第六章 食品种常见病原菌检验技术.docx
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第六章食品种常见病原菌检验技术
课题
第六章食品中常见病源微生物检验技术
§6-1金黄色葡萄球菌检验技术
日期
星期
科长签字
教学
目的
1知识:
掌握金黄色葡萄球菌的生理学特征(形态特性、生化特性等)并能利用这些生物学特性。
2技能:
在食品检验中进行金黄色葡萄球菌的鉴别检测程序、检验方法,并能正确、熟练地尽享操作。
熟练掌握各种检验仪器的使用。
3素质:
通过学习,提高学生的学习兴趣、养成良好的学习自觉性。
重点与
难点
重点:
金黄色葡萄球菌的生理学特征
难点:
金黄色葡萄球菌的鉴别检测程序、检验方法
教学内容及过程
方法与环节
§6-1金黄色葡萄球菌检验技术
一、生物学特性
典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8μm左右,显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长pH7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。
甲基红反应阳性,VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感。
二.流行病学
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而,食品受其污染的机会很多。
近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点:
季节分布,多见于春夏季;中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
上呼吸道感染患者鼻
行动导向法
1、学生课下查资料、做课件
2、学生代表讲课件
3、教师和学生提问、代表回答
4、教师总结
5、后记
腔带菌率83%,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
一般说,金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品:
食品加工人员、炊事员或销售人员带菌,造成食品污染;食品在加工前本身带菌,或在加工过程中受到了污染,产生了肠毒素,引起食物中毒;熟食制品包装不严,运输过程受到污染;奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时,对肉体其他部位的污染。
肠毒素形成条件:
存放温度,在37°C内,温度越高,产毒时间越短;
存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素;
食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同时含一定量淀粉的食物,肠毒素易生成。
三.致病性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶:
a.溶血毒素:
外毒素,分α、β、γ、δ四种,能损伤血小板,破坏溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死;b.杀白细胞素:
可破坏人的白细胞和巨噬细胞;c.血浆凝固酶:
当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞噬细胞的吞噬作用。
葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关;d.脱氧核糖核酸酶:
金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌;e.肠毒素:
金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素,分为A、B、C、D、E及F五种血清型。
肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。
