食品分析实验指导书级食安.docx

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食品分析实验指导书级食安

实验指导书

院系：

茶与食品学院

专业：

食品质量与安全

课程：

食品理化检验

编者：

王淑培

目录

实验一食品中水分含量的测定2

实验二总灰分的测定9

实验三钙的测定11

实验四铁的测定16

实验五总酸度的测定19

实验六有效酸度—pH值的测定21

实验七挥发酸的测定23

实验八脂肪的测定25

实验九还原糖的测定31

实验十总糖的测定34

实验十一蛋白质的测定37

实验十二挥发性盐基氮的测定39

实验十三氨基酸总量的测定41

实验十四维生素C含量的测定43

实验十五氯化钠测定46

实验十六番茄酱中番茄红素的测定51

实验十七碘含量测定52

实验十八硒的测定54

实验十九二氧化硫及亚硫酸盐测定57

实验二十亚硝酸盐的测定59

实验二十一多酚类物质总量测定61

实验二十二黄酮类化合物含量的测定63

实验二十三紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠的含量65

附录1标准滴定溶液的配制及标定69

附录2常用洗涤液的配制74

附录3　常用指示剂的配制与变色范围75

附录4　常用酸、碱的浓度表76

实验一食品中水分含量的测定

（常压干燥法）

一、实验目的

1.了解水分测定的意义。

2.掌握直接干燥法测定水分的方法。

3.掌握恒温干燥箱的正确使用方法。

二、实验原理

在一定温度（100～105℃）和压力（常压）下，将样品放在烘箱中加热，样品中的水分受热以后，产生的蒸汽压高于空气在恒温干燥箱中的分压，使水分蒸发出来，同时，由于不断的加热和排走水蒸汽，将样品完全干燥，干燥前后样品质量之差即为样品的水分量，以此计算样品水分的含量。

三、实验仪器

1.常压恒温干燥箱2.玻璃称量皿或带盖铝皿

3.电子天平（万分之一）4.干燥器

四、实验步骤

1.将称量皿洗净、烘干，置于干燥器内冷却，再称重，重复上述步骤至前后两次称量之差小于2mg。

记录空皿中m1。

2.称取2.00～5.00g样品于已恒量的称量皿中，加盖，准确称重，记录重量m2。

3.将盛有样品的称量皿置于95～105℃的常压恒温干燥箱中，盖斜倚在称量皿边上，干燥2小时（在干燥温度达到100℃以后开始计时）。

4.在干燥箱内加盖，取出称量皿，置于干燥器内冷却0.5小时，立即称重。

5.重复步骤3、4，直至前后两次称量之差小于2mg。

记录重量m3。

五、计算

式中m1——干燥前样品与称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g；

m2——干燥后样品与称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g；

m3——称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g。

六、注意事项

1．固态样品必须磨碎，全部经过20~40目筛，混合均匀后方可测定。

水分含量高的样品要采用二步干燥法进行测定。

2．油脂或高脂肪样品，由于油脂的氧化，而使后一次的质量可能反而增加，应以前一次质量计算。

3．对于黏稠样品（如甜炼乳或酱类），将10g经酸洗和灼烧过的细海砂及一根细玻璃棒放入蒸发皿中，在95～105℃干燥至恒重。

然后准确称取适量样品，置于蒸发皿中，用小玻璃棒搅匀后放在沸水浴中蒸干（注意中间要不时搅拌），擦干皿底后置于95～105℃干燥箱中干燥4小时，按上述操作反复干燥至恒重。

4．液态样品需经低温浓缩后，再进行高温干燥。

5．根据样品种类的不同，第一次干燥时间可适当延长。

6．易分解或焦化的样品，可适当降低温度或缩短干燥时间。

实验一食品中水分含量的测定

（真空干燥法）

一、实验目的

1.了解水分测定的意义。

2.掌握真空干燥箱的正确使用方法。

二、实验原理

利用在低压下水的沸点降低的原理，将取样后的称量皿置于真空烘箱内，在选定的真空度与加热温度下干燥到恒重。

干燥后样品所失去的质量即为水分含量。

三、实验仪器

1.真空干燥箱2.玻璃称量皿或带盖铝皿

3.电子天平（万分之一）4.干燥器

四、实验步骤

1.干燥条件温度：

40～100℃，受热易变化的食品加热温度为60～70℃（有时需要更低）。

2.压强0.7～13.3kPa（5～100mmHg）。

3.样品测定

将称量皿在105℃下烘干至恒重，称量（精确到0.1mg），取试样3～4g，置于称量皿内，再称重（精确到0.1mg），将称量皿放人干燥箱内，关闭干燥箱门，启动真空泵，抽出干燥箱内空气至所需压力，并同时加热至所需温度，关闭通向水泵或真空泵的活塞，停止抽气，使干燥箱内保持一定的温度与压力。

