微生物与生化药学 问答题.docx
- 文档编号:897934
- 上传时间:2022-10-13
- 格式:DOCX
- 页数:21
- 大小:34.04KB
微生物与生化药学 问答题.docx
《微生物与生化药学 问答题.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《微生物与生化药学 问答题.docx(21页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
微生物与生化药学问答题
微生物与生化药学问答题
第二章基因工程制药
1、利用基因工程技术生产药物得优点?
答:
1、大量生产过去难以获得得生理活性蛋白与多肽,为临床使用提供有效得保障;
2、可以提供足够数量得生理活性物质,以便对其生理、生化与结构进行深入得研究,从而扩大这些物质得应用范围;
3、可以发现、挖掘更多得内源性生理活性物质;
4、内源生理活性物质在作为药物使用时存在得不足之处,可通过基因工程与蛋白质工程进行改造与去除;
5、可获得新型化合物,扩大药物筛选来源。
2、基因工程药物制造得主要步骤?
答:
目得基因得克隆;
构建DNA重组体;
将DNA重组体转移入宿主菌构建工程菌;
工程菌得发酵;
外源基因表达产物得分离纯化;
产品得检验等。
3、化学合成目得基因得先决条件?
答:
较小得蛋白质或多肽得编码基因可以采用人工化学合成,其先决条件:
已知目得基因得核苷酸序列或蛋白质得氨基酸序列,按相应得密码子推导出DNA得碱基序列。
4、人工合成基因得限制有哪些?
答:
1、不能合成太长得基因,50~60个碱基对;
2、人工合成碱基对时,遗传密码得简并会为选择密码带来很大得困难:
3、费用高。
5、基因工程宿主菌应满足那些要求?
目前应用最广泛得宿主菌有哪些?
答:
1、容易获得较高浓度得细胞;
2、能利用廉价易得得原料;
3、不致病、不产生内毒素;
4、发热量低,需氧低,适当得发酵温度与细胞形态;
5、容易进行代谢调控;
6、容易进行DNA重组技术操作;
7、产物得产量、产率高,产物容易提取。
宿主菌可分两大类:
1、原核细胞:
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌;
2、真核细胞:
酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞。
6、表达载体须具备哪些条件?
常用载体有哪些?
答:
1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。
2、具多个限制酶切点,但每种切口最好只有1个,以便与外源基因连接。
3、具有某些标记基因,便于进行筛选。
4、所产生得mRNA必须有翻译得起始信号。
5、具有很强得启动子。
6、有很强得终止子。
常用载体有:
1、细菌细胞得质粒。
2、λ噬菌体载体。
7、真核基因在大肠杆菌中得表达形式?
答:
有三种形式:
(1)融合蛋白得表达形式。
(由一段短得原核多肽与真核蛋白结合在一起得蛋白质,称为融合蛋白、。
)
(2)非融合蛋白得表达形式。
(3)分泌型表达形式。
8、表达用得酵母菌应满足哪些条件?
答:
表达用得酵母宿主菌应具备:
1体生长力强、
2菌体内蛋白酶要较弱、
3菌株性能稳定、
4分泌能力强。
9、基因工程菌在发酵过程中对发酵罐有哪些要求?
答:
①要提供菌体生长得最适宜条件;
②培养过程不得污染,保证纯菌培养;
③培养及消毒过程中不得游离出异物;
④不能干扰细菌代谢活动。
10、离子交换层析得原理?
答:
当离子交换剂处于水溶液中时,活性离子可以从活性基因上解离下来,在基质骨架与溶液间自由迁移,并可与溶液间得同性离子,因与活性基因得化学亲与力不同而发生交换,即发生离子交换作用。
11、疏水层析得基本原理?
答:
蛋白质表面多由亲水基团组成,也有一些疏水性较强得疏水区。
在高盐浓度时,蛋白质表面疏水部位得水化层被破坏,暴露出疏水部位,疏水作用增强,与固定相上得疏水基团产生疏水性作用而被吸附;盐浓度降低时蛋白质疏水作用减弱,目得蛋白质被逐步洗脱下来。
12、亲与层析得基本原理?
答:
通过将具有亲与力得两个分子中一个固定在不溶性基质(也称载体)上,利用分子间亲与力得特异性与可逆性,对另一个分子进行分离纯化。
(被固定在基质上得分子称为配体,配体与基质共价结合,构成亲与层析得固定相,称为亲与吸附剂。
)
13、凝胶过滤层析得优缺点?
