分子生物学复习.docx
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分子生物学复习
分子生物学重点
一、名词解释:
1、冈崎片段:
是在DNA半不连续复制中产生的长度为1000—2000个碱基的短的DNA片段,
能被连接形成一条完整的DNA链。
2、Ts循环:
退出的EF-Tu.GDP在EF-Ts因子的协助下,再生为EF-Tu.GTP,又可生成下
一个三元复合因子。
3、重组DNA技术:
又称基因工程,将不同的DNA片段(如某个基因或基因的一部分)按
照预先的设计定向连接起来,在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达,产生影响受
体细胞的新的遗传性状的技术。
4、穿梭质粒:
一个质粒含有两种宿主细胞的复制起点,可在两种细胞中复制和存在,谓
之穿梭质粒。
5、锌指结构:
锌指结构家族蛋白大体可分为锌指、锌钮和锌簇结构,大约由30个氨基酸
残基构成的蛋白质超二级结构,其中两个Cys(半胱氨酸)和两个His与锌离子结合形成四
面体锌指结构参与DNA的合成
6、螺旋—转折—螺旋结构:
这一类蛋白质分子中有至少两个a螺旋,中间由短侧连氨基酸残基形成“转折”,近羧基端的a螺旋中氨基酸残基的替换会影响该蛋白质在DNA双螺旋大沟中的结合。
7、SD序列:
存在于原核生物起始密码子AUG上游7—12个核苷酸处的一种4—7个核苷酸的保守片段,它与16SrRNA3’端反向互补,所以可将mRNA的AUG起始密码子置于核糖体的适当位置以便起始翻译作用。
8、RNA干扰(RNAi):
是利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA,从而阻断体内靶基因表达,使细胞出现靶基因确实表型的方法。
9、PCR:
聚合酶链反应,一种在体外(试管、切片…)扩增核酸的技术
10、基因芯片:
在一微小基片的表面集成大量DNA分子探针,能够在同一时间内平行分析大量的基因,进行大信息量的筛选与检测分析。
(指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面,然后对杂交信号的监测分析,即可获得样品的遗传信息。
)
11、复制子:
单独复制的一个DNA单元被称为一个复制子,它是一个可移动的单位,一个复制子在任何一个细胞周期只复制一次。
12、启动子上升突变:
TATGTT→TATATT,转录效率上升,为上升突变
启动子下降突变:
TATAAT→AATAAT,转录效率下降,称为下降突变
13、编码链(有意义链):
与mRNA序列相同的DNA链。
14、反义链(模板链):
指DNA双链中能作为模板通过碱基互补原则指导mRNA前体合成的DNA链。
15、C值反常现象:
也称为C值谬误。
指C值往往与种系的进化复杂性不一致的现象,即基因组大小与遗传复杂性之间没有必然的联系,某些较低等的生物C值却很大,如一些两栖动物的C值甚至比哺乳动物还大。
16、分子接头:
在DNA的末端加上一段限制性内切酶的识别序列,随后用限制酶切出所需要的粘性末端,使DNA的平端连接得以转变成为较易进行的粘性末端连接。
这种含限制酶识别序列的DNA片段称为接头。
17、限制性内切酶:
是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸内切酶。
18、剪接体:
在剪接过程形成的剪接复合物称为剪接体,剪接体的主要组成是蛋白质和核内小分子RNA(snRNP)。
19、感受态细胞:
能够高效吸收外界DNA的细胞,是一种生理状态,可以人工诱获。
20、RNA编辑:
使mRNA的序列发生不同于模板DNA的变化,导致了遗传信息的改变。
(指mRNA在转录后因插入、缺失或核苷酸的替换,改变了DNA模板来源的遗传信息,从而翻译出氨基酸序列不同的多种蛋白质。
)
21、原位杂交技术(ISH):
用标记的核酸探针(放射自显影或非放射性技术),在组织、细胞、间期核及染色体对核酸进行定位和相对定量分析。
22、5’帽子结构:
转录起始以A为主,G为次,所形成的转录物的5’端并非5’PPPAPNPNP----,而是5’-5’三磷酸联接起来的二核苷酸,加上去的是“G”,是由鸟苷酸转移酶完成。
以倒扣方式,一般是5’-3’连接。
特定位置甲基化后就成为“帽子”。
23、尾巴结构:
大多数真核mRNA具有polyA尾巴(polyA+),但亦有少部分没有(polyA-)。
长度40~200,由RNA末端腺苷酸转移酶合成,非模板合成。
在有AAUAAA的保守序列下游10~25核苷酸处切断,并加polyA。
24、重叠基因:
具有部分共用核苷酸序列的基因,即同一段DNA携带了两种或两种以上不同蛋白质的编码信息。
25、碱性-亮氨酸拉链:
蛋白羧基端35个氨基酸残基形成α螺旋,每隔6个有一个亮氨酸残基,形成亮氨酸位于一边的α螺旋(相当于拉链的一半),与另一相同的蛋白的α螺旋结合,由两个α螺旋的亮氨酸一侧形成疏水区(形成拉链);蛋白的氨基端20~30富含碱性氨基酸。
26.cDNA:
在体外以mRNA为模板,利用反转录酶和DNA聚合酶合成的一段双链DNA
27、DNA半保留复制:
DNA在复制过程中,每条链分别作为模板合成新链,产生互补的两条链。
这样形成的两个DNA分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。
因此,每个子代分子的一条链来自亲代DNA,另一条链则是新合成的,这种复制方式被称为DNA的半保留复制。
28、DNA的半不连续复制:
DNA复制的过程中前导链的复制时连续的,而另一条链,即后随链的复制是中断的,不连续的。
29、RACE:
是利用PCR技术在已知部分cDNA序列的基础上特异性克隆其5‘端或3‘端缺失序列的方法。
30、T-DNA:
根癌农杆菌Ti或Ri质粒中的一段DNA序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组中,是植物分子生物学中广泛应用的遗传转化载体。
31、安慰性诱导物:
指的是与转录调控中实际诱导物相似的一类高效诱导物,但不是该诱导酶的底物。
32摆动假说:
crick为了解释反密码子中某些稀有成分(如I)的配对以及许多氨基酸有2个以上密码子的问题而提出的假说
33操纵子:
是指原核生物中由一个或多个相关基因以及转录翻译调控元件组成的基因表达单元。
34单顺反子mRNA:
只编码一个蛋白质的mRNA称为单顺反子mRNA。
35蛋白质磷酸化:
指由蛋白质激酶催化的把ATP或GTP上γ位的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基上的过程,是生物体内一种普遍的调节方式,在细胞信号转导的过程中起着重要作用。
36多聚A位点(polyA位点):
在多聚A聚合酶的催化下,在mRNA前体3‘端接上一个约200~250个腺嘌呤核苷酸(A)的尾巴,起到稳定mRNA的作用。
37多顺反子mRNA:
一种能作为两种或多种多肽链翻译模板信使RNA,由DNA链上的邻近顺反子所界定。
38反式作用因子:
是指能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。
39复制叉:
复制时,双链DNA要解开成两股链分别进行DNA合成,所以,复制起点呈叉子形状,被称为复制叉子。
40核小体:
是染色质的基本结构单位,由大约200bp的DNA和组蛋白八聚体及外围H
蛋白所组成。
41后随链:
在DNA复制过程中,与复制叉运动方向相反的方向不连续延伸的DNA链被称为后随链或滞后链。
42基因定点突变:
向靶DNA片段中引入所需的变化,包括碱基的添加。
删除或改变,是分子生物学研究中一种非常有用的手段。
43基因克隆:
在分子生物学上,人们把将外源DNA插入具有复制能力的载体DNA中,转入宿主细胞使之得以永久保存和复制的过程称为基因克隆。
44顺反子:
功能基因,意为通过顺式(基因序列)及反式(所编码的蛋白质)实验所确定的一个遗传学单位。
45顺式作用元件:
存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列,包括启动子,增强子,调控序列和可诱导元件等,本身不编码任何蛋白质,仅仅提供一个作用位点,与反式作用因子相互作用参与基因表达调控。