经过一定时间后，打开活塞，使空气经干燥装置慢慢进入，待干燥箱内压力恢复正常后再打开，取出样品，置于干燥器内0.5小时后称重，重复以上操作至恒重。

五、计算

式中m1——干燥前样品与称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g；

m2——干燥后样品与称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g；

m3——称量皿（或蒸发皿加海砂、玻璃棒）的质量，g。

六、注意事项

1.本法适用于在100℃以上加热容易变质及含有不易除去结合水的食品，如糖浆、味精、蜂蜜、果酱等。

2.称量皿有玻璃和铝质两种，前者适用于各种食品，后者导热性好、质量轻，常用于减压干燥法。

但铝盒不耐酸碱，使用时应根据测定样品加以选择。

3.称量皿的规格：

以样品置于其中，平铺开后厚度不超过1/3为宜。

实验一食品中水分含量的测定

（蒸馏法）

蒸馏技术包括用不溶于水的高沸点溶剂与样品中的水分共沸蒸馏，收集馏分测量水的体积。

现在使用两种方法，即直接蒸馏和回流蒸馏，并使用多种溶剂，例如：

在直接蒸馏中使用沸点比水高并与水互不相溶的溶剂，样品用矿物油或沸点比水高的液体在远高于水沸点的闪点温度下加热。

而其他的互不相溶的液体可使用仅比水的沸点略高的溶剂，如甲苯、二甲苯、苯。

其中，甲苯进行回流蒸馏是应用最广泛的方法（GB/T5009.3-2010食品中水分的测定）。

一、实验目的

1.了解水分测定的意义。

2.学习并掌握蒸馏法测定食品中水分的原理和方法。

二、实验原理

本法为GB/T5009.3-2010第三法，基于两种互不相溶的液体二元体系的沸点低于各组分沸点的原理，把不溶于水的有机溶剂和试样共同放人蒸馏式水分测定装置中加热蒸馏，试样中的水分与溶剂蒸气一起蒸发，冷凝并收集馏出液于接收管内，由于密度不同，馏出液在接收管中分层。

根据馏出液中水的体积计算水分质量分数。

避免了挥发性物质减少的质量以及脂肪氧化对水分测定造成的误差。

因此本法适用于含较多挥发性物质的食品如油脂、香辛料等水分的测定，不适用于水分含量小于1g／（100g）的样品。

特点：

换热高效，测定快速；加热温度较低，故对易氧化、分解、热敏性以及含大量挥发性组分的样品的测定准确度好。

适用范围：

广泛用于谷类、果蔬、油类、香料等多种样品的水分测定，特别对于香料，此法是唯一公认的水分含量的标准分析法。

不适用于测定水分含量小于1g/100g的样品。

三、实验仪器与试剂

1.分析天平：

感量为0.1mg；

2.水分测定器：

如图所示（带可调电热套）；

3.水分接收管容5mL，最小刻度值0.1mL，

容量误差小于0.1mL；

4.甲苯或二甲苯（化学纯）：

取甲苯或二甲苯，先以

水饱和后，分去水，进行蒸馏，收集馏出液备用。

四、实验步骤

准确称取适量试样（应使最终蒸出的水在2～5mL，取样量不得超过蒸馏瓶的2/3），放入250mL锥形瓶中，加新蒸馏的甲苯（或二甲苯）75mL，连接冷凝管与水分接收管，从冷凝管顶端注入甲苯，装满水分接收管。

加热慢慢蒸馏，使每秒钟的馏出液为2滴，待大部分水分蒸出后，加速蒸馏约4滴/s，当水分全部蒸出后，接收管内水分体积不再增加时，从冷凝管顶端加甲苯冲洗。

如冷凝管壁附有水滴，可用附有小橡皮头的铜丝擦下，再蒸馏片刻至接收管上部及冷凝管壁无水滴附着，接收管水平面保持10min不变为蒸馏终点，读取接收管水层的容积。

五、计算

式中w——试样中水分的含量，mL/（100g）；

V——接收管内水的体积，mL；

m——式试样的的质量，g。

下表列出了部分可用于水分测定的有机溶剂，最常用的是苯、甲苯和二甲苯。

样品的性质是选择溶剂的重要依据，同时还应考虑有机溶剂的理化特性，如湿润性、热传导性、化学惰性、可燃性等。

对热不稳定食品，一般不采用二甲苯，因为它的沸点高，应选择诸如苯、甲苯或甲苯一二甲苯的混合液等低沸点溶剂；对一些含有糖分、可分解析出水分的样品，如脱水洋葱和脱水大蒜，宜选用苯为溶剂；测定奶酪水分时可用正戊醇+二甲苯（1+1）混合液。

