物细胞的结构和及其所执行的任务(功能),涉及许多相关的大型精密仪器的原理与操作,样品制作技术、结构分辨技术、功能活性的微区分析和定位技术。
发展趋势是定量细胞化学,即在不破坏细胞形态结构的状况下,用生化的和物理的新技术对各种组分做定量的分析,研究其动态变化,了解细胞代谢过程中各种细胞组分的作用。
第一节注意事项
(一)材料的选择很重要,不仅要直接采用新鲜或生活状态下的材料进行固定,同时还必须注意材料的不同生长时期、器官的年龄以及昼夜的差别等,这些都会影响内含物的改变;
(二)为了使研究材料的内含物保持在原来的位置和避免产生化学上与物理学上的改变,制片时经常采用徒手切片法或冰冻切片法;
(三)所研究的材料要新鲜,最好是从健全的生物体上取下后立即进行制片工作;
(四)鉴定时所用材料的切片宜较厚,过薄的切片反而得不到良好的结果。
但鉴定某些酶的切片,则须切得很薄;
(五)在鉴定时所观察的材料必须多做几份,这样才不致因生长时期、外界条件和昼夜变动等所引起的变化而得不到正确的结论;
(六)鉴定时所用试剂应注意它的特殊性,必须是对所欲鉴定的某一物质有专化特性,若同时还能对其他物质起反应,那就应设法先除去这种物质;
(七)对某些物质(如核酸、酶等)的鉴定,需要同时做对照片子进行比较。
第二节无机物质的鉴定
一、钙(Ca)
鉴定钙的方法很多,在植物组织中,可用硫酸、碳酸或草酸来处理,使它成为硫酸钙、碳酸钙或草酸钙的结晶,很容易被鉴别出来。
(一)方法I
1.试剂
3%硫酸
40%酒精
2.程序
(1)将材料固定于无酸的酒精或无酸的福尔马林中;
(2)将切片放到40%酒精中;
(3)加上盖玻片,在它的下面加入3%的硫酸;
(4)检查是否有无色的针状硫酸钙结晶。
(二)方法II
1.试剂
5%硝酸银
2.程序
(1)石蜡切片溶去石蜡,下降至水,再在蒸馏水中冲洗;
(2)移入硝酸银溶液中,放置在暗处1小时后,即在暗处用蒸馏水冲洗;
(3)移至光亮处约30分钟或稍长;
(4)在蒸馏水中洗净,脱水和透明后封藏。
3.结果
钙盐呈黑色。
二、镁(Mg)
下述方法对动、植物组织均适用。
(一)试剂
1.醌茜素试剂(quinalizarinreagent) 将醌茜素100mg和NaAc结晶500mg研碎,然后将此混合物500mg溶于100ml5%的氢氧化钠中;
2.0.2%钛黄(titanyellow);
3.l0%NaOH;
4.0.1%偶氮蓝(azoblue)。
(二)程序
1.制备切片;
2.加l~2滴醌茜素试剂于切片上,随后又加上1~2滴10%NaOH;
3.在另外一张片子上加1~2滴钛黄溶液,随后加1~2滴10%NaOH;
4.再在第三张片子上加1~2滴偶氮蓝。
(三)结果
如有镁存在时,数小时后,则呈现下列各种不同颜色:
1.醌茜素试剂处理的呈现蓝色。
2.钛黄处理的染成砖红色。
3.偶氮蓝染的为紫色。
三、铁(Fe)
在鉴定铁的时候,材料必须减少与铁器的接触。
切片刀须无锈而且不是新磨过的,解剖针应用玻璃针来代替。
(一)试剂
1.2%亚铁氰化钾(黄血盐)或2%铁氰化钾(赤血盐)(两种试剂均需新配);
2.酸酒精以70%酒精配制1%HCl;
3.有机铁试剂等量的1.5%亚铁氰化钾和0.5%盐酸混合液(新配);
4.有机铁转换剂3%HNO3或4%H2SO4溶于95%酒精中(硫酸试剂作用较慢)。
(二)程序
1.鉴定无机铁的程序
(1)将材料固定在95%酒精中24-48小时;
(2)制备石蜡切片;
(3)去石蜡,下降至蒸馏水中;
(4)在2%铁氰化钾或亚铁氰化钾中染3-15分钟;
(5)在水中冲洗,用曙红或番红对染;