它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。
此外,金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
四.检验和控制
1.金黄色葡萄球菌的检验
样品处理:
无菌取25g或25mL食品样品,放入225mL灭菌生理盐水中均质,制成10-1稀释液。
增菌培养:
将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中,37°C培养24小时。
分离培养:
将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板,置37°C培养24-48小时。
金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落,大而凸起,表面光滑,周围有溶血圈。
在Baird-Parker平板上菌落为圆形,直径2-3mm,颜色灰或黑色,周围有一浑浊带。
染色观察:
从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜,直径0.5-1μm。
血浆凝固酶试验:
吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性。
同时做阴阳性对照。
耐热核酸酶试验:
将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板,36±1°C培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。
本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
2.金黄色葡萄球菌肠毒素检测
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法,在此就不一一赘述。
3.金黄色葡萄球菌的控制主要包括:
1)防止金黄色葡萄球菌污染食品
防止带菌人群对各种食物的污染:
定期对生产加工人员进行健康检查,患局部化脓性感染(如疥疮、手指化脓等)、上呼吸道感染(如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等)的人员要暂时停止其工作或调换岗位。
防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染:
如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房,不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶;奶挤出后,要迅速冷至-10℃以下,以防毒素生成、细菌繁殖。
奶制品要以消毒牛奶为原料,注意低温保存。
对肉制品加工厂,患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位,经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
2)防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成
应在低温和通风良好的条件下贮藏食物,以防肠毒素形成;在气温高的春夏季,食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时,并且食用前要彻底加热。
小结:
后记:
课题
第六章食品中常见病源微生物检验技术
日期
星期
科长签字
教学
目的
1知识:
掌握肉毒梭菌和黄曲霉的生理学特征(形态特性、生化特性等)并能利用这些生物学特性。
2技能:
在食品检验中进行肉毒梭菌和黄曲霉的鉴别检测程序、检验方法,并能正确、熟练地尽享操作。
熟练掌握各种检验仪器的使用。
3素质:
通过学习,提高学生的学习兴趣、养成良好的学习自觉性。
重点与
难点
重点:
肉毒梭菌的生理学特征
难点:
肉毒梭菌的鉴别检测程序、检验方法
教学内容及过程