使用比水重的有机溶剂，其特点是样品会浮在上面，不易过热及炭化，又安全防火，但应注意选择相应的水分接收管。

六、注意事项

1.蒸馏法测量水分产生误差的原因很多，如样品中水分没有完全蒸发出来，水分附集在冷凝器和连接管内壁，水分溶解在有机溶剂中，比水重的溶剂被馏出冷凝后，会穿过水面进入接收管下方，生成了乳浊液，馏出了水溶性的成分等。

2.直接加热时应使用石棉网，最初蒸馏速度应缓慢，以每秒钟从冷凝管滴下2滴为宜，待刻度管内的水增加不显著时加速蒸馏，每秒钟滴下4滴。

没水分馏出时，设法使附着在冷凝管和接收管上部的水落入接收管，再继续蒸馏片刻。

蒸馏结束，取下接收管，冷却到25。

C，读取接收管水层的容积。

如果样品含糖量高，用油浴加热较好。

3.样品为粉状或半流体时，将瓶底铺满干净的海砂，再加样品及无水甲苯。

将甲苯经过氯化钙或无水硫酸钠吸水，过滤蒸馏，弃去最初馏液，收集澄清透明液即为无水甲苯。

4.为改善水分的馏出，对富含糖分或蛋白质的黏性试样宜分散涂布于硅藻土上或放在蜡纸上，上面再覆盖一层蜡纸，卷起来后用剪刀剪成6mmX8mm的小块；对热不稳定性食品，除选用低沸点溶剂外，也可分散涂布于硅藻土上。

5.为防止水分附集于蒸馏器内壁，需充分清洗仪器。

蒸馏结束后，如有水滴附集在管壁，用绕有橡皮线并蘸满溶剂的铜丝将水滴回收。

为防止出现乳浊液，可添加少量戊醇、异丁醇。

实验二总灰分的测定

一、实验目的

1.了解灰分测定的意义和原理。

2.掌握灰分测定的方法。

3.掌握马弗炉的使用方法。

二、实验原理

一定量的样品炭化后放入高温炉内灼烧，使有机物质被氧化分解成二氧化碳、氮的氧化物及水等形式逸出，剩下的残留物即为灰分，称量残留物的质量即得总灰分的含量。

三、仪器与试剂

1．实验仪器

①分析天平（d=0.1mg）②高温炉

③电炉④坩埚

⑤坩埚钳⑥干燥器。

2．实验试剂

①1：

4盐酸溶液②6mol/L硝酸溶液

③36%过氧化氢④0.5%三氯化铁溶液和等量蓝墨水的混合液

⑤辛醇或纯植物油

四、实验步骤

1．瓷坩埚的准备

将坩埚用盐酸（1：

4）煮1～2小时，洗净、晾干，用三氯化铁与蓝墨水的混合液在埚外壁及盖上写编号，置于500～550℃高温炉中灼烧1小时，于干燥器内冷却至室温，称量，反复灼烧、冷却、称量，直至两次称量之差小于0.5mg，记录重量m1。

2．准确称取1～20g样品于坩埚内，并记录重量m2。

3．炭化

将盛有样品的坩埚放在电炉上小火加热炭化至无黑烟产生。

4．灰化

将炭化好的坩埚慢慢移入高温炉（500～600℃），盖斜倚在坩埚上，灼烧2～5小时，直至残留物呈灰白色为止。

冷却至200℃以下时，再放入干燥器冷却，称重。

反复灼烧、冷却、称重，直至恒量（两次称量之差小于0.5mg），记录重量m3。

五、结果计算

式中m1——空坩埚的质量，g；

m2——样品+坩埚的质量，g；

m3——残灰+坩埚的质量，g。

六、注意事项：

1．样品的取样量一般以灼烧后得到的灰分量为10～100mg为宜。

通常奶粉、麦乳精、大豆粉、鱼类等取1～2g；谷物及其制品、肉及其制品、牛乳等取3～5g；蔬菜及其制品、砂糖、淀粉、蜂蜜、奶油等取5～10g;水果及其制品取20g；油脂取20g。