(6)脱水、透明和封藏在溶于苯的树胶中。
2.鉴定有机铁的程序
(1)-(3)步与鉴定无机铁相同;
(4)将切片在有机铁转换剂中浸24-36小时(温度为35℃),使铁从束缚形式中解放出来;
(5)先在水中,再在蒸馏水中冲洗;
(6)在有机铁试剂中浸几分钟(不得超过5分钟);
(7)-(8)与鉴定无机铁(5)-(6)相同,
(三)结果
有铁存在呈现蓝色。
四、磷酸盐(Phosphate)
(一)试剂
1.固定液加几滴冰醋酸于10ml的95%酒精(2份)和福尔马林(1份)的混合液中;
2.钼酸盐溶液0.5g钼酸铵溶解于20ml蒸馏水小,加10ml30%浓盐酸,然后再用蒸馏水冲淡到50ml;
3.醋酸联苯胺溶液25mg联苯胺(benzidine)溶解于5ml冰醋酸中,然后用蒸馏水冲淡至50ml;
4.醋酸钠饱和溶液。
(二)程序
1.将材料在上述固定液中固定,并在水中洗净;
2.将小块薄的组织在钼酸盐溶液中浸2-3周(温度10-12℃),再在温度20-25℃下浸2-3天。
其目的在于使有机磷水解,游离的磷沉淀。
同时在低温下组织不易转变;
3.在组织上加一滴醋酸联苯胺,约3分钟,然后加2滴醋酸钠饱和溶液;
4.封藏在甘油中(甘油系保存在贮有结晶的醋酸钠瓶中)。
(三)结果
着强烈蓝色者为磷酸盐。
第三节有机物质的鉴定
一、脂类(lipid)
(一)一般测定:
脂类(如脂肪、卵磷脂、木栓质和角质等)一般都可用苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ来进行鉴别染色。
1.试剂:
⑴染料常备溶液将0.2g苏丹Ⅳ溶于100ml纯酒精中加热,使之溶解成为饱和的酒精溶液。
贮藏待用(可用六个月);
⑵染色溶液取染色常备溶液7份慢慢地加入45%酒精9份,并搅拌之,待混合后静止1小时,即可过滤(此混合液仅在4小时内可用)。
2.程序
⑴将福尔马林固定的切片放在50%的酒精中5分钟;
⑵在染色液中染30分钟(温度为37℃);
⑶再在50%酒精中放几秒钟(过一下);
⑷在蒸馏水中冲洗几分钟;
⑸移入明矾苏木精中染色;
⑹在碱性清水中洗几分钟;
⑺封藏在甘油中。
3.结果
脂类染红色。
由于其存在的部位不同而区别出它的类别;如木栓质与角质系存在于植物细胞的细胞壁中,而脂肪则在细胞内成油滴状。
(二)植物脂类的测定
在植物学中测定脂肪最常用的是苏丹Ⅲ(SudanⅢ)或苏丹Ⅳ的酒精溶液,其配方有以下两种:
1.试剂
A苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ0.1g
95%酒精50m1
甘油50m1
B苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ0.5g
70%酒精100m1
2.方法:
1.将切片材料放在载玻片上;
2.滴一滴苏丹Ⅲ溶液,30分钟到1小时,微微加热可加速染色时间;
3.用50%的酒精迅速洗去多余的染料;
4.用甘油封片。
3.效果:
脂肪被染成淡黄色至红色。
二、核酸
(一)方法I孚尔根反应,Feulgenreaction
鉴定脱氧核糖核酸(DNA)的方法。
对照切片可在90℃的5%三氯醋酸中处理15分钟,即可除去DNA和RNA,或在0.1%DNA酶溶液【溶于麦基尔文(Mcllvaine)氏缓冲液,pH6.5】中处理7小时,以除去DNA(在室温中进行)。
(二)方法II甲基绿-派洛宁显示DNA和RNA法
甲基绿(methylgreen)和派洛宁(pyronin,又叫吡咯红、派罗宁、焦宁)均为碱性染料,它们能分别与细胞内的DNA和RNA结合而呈现不同颜色。