方法与环节
§6-2肉毒梭菌检验技术
一、生物学状性
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属,具有该菌的基本特性,即厌氧性的杆状菌,形成芽胞,芽胞比繁殖体宽,呈梭状,新鲜培养基的革兰氏染色为阳性,产生剧烈细菌外毒素,即肉毒毒素。
肉毒梭菌为多形态细菌,约为4×1μm的大杆菌,两侧平行,两端钝园,直杆状或稍弯曲,芽胞为卵圆形,位于次极端,或偶有位于中央,常见很多游离芽胞。
有时形成长丝状或链状,有时能见到舟形、带把柄的柠檬形、蛇样线装、染色较深的球茎状,这些属于退化型。
当菌体开始形成芽胞时,常常伴随着自溶现象,可见到阴影形。
肉毒梭菌具有4-8根周毛性鞭毛,运动迟缓;没有荚膜。
在固体培养基表面上,形成不正圆形,大约3毫米左右的菌落。
菌落半透明,表面呈颗粒状,边缘不整齐,界线不明显,向外扩散,呈绒毛网状,常常扩散成菌苔。
在血平板上,出现与菌落几乎等大或者较大的溶血环。
在乳糖卵黄牛奶平板上,菌落下培养基为乳浊,菌落表面及周围形成彩虹薄层,不分解乳糖;分解蛋白的菌株,菌落周围出现透明环。
肉毒梭菌发育最适温度为25-35℃,培养基的最适的酸硷度为pH6.0-8.2。
行动导向法
1、学生课下查资料、做课件
2、学生代表讲课件
3、教师和学生提问、代表回答
4、教师总结
5、后记
肉毒梭菌的生化性状很不规律,即使同性,也常见到株间的差异。
(见表1)
表1各型肉毒梭菌的生化反应
型别
反应
A
B
C
D
E
F
葡萄糖发酵
麦芽糖发酵
乳糖发酵
蔗糖发酵
靛基质产生
胆胶液化
牛奶消化
+
+
-
(±)
-
(+)
+
+
+
-
(±)
-
(+)
(±)
+
(±)
-
(±)
(-)
(±)
-
+
(±)
(-)
(±)
(-)
(±)
-
+
(+)
-
(±)
-
(±)
-
+
+
-
(±)
-
(+)
(+)
注:
+阳性反应;-阴性反应;(±)视菌株而异;(+)多为阳性反应;(-)多为阴性反应。
2、肉毒梭菌的致病性
肉毒梭菌的致病性在于所产生的神经毒素即肉毒毒素,这些毒素能引起人和动物的肉毒中毒,根据肉毒毒素的抗原性,肉毒梭菌至今已有A、B、C(1、2)、D、E、F、G等七个型。
引起人群中毒的,主要有A、B、E三型。
C、D二型毒素主要是畜、禽肉毒中毒的病原。
F、G型肉毒梭菌极少分离,未见G型菌引起人群的中毒报道。
3、流行病学
肉毒梭菌广泛存在于自然界,引起中毒的食品有腊肠、火腿、鱼及鱼制品和罐头食品等。
在美国以罐头发生中毒较多,日本以鱼制品较多,在我国主要以发酵食品有关,如臭豆腐、豆瓣酱、面酱、豆豉等。
其它也引起中毒的食品还有:
熏制未去内脏的鱼、填馅茄子、油浸大蒜、、烤土豆、炒洋葱、蜂蜜制品等。
肉毒梭菌是致死性最高的病原体之一。
感染剂量极低,每个人都易感。
摄食18-36小时后发病为典型病症,但不典型的可在4小时至8天不等。
症状为虚弱、眩晕、伴随视觉成双、渐进性说话障碍、呼吸和吞咽困难。
也许会出现腹胀和便秘。
毒素最终引起麻痹,呈渐进对称性、自上到下
肉毒梭菌在自然界的分布上具有某种区域性差异,显示出生态上的差别倾向。
A、B型的分布最广其芽胞广泛分布于自然界,各大洲的许多国家均有检出,;C、D型的芽胞一般多存在于动物的尸体中,或在腐尸附近的土壤中;E型菌及其芽胞存在于海洋的沉积物、水产品的肠道内,E型菌及其芽胞适应于深水的低温,使E型菌在海洋地区的广泛分布。
但是,越来越多的调查结果表明,除G型菌之外,其它各型菌的分布都是相当广泛的。
二、肉毒毒素
1、生物学性状
肉毒梭菌的致病性在于其产生的神经麻痹毒素,即肉毒毒素,而细菌本身则是一种腐生菌。
各个型的肉毒梭菌分别产生相应的毒素,所以,肉毒毒素也分为A、B、C、D、E、F、G等七个型。
C型包括C1、C2二个亚型。
A型毒素经60℃2分钟加热,差不多能被完全破坏,而B、E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏;C、D二型毒素对热的抵抗更大些;C型毒素要经过90℃2分钟加热才能完全破坏,不论如何,只要煮沸1分钟或75℃加热5-10分钟,毒素都能被完全破坏
肉毒毒素对酸性反应比较稳定,对碱性反应比较敏感。