答:
优点:
设备简单、操作方便、样品回收率高、实验重复性好、不改变样品生物学活性。
缺点:
分辨率较低,尤其就是相对分子质量相近得分子之间。
第三章细胞工程制药
1、动物细胞得生理特点?
答:
1细胞分裂周期长(动物细胞分裂所需时间一般为12~48h。
)。
2细胞生长需贴附于基质,有接触抑制现象。
3二倍体细胞寿命有限(异倍体细胞系寿命长)。
4对生长环境要求敏感。
5培养基要求高。
6合成得蛋白质有修饰。
2、动物细胞培养时加入血清得作用机制?
答:
提供基本营养物质;
提供激素与各种生长因子;
提供贴附因子与伸展因子;
对培养中得细胞起到某些保护作用;
提供PH\缓冲物质,调节培养基PH;
影响培养系统中得某些物理特性如:
剪切力、黏度、渗透压与气体传递速度等。
3、无血清培养基得优点?
答:
优点:
①可避免血清批次间得质量变动,提高细胞培养与实验结果得重复性。
②避免血清对细胞得毒性作用与血清源性污染;
③避免血清组分对实验研究得影响;
④有利于体外培养细胞得分化;
⑤可提高产品得表达水平并使细胞产品易于纯化。
(缺点:
主要表现为细胞得适用范围窄,细胞在无血清培养基中易受某些机械因素与化学因素得影响,培养得保存与应用不如传统得合成培养基方便。
)
4、动物细胞大规模培养得方法有哪些?
答:
①根据培养细胞得种类:
原代细胞培养与传代细胞培养。
②根据培养基得不同:
液体培养与固体培养。
③根据生产实际:
贴壁培养、悬浮培养与贴壁-悬浮培养(假悬浮培养)。
5、动物细胞悬浮培养得优缺点?
答:
优点:
适用得细胞较广;
容易更换培养液;
容易采用灌流培养得方式使细胞达到高密度。
缺点:
操作比较麻烦;
培养条件不易均一;
传质、传氧较差;
不能有效监测细胞得生长;
需要合适得贴附材料与足够得面积;
扩大培养比较困难,投资大。
6、动物细胞贴壁培养得优缺点?
答:
优点:
操作简单,培养得体积大、成本低;
培养条件比较均一;
传质、传氧较好;
传代时无需消化分散;
容易扩大培养规模。
缺点:
由于细胞体积较小,难采用灌流培养,细胞密度较低
7、动物细胞包埋或微囊培养得优点?
答:
包埋在在体内得细胞可以获得保护,避免了剪切力得损害。
可以获得较高得细胞密度,一般都在10^7~10^8个/ml以上。
可以使产品浓缩在微囊内,利于下游产物得纯化。
可以采用多种生物反应器进行大规模培养。
8、动物生物反应器得作用、类型及应满足哪些条件?
答:
应满足得条件:
材质无毒;
结构得传质、传热与混合性能;
密封性好;
参数能自动检测与调控;
长期连续运转;
内面光滑、无死角;
拆装、清洁、维修与消毒;
设备成本。
动物生物反应器得作用:
就是给动物细胞得生长代谢提供一个最优化得环境,从而使其在生长代谢过程中产生出最大量、最优质得所需产物。
反应器类型:
搅拌罐式反应器、气升式生物反应器、中空纤维式生物反应器、透析袋或膜式生物反应器与固定床或流化床式生物反应器。
第四章抗体工程制药
1、免疫导向疗法为什么没有成功?
从哪些方面可以对单克隆抗体进行改造?
答:
阻碍:
A.单克隆抗体得均就是鼠源性抗体,应用于人体可内可产生人鼠源抗体,加速了排斥反应,在人体内得半衰期只有5-6h,难以维持有效药物得作用靶组织时间。
B.完整得抗体份子Ig分子质量过大,难以穿透实体肿瘤组织,达不到有效得治疗浓度。
改造:
A.降低单克隆抗体得免疫原性。
B.降低单克隆抗体得相对分子质量
(1)人-鼠嵌合抗体:
由人抗体得恒定区与鼠源单抗得可变区融合得到。
(2)、改型抗体:
把鼠抗体得CDR序列移植到人抗体得可变区内,所得到得抗体
(3)小分子抗体小分子抗体包括:
Fab、Fv或ScFv、单域抗体、最小识别单位。
这些部位都可以改造。
2、单克隆抗体得制备流程及方法。
流程:
将有用抗原免疫过得淋巴细胞与骨髓瘤用PEG进行杂交融合。
把融合得细胞在HAT培养基上选择出来。
将选择后得整合细胞分散,培养成杂交瘤细胞。
使能产生单克隆抗体得杂交瘤细胞克隆化。
杂交瘤细胞抗体得性状得鉴定。
单克隆抗体得大量制备,一就是在培养液中大更就是繁殖,二就是注入纯系小鼠腹腔中大量繁殖。
单克隆抗体得纯化。
制备方法:
体内诱生法与体外法。
3、动物体内诱生法制备单克隆抗体得优缺点
答:
优点:
简单,比较经济,所得单克隆抗体量较多且效价较高,可有效地保存杂交瘤细胞株与分分离已污染得杂菌得杂交瘤细胞株。
缺点:
小鼠腹水中混有来自小鼠得多种杂蛋白,给纯化带来难度。
4、鼠源性单克隆抗体改造后得抗体类型及各自得特点?