当甲基绿和派洛宁作为混合染料时,甲基绿和染色质中的DNA选择性结合显示绿色;派洛宁和核仁、细胞质中RNA选择性结合显示红色。
其原因可能是两种染料的混合染液有竞争作用,同时两种核酸分子都是多聚体,而其聚合程度各不不同。
甲基绿易与聚合度高的DNA结合呈现绿色,而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色。
甲基绿-派洛宁法已广泛用于细胞学和胚胎学的研究。
1.试剂:
A液
5%派洛宁水溶液17.5ml;
2%甲基绿水溶液10ml;
蒸馏水250ml;
B液
0.2M醋酸缓冲液pH4.8;
0.2M醋酸钠(MW=136.007)2.7214g置容量瓶中加蒸馏水至100ml;
0.2M醋酸,醋酸1.12m1加蒸馏水至100ml;
0.2M醋酸钠20ml+0.2M醋酸30ml配成pH4.8,用二种基液(0.2M醋酸钠及0.2M醋酸)调节pH。
在使用前将A、B液等量混合,混合液可保存一周。
甲基绿常混有甲基紫,应先除去甲基紫。
其法为将甲基绿配成2%的水溶液,装入分液漏斗,加入适量的氯仿,充分摇荡。
然后静置待甲基紫溶于氮仿而呈紫色时,弃去氯仿部分,保留水溶性部分,甲基绿按此法连续用氯仿处理,直至氯仿中不再有紫色为止。
然后将甲基绿溶液保存在冰箱中备用。
派洛宁(Y)也有化学杂质,也可用氯仿处理,派洛宁(G)较纯,不必处理。
2.方法:
⑴将已脱蜡的切片复水由100%→95%→85%→70%酒精→蒸馏水,在蒸馏水中洗三次;
⑵染色将甲基绿-派洛宁混合液滴1-3滴于切片上,染色10-30分钟;
⑶水洗去浮色(必须迅速,否则染色会脱掉)用纱布或吸水纸吸去残余的水分,但不要吸得过干,要留有少许水分在材料上(过干则不起分色作用,水分过多则红色易脱掉);
⑷分色纯丙酮分色30秒(时间长短视材料而定),取出吸干;
⑸1/2丙酮+1/2二甲苯1分钟;
⑹丙酮1份+二甲苯9份,30秒;
⑺二甲苯换两次;
⑻加拿大树胶封片。
3.效果:
DNA呈绿色,RNA呈红色。
4.对照
可用三氯醋酸去除RNA;或在80℃的10%过氯酸中处理15分钟以除去RNA和DNA。
三、蛋白质(Protein)
(一)汞-溴酚蓝(mercury-bromophenolblue)
1.试剂
氯化汞(HgCl2)1g
溴酚蓝(bromophenolblue)0.05g
2%醋酸水溶液100ml
2.方法:
⑴材料用Carnoy、乙醇、甲醛、FAA等固定液固定(避免用锇酸);
⑵将已脱蜡的切片复水由100%→95%→85%→70%酒精→蒸馏水;
⑶染色将切片浸入汞-溴酚蓝染色液中,室温2小时;
⑷0.5%醋酸水溶液洗5分钟,以除去附着的染料;
⑸流水冲洗;
⑹叔丁醇脱水,二甲苯透明,加拿大树胶封片。
3.效果:
蛋白质染成鲜蓝色。
(二)伊红-酒精苦味酸法
1.试剂
伊红1g
95%酒精的苦味酸饱和溶液50m1
2.方法:
⑴将切片置载玻片上;
⑵滴一滴伊红-酒精苦味酸饱和溶液,置显微镜下观察,糊粉粒的基质呈蓝色;
⑶从盖玻片边缘加入数滴纯酒精,此时,球蛋白成为无色,蛋白质结晶呈现黄绿色;
⑷透明、封片用吸水纸吸去残余的酒精,用丁香油透明,加拿大树胶封片。
3.效果:
蛋白质结晶呈现黄色,球蛋白呈现粉红色,基质成为暗红色。
(三)米龙反应I(Millonreaction)
蛋白质中含有酪氨酸(tyrosine)者应用此法来测定。
1.试剂
米龙试剂的配制:
(1)40%硝酸 以400ml浓硝酸(比重1.42)加到600ml的蒸馏水中,并静置48小时;