某些型的肉毒毒素在适宜条件下,毒性能被胰酶激活和加强。
2、致病性
肉毒毒素的毒性极强,是最强的神经麻痹毒素之一,据称,精制毒素1微克的毒力为200,000小白鼠(20克)致死量,也就是说,1克毒素能杀死400万吨小白鼠,一个人的致死量大概1微克左右。
3、流行病学
肉毒中毒是由于误食含有肉毒毒素的食品而引起的纯粹的细菌毒素食物中毒。
人的肉毒中毒发生并不多,但是发病急、病程发展快、病死率高。
肉毒中毒是毒素中毒,潜伏期较短,一般为6至36小时,最长60小时。
主要症状有:
视力减弱、全身无力、伸舌和张口困难、抬头费力、瞳孔散大、呼吸麻痹等。
据统计,1899年至1990年,在美国共有2305人中毒,经检测,303人感染A型毒素,92人感染B型毒,3人感染E型毒素,2人感染F型毒素,有2起中毒事件是由A、B二种毒素引起。
F、G二种毒素,主要引起动物肉毒中毒,尚未深入得到研究。
重症患者,如果不及时治疗和抗毒素特异治疗,多在2至4天死亡。
肉毒梭菌生长和产毒的最适温度是25至30℃,而在人的体温条件下细菌表现为丝状,几乎不能产毒、芽胞也不会发芽。
肉毒中毒一年四季均可发生,发病主要与饮食习惯有着密切关系。
欧美国家主要的中毒是由于肉类食品、罐头食品引起;日本等沿海国家主要的中毒是由于进食水产品引起;我国内地的中毒主要是由于进食发酵食品(如:
臭豆腐、豆瓣酱、豆豉等)引起的。
三、肉毒毒素检出及肉毒梭菌检验
A、肉毒毒素的检出
肉毒中毒的诊断,重要的是毒素的检出及定型;罐头食品的细菌学检验,有时需要证实肉毒梭菌的存在,不过,最终还是要根据产毒试验来鉴定细菌及其型别。
B、肉毒毒素检测的主要程序
1.初步的定性试验----小白鼠腹腔注射法
检验样品经适当处理后取上清夜,用明胶磷酸缓冲液稀释(1:
5、1:
10、1:
100三个稀释度)后各取0.5毫升腹腔注射小白鼠;另取上清夜100℃10分钟加热后注射小白鼠;另取上清夜经胰酶处理后注射小白鼠;每个注射样注射二只小白鼠;注射后,定时观察小白鼠,连续观测48小时;排除24小时后死亡的白鼠和无症状死亡的小白鼠;48小时后,如果除了经热处理后再注射样品的小白鼠未死亡,其余小白鼠均死亡的情况,重复试验,增加稀释倍数,计算最底致死量。
并进行抗毒素中和试验。
2.中和试验
用无菌生理盐水溶解冻干的抗毒素,,取A、B、E、F四种抗毒素注射于小白鼠体内;同时取未注射抗毒素的小白鼠做对照;注射抗毒素30分钟或1小时后,注射不同稀释度(覆盖10、100、1000倍最小致死量)的含毒素样品,观察48小时,如发现毒素未被中和,再取C、D型抗毒素和A-F多价抗毒素重复上述试验;如小白鼠死亡,应将含毒素样品稀释后再重复以上试验。
3.试验的几个注意事项
3.1典型的肉毒中毒,小白鼠会在4至6小时内死亡,而且98-99%的小白鼠会在12小时内死亡,因此,试验前24小时内的观察是非常重要的。
3.224小时后的死亡是可疑的,除非有典型的症状出现。
3.3如果小白鼠注射经1:
2或1:
5倍数稀释的样品后死亡,但注射更高稀释度的样品后未死亡,这也是非常可疑的现象,一般为非特异性死亡。
3.4小白鼠要用不会抹去的颜料加以标记。
3.5小白鼠的饲料与水必须及时添加、充分供应。
4.结果分析
4.1食物中发现毒素,表明未经充分的加热处理,可能引起肉毒中毒。
4.2检出肉毒梭菌,但未检出肉毒毒素,不能证明此食物会引起肉毒中毒。
4.3肉毒中毒的诊断必须以检出食物中的肉毒毒素为准。
4.4中和试验可以为毒素定型。
C、肉毒梭菌的检验与分离鉴定
肉毒梭菌检验方法的重点乃是产毒及毒素的检出试验,如要证实是否有肉毒梭菌存在,只要分离、培养、毒素鉴定即可。
1.前增菌
样品分别接种于疱肉培养基、TPGYT培养基,并分别与35、26℃培养7天。
2.分离
培养7天后,染色、镜检,观察菌的形态是否为典型的肉毒梭菌。
取1-2毫升培养物加等量的酒精混合(或80℃加热10分钟,)后在室问温下培养1小时,非蛋白分解型的肉毒梭菌,因其芽胞不耐热,不要采取热处理的方法。
用接种环涂划酒精处理液或热处理的培养物于小牛肝卵黄琼脂或厌氧卵黄琼脂平板上,厌氧培养48小时,35℃。