2．液样先于水浴蒸干，再进行炭化。

3．炭化一般在电炉上进行，半盖坩埚盖，对于含糖分、淀粉、蛋白质较高的样品，为防止其发泡溢出，炭化前可加数滴辛醇或植物油。

4．把坩埚放入或取出高温炉时，在炉口停留片刻，防止因温度剧变使坩埚破裂。

5．在移入干燥器前，最好将坩埚冷却至200℃以下，取坩埚时要缓缓让空气流入，防止形成真空对残灰的影响。

6．灼烧温度不能超过600℃，否则会造成钾、钠、氯等易挥发成份的损失。

实验三钙的测定

（EDTA滴定法）

一、实验目的

1．了解钙测定的意义和原理。

2．掌握EDTA滴定法测定钙的方法。

二、实验原理

EDTA是一种氨羧络合剂，在不同的pH条件下可与多种金属离子形成稳定的络合物。

Ca2+与EDTA定量地形成金属络合物，其稳定性大于钙与指示剂所形成的络合物。

在pH12～14时，可用EDTA的盐溶液直接滴定溶液中的Ca2+，终点指示剂为钙指示剂（NN），钙指示剂在pH﹥11时为纯蓝色，可与钙结合形成酒红色的NN-Ca2+。

在滴定过程中，EDTA首先与游离态的Ca2+结合，接近终点时夺取NN-Ca2+中的Ca2+，使溶液由酒红色变为纯蓝色即为滴定终点。

根据氨羧络合剂EDTA的用量计算钙的含量。

三、试剂

1．钙指示剂（NN）：

0.1%的乙醇溶液2．1%KCN溶液

3．2mol/LNaOH溶液4．6mol/LHCl溶液

5．0.05mol/L柠檬酸钠溶液：

称取14.7g二水合柠檬酸钠，用去离子水稀释至1000mL。

。

6．钙标准溶液：

准确称取0.4994g已在110℃下干燥2小时，并保存在干燥器内的基准碳酸钙于250mL烧杯中，加少量水润湿，盖上表面皿，缓慢加入6mol/LHCl10mL使之溶解，转入100mL容量瓶中，用水定容，摇匀，此溶液含钙0.2mg/mL。

7．0.01mol/LEDTA标准溶液：

精确称取3.700gEDTA二钠盐溶解并定容至1L，贮于聚乙烯瓶中。

EDTA标准溶液的标定：

准确吸取钙标准溶液10mL于100mL三角瓶中，加水10mL，用2mol/LNaOH溶液调至中性，加入1%KCN溶液1滴，0.05mol/L柠檬酸钠溶液2mL，2mol/LNaOH溶液2mL，钙指示剂5滴，用EDTA滴定至溶液由酒红色变为纯蓝色为终点。

记录EDTA的用量V（mL）。

按下式计算每毫升EDTA标准溶液相当于钙的毫克数T。

　式中：

T—每毫升EDTA标准溶液相当于钙的毫克数，mg/mL；

V—消耗EDTA标准溶液的体积，mL。

四、实验步骤

1．样品处理

精确称量3～5g固体样品或5～10g液体样品，用干法灰化后，加盐酸（1+4）5m1，置水浴上蒸干，再加人盐酸（1+4）5mL溶解并移入25mL容量瓶中，用少量热去离子水多次洗涤容器，洗液并入容量瓶中，冷却后用去离子水定容。

2．测定

准确移取样液5mL（视Ca含量而定），注人l00mL锥形瓶中，加水15mL，用2mo1/LNaOH溶液调至中性，加入1%KCN溶液1滴，0.05mol/L柠檬酸钠溶液2mL，2mol/LNaOH溶液2mL，钙指示剂5滴，用EDTA溶液滴定至溶液由酒红色变为纯蓝色为终点。