(2)硝酸-硝酸汞饱和水溶液 以40%硝酸1份,加燕溜水9份冲淡。
然后将硝酸汞慢慢加入,边加边搅拌,使之充分饱和(约加1.8份),静置2-3天后过滤;
(3)米龙试剂【本斯利(Bensley)和格什(Gersh)氏修订液】在上述过滤液400ml中加40%HNO33ml和NaNO31.4g(此混合液应保存在冰箱中,超过一周其效果将减弱);
(4)2%HNO3浓硝酸(比重1.42)2ml加到蒸馏水98ml中。
2.程序
(1)材料固定于10%中性福尔马林或卡诺氏液(3:
1),制成石蜡切片;
(2)切片以苯溶蜡,约5分钟;
(3)在纯丙酮中充分洗涤,并在空气中晾干,约2-4分钟;
(4)同时将四张切片放在大培养皿中,用滴管将米龙试剂滴在切片上,然后盖上培养皿,放在60℃温箱中约30-60分钟;以后每隔15分钟取出一张片子观察,以红色达到最显著者为最好。
这一步骤在室温中进行亦可,但时间要延长,可每隔30-45分钟检查一片;
(5)取出的切片需用2%硝酸水溶液冲洗2分钟;
(6)很快地在70%和纯酒精中脱水;
(7)二甲苯中透明;
(8)中性树胶封藏。
3.结果
含有酪氨酸的蛋白质部分呈玫瑰色到砖红色。
(四)米龙(Millon)测定法II
1.试剂
硫酸汞10g
10%硫酸100ml
加热直至溶解,然后加蒸馏水,使最后体积至20ml。
冷却后,加入20ml0.25%亚硝酸钠。
2.方法:
⑴材料用FAA固定液固定。
⑵切片经50%酒精至蒸馏水。
⑶切片放入盛有试剂的小烧杯中,加热至沸;
⑷停止加热,使溶液冷至室温。
⑸取出切片,用蒸馏水洗三次(每次洗2分钟);
⑹甘油胶封片,或转入下步。
⑺脱水、透明、封片。
3.效果:
含有酪氨酸的蛋白质染为红色。
此法是测定蛋白质较古老的方法。
由于汞是剧毒剂,在配制时要十分谨慎小心,一定要在通风橱中进行操作,以免中毒。
(五)硝酸脱黄反应法
此法测定蛋白质可靠,凡含有酪氨酸的蛋白质,则呈现黄色反应,方法较简便,即在切片上滴一滴浓硝酸,含有酪氨酸的复合蛋白质即成鲜黄色反应,如吸去部分硝酸,加入氨液,则使黄色加深成深黄或棕黄色。
(六)罗米乌氏法(Romieu’smethod)
蛋白质中含色氨酸(tryptophane)者用此法测定。
1.试剂
磷酸糖浆(syrupphosphoricacid)。
2.程序
(1)材料固定于纯酒精或10%福尔马林或布安氏液中,制成石蜡切片;
(2)切成很厚的石蜡切片,溶蜡于二甲苯,经纯酒精→95%酒精→70%酒精;
(3)淌完过量的70%酒精;
(4)在每张切片上加一滴磷酸糖浆,放在56℃保温箱中几分钟直等到变干为止;
(5)取出在显微镜下检查。
3.结果
含有色氨酸的蛋白质呈红色或紫色。
(七)改良坂口反应法(Sakaguchireaction-Serra)
蛋白质中含精氨酸(arginine)者以此法测定。
1.试剂
(1)固定液取配制好的95%酒精-福尔马林(2:
1)混合液10毫升,加数滴冰醋酸;
(2)1%α-萘酚(α-naphthol)溶于95%酒精中。
此液需储存于冰箱中,用时以40%酒精冲淡,其比例为1:
10;
(3)4%氢氧化钠(sodiumhydroxide);
(4)2%次溴酸钠(sodiumhypobromite)加2g或近似0.7ml的溴到100ml5%氢氧化钠中并搅拌之,贮藏于冰箱;
(5)40%尿素。
2.程序
(1)将材料固定于醋酸-酒精-福尔马林混合液中,然后在水中洗净;
(2)材料移入表面皿中,并在0-50℃冰水浴锅中处理15分钟。
在表面皿中应先加入下列混合液:
1%α-萘酚溶液0.5毫升
lM氢氧化钠0.5毫升
40%尿素0.2毫升