典型菌落是隆起或扁平,光滑或粗糙,在卵黄培养基上用斜光检验时菌落表面通常出现虹晕色(iridescence),此光区称为“珍珠层”,C、D、E型菌通常有2-4毫米黄色沉淀区围绕,A、B型菌通常显示较小的沉淀区。
挑取10个典型菌落,分别接种于疱肉培养基、TPGYT培养基,并分别与35、26℃培养7天,再取培养物按照1.2.1、1.2.2的方法进行肉毒毒素的检测即可。
生化反应试验,可以为鉴定做参考,以上肉毒梭菌的培养、分离、鉴定试验力求迅速,不要长时间接触空气,最好在厌氧条件下操作。
四、控制:
最根本的预防方法是加强食品卫生管理,改进食品的加工、调制及储存方法,改善饮食习惯,对某些水产品的加工可采取事先取内脏,并通过保持盐水浓度为10%的腌制方法,并使水活度低于0.85或pH为4.6以下,以及对于在常温储存的真空包装食品采取高压杀菌等措施,以确保抑制肉毒梭菌产生毒素,杜绝肉毒中毒病例的发生。
§6-3黄曲霉菌及其毒素的检验
霉菌污染食品后,在适宜条件下会产生毒素。
人和动物食用被污染了霉菌毒素的食品后,可产生各种危害,如急性或慢性中毒、肿瘤等。
霉菌产毒的特点:
①霉菌产毒仅限于少数的产毒霉菌。
②产毒菌株的产毒能力具有易变性。
③产毒霉菌产毒不具有一定的严格性。
④产毒霉菌产毒需要一定条件。
如花生、玉米易污染黄曲霉及其毒素,小麦、玉米易污染镰刀菌及其毒素,大米易污染青霉及毒素。
常见的霉菌有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、镰刀菌毒素和青霉菌毒素等。
黄曲霉毒素存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米上。
肝癌与黄曲霉毒素含量高有直接关系。
为了防止产生黄曲霉毒素,最好将桃仁、果仁、谷物贮藏在密封和干燥的地方,不要吃发霉的食品,尤其是发霉的干果、桃仁和粮食。
主要由黄曲霉和寄生曲霉产生,其基本结构中都含有二呋喃环和双香豆素,黄曲霉毒素主要损害肝脏,表现为脂肪变性、出血、坏死及胆管上皮、纤维组织增生。
同时肾脏也可受损害。
临床表现
早期有胃部不适、腹胀、厌食、呕吐、一过性发热及黄疸等。
2~3周后出现腹水、下肢水肿、脾脏增大变硬、胃肠道出血、昏迷甚至死亡。
诊断
1.有进食可疑黄曲霉菌污染食物史。
2.临床特点①潜伏期较长。
②中毒表现:
胃部不适、腹胀、厌食、呕吐、肠鸣音亢进、一过性发热及黄疸等。
急救处理
1.护肝。
2.对症支持治疗
一、黄曲霉菌及其毒素的种类
(一)产毒菌及其特性
1.黄曲霉菌
本菌属真菌门、半知菌亚门丛梗孢科曲霉属。
本菌为需氧菌,最适温度30~33℃,相对湿度80-90%为最佳条件。
花生、玉米、大米和小麦是其较好的生长基质。
2.寄生曲霉
寄生曲霉也是产生AFT的主要菌株,其特性与黄曲霉类似。
我国分布较少。
3.其他
青霉、毛霉和根霉等真菌也能产生AFT,但产毒量甚微,其特性与黄曲霉类似。
(二)黄曲霉毒素的种类及对食品的污染
黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。
它们在紫外线照射下能产生荧光,根据荧光颜色不同,将其分为B族和G族两大类及其衍生物。
AFT目前已发现20余种。
AFT主要污染粮油食品、动植物食品等;如花生、玉米,大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。
其中以花生和玉米污染最严重。
家庭自制发酵食品也能检出黄曲霉毒素,尤其是高温高湿地区的粮油及制品种捡出率更高。
二、黄曲霉毒素的特性
1、AFT的毒性极强
远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性,其中以B1毒性最大。
当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。
当微量持续摄人,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。
AFT的致癌力也居首位,是目前已知最强致癌物之一。
2、AFT具耐热性
一般烹调加工温度不能将其破坏,裂解温度为280℃。
在水中溶解度较低,溶于油及一些有机溶剂,如氯仿和甲醇中,但不溶于乙醚、石油醚及乙烷。