记录EDTA溶液用量V。

以蒸馏水代替样品做空白试验。

五、结果计算

式中：

T—每毫升EDTA标准溶液相当于钙的毫克数，mg/mL；

V—滴定样液消耗EDTA标准溶液的体积，mL；

V0—滴定空白消耗EDTA标准溶液的体积，mL；

V1—测定时取样液体积，mL；

V2—样液定容总体积，mL。

m—样品质量，g。

六、说明及注意事项

1．样品处理也可采用湿法消化：

准确称取样品2～5g，加人浓硫酸5～8mL，浓硝酸5～8mL，加热消化至试液澄清透明，冷却后定容至100mL。

吸取样液10mL按上述方法操作。

2．用盐酸溶解碳酸钙时，要用表面皿盖好烧杯后再加盐酸，以防喷溅。

3．氰化钾是剧毒物质，必须在碱性条件下使用，以防止在酸性条件下生成HCN逸出。

测定完的废液要加氢氧化钠和硫酸亚铁处理，使生成亚铁氰化钠后才能倒掉。

4．加入指示剂后应立即滴定，放置过久会导致终点不明显。

实验三钙的测定

（高锰酸钾滴定法）

一、实验目的

1.了解钙测定的意义和原理。

2.掌握高锰酸钾滴定法测定钙的方法。

二、实验原理

样品灰化后，用盐酸溶解，加草酸铵溶液生成草酸钙沉淀。

沉淀经洗涤后，溶解于稀硫酸中，游离出的草酸用高锰酸钾标准溶液滴定，C2O42-被氧化为CO2，Mn7+还原为Mn2+。

生成的草酸和硫酸钙摩尔数相等，从而计算出钙的含量，当溶液中存在C2O42-时，加人高锰酸钾，发生氧化还原反应，红色立即消失，C2O42-完全被氧化后，高锰酸钾的颜色不再消失，呈现微红色，即为滴定终点，可以精确测定钙含量。

三、试剂

1．1：

4盐酸溶液2．1：

4醋酸溶液

3．1：

4NH40H溶液4．0.1％甲基红指示剂

5．4％（NH4）2C2Ｏ4溶液6．2mol/LH2SO4溶液

7．2％NH40H溶液8．0.02mol/L高锰酸钾标准溶液

四、实验步骤

1.样品处理：

含钙量低的样品用干法灰化，含钙高的样品用湿法消化。

A.干法灰化：

精确称量3～5g固体样品或5～log液体样品，干法灰化后加人1：

4盐酸5mL置水浴锅上蒸干，再加人1：

4盐酸5mL溶解并移人25mL容量瓶中，用热去离子水反复洗涤灰化容器，洗液并人容量瓶中，冷却后用去离子水定容。

B.湿法消化：

称取样品2～5g于凯氏烧瓶中，加10mL浓硫酸，置电炉上低温加热至黑色黏稠状，继续升温，滴加高氯酸2mL，若溶液不透明，再加1一2mL高氯酸，至溶液澄清透明后再加热20min，冷却后移入50mL容量瓶定容。

2.测定

准确吸取样液5mL（含钙1～10mg）移入15mL离心管中，加入甲基红1滴，4%草酸铵2mL，1：

4醋酸0.5mL，摇匀，用1：

4氢氧化铵调至微蓝色，再用醋酸调至微红色。

静置2h，使沉淀完全析出，离心15min去上清液，并用滤纸吸干管内溶液，向离心管加少量2%NH40H，用手指弹动离心管，使沉淀松动，再加人10mL2%NH40H，离心20min去上清液，向沉淀中加人2mL2mol/L的硫酸，摇匀，于70～80℃水浴中加热，将沉淀全部溶解，用0.02mol/L高锰酸钾滴定至微黄色30s不褪色为终点，记录高锰酸钾标准溶液消耗量。

五、结果计算

式中：

C—高锰酸钾溶液浓度，mol/L；

V—高锰酸钾溶液耗用体积，mL；

Vl—用于测定的样液体积，mL；

V2—样液定容总体积，mL；

m—样品质量，g；

40.08—钙的摩尔质量，g/mol。

六、说明

1．草酸铵应在溶液酸性时加入，然后再加入氢氧化铵，若先加氢氧化铵再加草酸铵，样液中的钙会与样品中的磷酸结合成磷酸钙沉淀，使结果不准确。

2．滴定过程要不断摇动，并保持在70～80℃温度下进行。

实验四铁的测定

（邻二氮菲比色法）

一、实验目的

1．了解邻二氮菲比色法测定铁的原理。

2．掌握邻二氮菲比色法测定铁的方法。

二、实验原理

在pH值2～9的溶液中，邻二氮菲（又称邻菲罗琳，菲绕琳）能与二价铁离子生成稳定的橙红色络合物，在波长λ=510nm处有最大吸收，其吸光度与铁含量成正比，可用比色法测定。