(3)加2毫升2%次溴酸钠,3分钟后加0.2ml尿素溶液并搅拌之。
然后再加0.2毫升次溴酸钠。
3-5分钟内着色达到最高点,随后又用次溴酸钠加强处理3分钟,即可在显微镜下检查;
(4)将材料经过4个贮有甘油的小酒杯或表面皿中处理,在每个容器中停留2-3分钟。
在甘油中其颜色可保存数月。
如保存在冰箱中可阻止其褪色。
3.结果
如有含精氨酸的蛋白质,则呈现橘红色,为正反应。
(八)I-KI测定法
1.试剂
碘化钾3g
碘1g
蒸馏水100ml
2.方法及结果:
将切片材料置载玻片上,滴一滴I-KI溶液,盖上盖玻片,在显微镜下观察,含有蛋白质的细胞内呈现黄色。
例如观察花生子叶中的蛋白质,用此液染色后,蛋白质和淀粉同时染色,蛋白质呈黄色,淀粒呈蓝色。
如在染色前将切片材料先用水洗去液泡中所含的其他物质,则可保证染色反应更准确。
(九)高碘酸-无色碱性品红-苯胺蓝黑(anilineblueblack)
此法专为观察总碳水化合物和蛋白质。
染液配制见碱性品红。
1.方法:
⑴固定任意一种植物学上的固定液。
⑵切片放入水中。
⑶切片放入0.5%高碘酸水溶液中20分钟;
⑷流水冲洗10分钟后用蒸馏水浸一下;
⑸无色品红染色20分钟;
⑹漂洗切片,放入2%亚硫酸氢钠中1-2分钟;
⑺流动自来水冲洗5-10分钟;
⑻用1%苯胺蓝黑的7%醋酸溶液染色;
⑼短暂浸入7%醋酸;
⑽用含5%醋酸的甘油封片,凡土林蜡混融剂封边。
2.效果:
多糖呈红色、蛋白质呈黑色。
四、酶
酶是一切生物体内具有催化作用的特殊蛋白质,在细胞各个部位都有酶存在,至今已发现了8000多种,至少有2500种有可能被应用,因而,很有必要将它们充分地显示出来,但目前应用组织化学显示的酶不多,仅有几十种至百余种。
根据国际酶学会议(1961)的分类,可将所有的酶分为氧化还原酶、水解酶、转移酶、裂合酶、异构酶和合成酶等六大类。
酶组织化学检测时必须注意的问题:
①组织的准备和切片的制作,必须注意不要影响酶的分布和活性(这是显示酶的活性及形态学上的鲜艳度所必需的);②底物和辅助试剂必须以同等的速度进入所有的细胞及其所有的部分;③如有可能仅用一种酶便可分解底物;④辅助试剂必须做到既不要影响酶的反应,也不要影响底物的进入;⑤酶反应产物必须快速地被辅助试剂俘获,这种必须依靠细胞内环境发生;⑥最终产物必须快速沉淀,例如它在水溶液或在脂类物中必须是实际上的不溶性,而且它必须是无晶形的(至少是微晶形的)稳定的;⑦参与反应中的底物必须不被限制,并且不被吸附到酶反应部位的其它结构上。
(一)氧化酶
1.试剂
(1)1%α-萘酚的50%酒精溶液;
(2)0.75%对苯二胺;
(3)1.7%苏打水溶液;
使用前将上述三溶液各1ml混合在一起。
2.程序
(1)徒手切片将材料切成薄片;
(2)切片放在载玻片上加几滴上述混合液;
(3)在显微镜下检查。
3.结果
含有氧化酶的组织或细胞染成蓝色。
(二)琥珀酸脱氢酶
1.试剂
(1)作用液将2ml0.05%亚甲基蓝(methyleneblue)加入到2ml10%琥珀酸钠(丁二酸钠,sodiumsuccinate)中,再以1/15M磷酸盐缓冲液冲淡到l0ml(pH7.6-8.0)。
(2)对照液在作用液中除去琥珀酸钠液。
2.程序
(1)制备徒手切片或冰冻切片;
(2)将切片在盖玻片下用作用液处理10-15分钟,必须注意应避免其中有气泡存在。
然后用石蜡将盖玻片四周封起来;
(3)将切片在盖玻片下用对照液处理10-15分钟,用同样方式封起来;
(4)在显微镜下检查,以比较两者的结果。
3.结果
染料褪色表示有酶的活动。