3、食品中所污染的主要是黄曲霉毒素Bl,其毒性目前一般认为有三种临床特征;急性中毒、慢性中毒和致癌性:
(1)急性中毒:
它是一种剧毒物质,毒性比KCN大100倍,仅次肉毒霉素,是目前已知霉菌中毒性最强的。
它的毒害作用,无论对任何动物,主要变化是肝脏,呈急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。
脾脏和胰脏也有轻度的病变。
(2)慢性中毒:
长期摄入小剂量的黄曲霉毒素则造成慢性中毒。
其主要变化特征为肝脏出现慢性损伤,如肝实质细胞变性、肝硬化等。
出现动物生长发育迟缓,体重减轻,母畜不孕或产仔少等系列症状
(3)致癌性:
AFT是目前所知致癌性最强的化学物质
其致癌特点是:
A致癌范围广,能诱发鱼类、禽类,各种实验动物、家畜及灵长类等多种动物的实验肿瘤;
B致癌强度大,其致癌能力比六六六大1万倍;
C可诱发多种癌,AFT主要诱发肝癌,还可话互胃癌、肾癌、泪腺癌、直肠癌、乳腺癌,卵巢及小肠等部位的肿瘤,还可出现畸胎。
:
三、黄曲霉毒素在食品中的允许含量标准
黄曲霉毒素具有很强的毒性,特别是它的强致癌性,世界各国对于其污染食品的情况都很重视,并对其在食品中芝全量咋了严格限制。
124表
四、检验
(一)黄曲霉菌菌落及形态观察
黄曲霉菌菌落生长较快,10~14天直径3~4或6—7cm。
菌落正面色泽也随其生长由白色变为黄色及黄绿色,呈半绒毛状。
孢子成熟后颜色变为褐色。
表面平坦或有放射状沟纹,反面无色或带褐色。
在低倍显微镜下观察可见分生孢子头呈疏松放射状,继而为疏松柱状。
制片镜检观察,可见分生孢子梗很粗糙。
顶囊呈烧瓶形或近球形。
分生孢子在小梗上呈链状着生,分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。
(二)黄曲霉毒素检测方法
可归纳为化学方法、生物学方法和免疫学方法三大类。
1、生物学方法
1)抑菌试验
AFT有抑制某些微生物生长的作用,故用其抑菌作用来测定AFT的存在和含量。
已经发现巨大芽胞杆菌和短芽胞杆菌对AFT最敏感。
通过平皿中抑菌圈大小来衡量AFT含量。
2)荧光测定法
根据AFT在紫外光照射下可发出荧光的原理,将待检菌株接种于培养基中,28—30~C培养48~72小时,产生的毒素便浸入培养基中,在紫外灯光下照射培养基会呈现出特异的荧光。
此法操作简便。
对AFT最低检出量为5pg/ml。
·
3)大白鼠试验法
AFT对大白鼠毒性最早出现损害的是肝脏,其受损范围广,而幼鼠最敏感,雄性幼鼠比雌性幼鼠敏感性更高,用100-150g大白鼠作急性中毒试验,一般3—4天死亡。
4)鸡胚试验
5)鸭雏试验
鸭雏对AFT非常敏感,致死性强,一般用一次剂量后72小时内死亡。
6)斑点试验
本法用于检测真菌毒素致突变试验的一种有意义的方法。
主要利用沙门氏菌/微粒体突变性来检测某些样品种AFT的存在与含量。
A先将鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型变种的菌悬液,与一定量肝组织匀浆混合作倾注平板。
B待凝固后,再将一定量被检物(含AFT)加在平板中央待AFT往外围琼脂中扩散时,围绕中心点将出现密布的回复突变的菌落。
本法作为一种生物学检验法广泛应用于开发安全、有用的化学物质和检测食品或农产品中AFT。
2.免疫学方法
AFT是分子量为312~346的二氢呋喃香豆素的衍生物,无免疫原性,不能引起抗体的产生,故必须与大分子化学基团或蛋白质偶联,成为完全抗原,方能引起免疫动物的抗体形成,然后利用血清学方法检测AFT
由于AFT的量一般都较低,因此,检测方法主要是敏感性较高的放射免疫测定法(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。
近几年来,国外已成功制备了测定B1的酶联免疫测定盒及检测乳中Ml含量的RIA检测盒。
这两种检测盒都十分方便,而且快速准确。
小结:
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- 第六章 食品种常见病原菌检验技术 第六 食品 常见 病原菌 检验 技术