在显色前，可用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+后再作反应。

三、仪器与试剂

1.仪器：

分光光度计

2.试剂

①10%盐酸羟胺溶液，用前配制②浓硫酸

③1mol/L盐酸溶液④10%乙酸钠溶液

⑤2%高锰酸钾溶液

⑥0.12%邻二氮菲水溶液（新鲜配制）：

称取0.12g邻二氮菲于烧杯中，加60mL水加热至80℃溶解，冷却后移入100mL容量瓶定容。

⑦铁标准贮备液：

准确称取0.4979g硫酸亚铁溶于100mL水中，加入5mL浓硫酸微热，溶解后随即逐滴加入2%高锰酸钾溶液，至最后一滴红色不褪色为止，用水定容至1000mL，此溶液每毫升含Fe3+100μg。

⑧铁标准使用液：

使用前将标准工作液准确稀释10倍，此溶液每毫升含Fe3+10μg。

四、实验步骤

1．样品处理

称取均匀样品10.0g，干法灰化后，加2mL（1+1）盐酸于水浴上蒸干，再加入5mL蒸馏水，加热煮沸，冷却，移入100mL容量瓶用水定容，摇匀。

2．标准曲线绘制

准确吸取上述铁标准使用液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL，分别置于50mL容量瓶中，加入1mol/L盐酸1mL，10%盐酸羟胺1mL，0.12%邻二氮菲1mL，10%乙酸钠5mL，然后用水稀释至刻度摇匀。

10min后，用lcm比色皿，以不加铁标的试剂空白作参比，在510nm波长处测定各溶液的吸光度，以含铁量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

3．样品测定

准确吸取样液5～10mL（视铁含量的高低）于50mL容量瓶中，按标准曲线的制作步骤，加人各种试剂，测定吸光度，在标准曲线上查出相对应的铁含量（μg）。

五、结果计算

式中C—从标准曲线上查得测定用样液相应的铁含量，μg;

V1—测定用样液体积，mL;

V2—样液总体积，mL；

m—样品质量，g。

六、说明及注意事项

1．Cu2+、Ni2+、Co2+、Zn2+、Hg2+、Cd2+、Mn2+等离子也能与邻二氮菲生成稳定的络合物，少量时不影响测定，量大时可用EDTA掩蔽或预先分离。

2．加入试剂的顺序不能任意改变，否则会因为Fe3+水解等原因造成较大误差。

3．微量元素分析的样品制备过程中要注意防止各种污染，所用各种设备必须是不锈钢制品。

所用容器必须使用玻璃或聚乙烯制品。

4．加入10%乙酸钠的目的是调节溶液pH值至3～5，使二价铁更能与邻二氮菲定量地络合，发色较为完全。

实验四铁的测定

（硫氰酸钾比色法）

一、目的要求

1．了解硫氰酸钾比色法测定铁的原理。

2．掌握硫氰酸钾比色法测定铁的方法。

二、实验原理

在酸性溶液中，铁离子与硫氰酸钾作用，生成砖红色的硫氰酸铁络合物，其颜色的深浅与铁离子浓度成正比，故可以比色测定。

三、仪器与试剂

1．仪器

分光光度计

2．试剂

①浓硫酸（分析纯）②20%硫氰酸钾溶液。

③2%过硫酸钾溶液④2%高锰酸钾溶液。

⑤铁标准溶液。

准确称取0.4979g硫酸亚铁溶于100mL水中，加入5mL浓硫酸微热，溶解后随即逐滴加入2%高锰酸钾溶液，至最后一滴红色不褪色为止，用水定容至1000mL，此溶液每毫升含Fe3+100μg。

使用前将标准工作液准确稀释10倍，此溶液每毫升含Fe3+10μg。

四、实验步骤

1．样品处理：

称取均匀样品10.0g，干法灰化后，加2mL（1+1）盐酸于水浴上蒸干，再加入5mL蒸馏水，加热煮沸，冷却，移入100mL容量瓶用水定容，摇匀。

2．标准曲线绘制：

准确吸取铁标准溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL,分别置于25mL容量瓶中，各加人5mL水，0.5mL浓硫酸，0.2mL2%过硫酸钾，2mL20%硫氰酸钾，混匀后稀释至刻度，用1cm比色皿在485mn处以试剂空白作为对照，测定吸光度。

以铁含量（μg）为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3．样品测定：

准确吸取样品溶液5～10mL置于25mL容量瓶或比色管中，以下操作同标准曲线的绘制。

根据测得的吸光度，从标准曲线上查得相对应的铁含量。

五、结果计算

式中：

C—从标准曲线上查得相当于铁的标准量，；

V—测定用样液体