(三)酸性磷酸酶(硫化铅法,Gomori,1952)
1.试剂
(1)作用液
0.1mol/L甘油磷酸钠水溶液50ml
0.5mol/L醋酸缓冲液pH为4.5500ml
硝酸铅0.6g
必须在用时需调整pH为5.0。
若发现有沉淀应过滤后再用。
保存在冰箱中可经数月仍不变质,如出现混浊就不适用了。
(2)硫化铵[(NH)4S]溶液一染色缸中加此液1-2ml;
(3)结晶紫丁香油饱和液(植物用)或2%曙红水溶液(动物用)。
2.程序
(1)将冷藏的(3-4℃)新鲜材料切成2-3毫米厚的薄片,在纯丙酮中固定,换2-3次,共约24小时,在4℃下进行。
(2)将材料浸入4%火棉胶-纯酒精溶液(1:
1)中24小时,并在贮有氯仿蒸气的干燥器中使之变硬,约24-48小时。
(3)在二甲苯中透明。
(4)用快速包埋法包埋于石蜡中(使用的石蜡溶点要低)。
(5)将包埋材料切成4-8μm的薄片,不必溶去石蜡。
(6)蜡片直接投入作用液中,随即放置在37℃保温箱中30分钟至18小时。
(7)在蒸馏水中漂洗。
(8)移入硫化铵溶液中5分钟。
(9)在蒸馏水中漂洗(动物材料在此对染),经95%酒精到纯酒精中;
(10)在二甲苯中溶去石蜡,封藏于中性树胶中。
(11)如需对染,可在二甲苯中加入几毫升结晶紫丁香油饱和液。
(12)对照片的制作
①材料不经作用液而是直接在0.001mol/L氟化钠(NaF)水溶液中,在37℃保温箱中放置30分钟至18小时。
②移入硫化铁溶液中5分钟。
③在沸水中热处理5分钟;
④其余步骤同(9)-(11)。
3.结果
酸性磷酸酶活性部位将出现硫化铅(PbS)棕黄至棕黑色沉积物。
(四)碱酸磷酸酶(硫化钴法,Gomori,1952)
1.特殊试剂
(1)作用液动物用植物用
3%(0.1mol/L)甘油磷酸钠水溶液20ml
2%(0.2mol/L)氯化钙水溶液4ml5ml
2%氯化镁或硫酸镁2ml2ml
2%(0.1mol/L)二乙基巴比妥酸钠水溶液30ml10ml
蒸馏水30ml33ml
此混合液如呈现混浊即需过滤。
动物用的作用物(甘油磷酸钠)对植物组织没有作用,因此作用液配成0.01mol/LATP溶液。
然后再将此液的pH用1mol/L氢氧化钠调整到9.4;
(2)2%硝酸钴(或醋酸钴)水溶液;
(3)硫化铵水溶液一染色缸中加此液1-2ml;
(4)对染剂
①植物用结晶紫丁香油饱和液;
②动物用2%曙红水溶液;
(5)1%火棉胶用等量的无水酒精和乙醚配成。
2.程序
(1)将冷藏的(3-4℃)新鲜材料切成2-3mm厚的薄片,在纯丙酮中固定,换2-3次,共约24小时,在40℃下进行。
(2)将材料浸入1%火棉胶中,换2-3次,全部时间约12-24小时;
(3)在贮有氯仿蒸气的干燥器中使材料变硬,共需24-48小时;
(4)在二甲苯中透明;
(5)用快速包埋法包埋于石蜡中(石蜡的熔点用最低的);
(6)将包埋材料切成4-8μm的薄片,不必溶去石蜡;
(7)将切片直接投入作用液,随即放置在37℃保温箱中30分钟至12小时;
(8)在蒸馏水中漂洗;
(9)移入2%硝酸钴中l-5分钟;
(10)在蒸馏水中漂洗;
(11)移入硫化铵液中l-5分钟;
(12)在蒸馏水中漂洗;
(13)若为动物材料在此对染,即在2%曙红中染2-3分钟。
若为植物材料直接进入下一步;
(14)脱水,溶去石蜡和封藏;
(15)如为
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 显微 化学
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)