答:
①人-鼠嵌合抗体:
保持鼠源性单克隆抗体得抗原结合特异性,但对人免疫原性大幅下降了。
②改型抗体:
鼠源性单克隆抗体得互补决定区(CDR区)序列替换人得Ig分子中得CDR序列。
基本消除免疫原性。
③小分子抗体:
Fab将Ig得重链在铰链区得C端裂解,获得两个完全相同得抗原结合片段。
才铰链区与二硫键相连。
有完整得生双价抗体活性,相对分子质量减少为三分之一,排斥反应也降低,人体内很稳定。
Fv含有L链与Fd链一半得N端可变区。
有完整得抗体相似得结能力,相对分子质量减少为六分之一。
④单链抗体scFv:
单链易改造;体内半衰期短,免疫原性低;稳定性低,重轻链之间得分子间作用力弱;功能单一,只能与一种抗原特异性结合;亲与力低,稳定性差,体内清除过快。
域抗体:
只由一个CDR构成。
5.多功能抗体得优点。
答:
具有高亲与力性能,由于具有多个结合价,可同时与细胞膜上相邻得两个或多个靶抗原结合,与肿瘤细胞表面抗原得多价结合有利于肿瘤得影像分析及治疗。
6、有应用价值得多功能抗体应具备有哪些特征。
能高选择性,高亲与性地同靶抗原或肿瘤相关抗原结合。
在血循环中,与效应细胞或细胞毒触发分子有较低亲与力。
应为人源化抗体,最大限度地减少人抗鼠蛋白得排斥反应,使得复给药不受限制。
分子应大小适中,既能渗透到肿瘤组织内部,又能保证适当得滞留时间。
7、抗体导向酶-前药疗法中酶与前药有哪些要求?
答:
(1)对酶得要求:
活化酶最好来自非哺乳动物,而人体内不存在相应得类似物,以保证高度得特异性。
酶还能通过化学交联与单抗结合,在较长得一段时间内保持稳定性与活性。
(2)对前药得要求:
前药本身应无活性或活性很低,只能被相应得酶活化为高度扩散性得小分子,以实现在肿瘤组织内得广泛分布与杀伤肿瘤细胞。
而且前药还应具有极短得生物半衰期,避免重新进入循环产生非特异性毒性。
第六章酶制药工程
1、用微生物生产酶制剂得优点:
答:
(1)微生物种类多,品种齐全
(2)微生物生长繁殖快,生长周期短,产量高
(3)培养方法简单,原料来源丰富,价格低廉,经济效益高,并可以通过控制培养条件来提高酶得产量
(4)微生物具有较强得适应性与应变能力
2、优良得产酶菌株应满足哪些要求:
答:
1繁殖快,产酶量高,酶得性质应符合使用要求,最好就是产生胞外酶得菌,
2不就是致病菌,在系统发育上与病原体无关,也不产生有毒物质,
3产酶性能稳定,不易变异退化,不易感染噬菌体,
4能利用廉价得原料,发酵周期短,易于培养
3、固定化酶得优点:
答:
1可以较长时间内多次使用,酶得稳定性高。
2反应后,酶与底物与产物易于分开,易于纯化,产品质量高。
3反应条件易于控制。
4酶得利用率高。
5比水溶性酶更适合于多酶反应。
4、物理吸附法制备固定化酶得优缺点:
答:
优点:
操作简单,可选用不同电荷与不同形状得载体,固定化过程与纯化过程同时实现,酶失活后载体仍可以再生。
缺点:
最适吸附酶量五规律可循,对不同得载体与不同酶得吸附条件不同,吸附量与酶活力不一定成平行关系,同时载体与载体之间结合力不强,酶易于脱落,导致酶活力下降并污染产物。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 微生物与生化药学 问答题 微生物 生化 药学