46引发酶:
是依赖于DNA的RNA聚合酶,其功能是在DNA复制过程中合成RNA引物。
47引发体:
DNA复制过程中引发合成每个冈崎片段时所需的多蛋白复合物,包括预引发蛋白、具有ATP酶活性的蛋白质以及引物酶。
48引物:
是指一段较短的单链RNA或DNA,它能与DNA的一条链配对提供游离的3‘-OH末端以作为DNA聚合酶合成脱氧核苷酸链的起始点。
49转座子:
是存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。
(参与转座子易位及DNA链整合的酶称为转座酶)
50插入序列:
是最简单的转座子,是细菌的一小段可转座元件,它不含有任何宿主基因而常被称为插入序列,它们是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分。
51基因扩增:
:
指细胞内某些特定基因的拷贝数专一性地大量增加,为在短期内满足某种需要而产生足够的基因产物的一种调节手段。
52警报素:
53同工tRNA:
指几个代表相同氨基酸、能够被一个特殊的氨酰-tRNA合成酶识别的tRNA。
54代谢阻遏效应:
有葡萄糖存在时,不论诱导物存在与否,操纵子都没有转录活性,结构基因都不表达。
55基因家族:
在基因组进化中,一个基因通过基因重复产生了两个或更多的拷贝,这些基因即构成一个基因家族,是具有显著相似性的一组基因,编码相似的蛋白质产物。
56反转录PCR:
是以反转录的cDNA作模板所进行的PCR反应,可用于测定基因表达的强度,还可用于鉴定已转录序列是否发生突变等。
57限制修饰系统:
是一种存在于细菌(可能还有其他原核生物),可保护个体免于外来DNA(如噬菌体)侵入的系统,主要由限制内切酶和甲基化酶组成的二元系统。
58反转录酶:
是依赖RNA的DNA聚合酶,它以RNA为模板,4种dNTP为底物,催化合成DNA,些过程称为逆转录过程。
59基因敲除:
是指对一个结构已知但功能未知的基因,从分子水平上设计实验,将该基因去除,或用其它顺序相近基因取代,然后从整体上观察现象,推测相应基因的功能。
60.假基因:
在多基因家族中,某些成员并不产生有功能的基因产物,这些基因称为假基因。
二、填空题
1.原核生物基因组特点:
(1)结构简练。
除必要的间隔,不转录的序列极少。
(2)存在转录单元。
多顺反子mRNA和操纵子。
(3)有重组基因。
a基因套另一个基因,b部分重叠c只有一个碱基重叠,阅读框相同和不相同。
真核生物基因组特点:
(1)真核基因组庞大。
(2)真核基因组存在大量的重复序列。
(3)真核基因组大部分为非编码序列,占90%以上。
(4)真核基因组的转录产物为单顺反子。
(5)真核基因组是断裂基因,有内含子结构。
(6)真核基因组存在大量的顺式作用元件。
(7)真核基因组中存在大量的DNA多态性,单核苷酸,串连重复序列多态性。
(8)真核基因组具有端粒结构。
2.用于基因克隆的常用酶:
限制性内切酶、DNA聚合酶、Klenow酶、反向转录酶、连接酶、末端转移酶、碱性磷酸酶、外切核酸酶、多核苷酸激酶、TaqDNA聚合酶、同尾酶、同裂酶、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸酶(Dnase)、核糖核酸酶(RNaseA)、T4多聚核苷酸激酶、末端脱氧核糖核苷酸转移酶、RNaseH、细胞壁裂合酶、蛋白酶K、
3.DNA的二级结构是指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。
通常情况下,DNA的二级结构分两大类:
右手螺旋(A-DAN,B-DNA)和左手螺旋(Z-DNA).
4.真核生物染色体的结构
(1)真核细胞染色体的组成
真核细胞的染色体由DNA,组蛋白,非组蛋白及部分RNA组成,其蛋白质与相应DNA的质量比约为2:
1.
(2)染色体上的蛋白质主要包括组蛋白和非组蛋白.组蛋白是染色体的结构蛋白,它与DNA组成核小体
(3)真核细胞基因组的最大特点是它含有大量的重复序列,而且功能DNA序列大多被不编码蛋白质的非功能DNA所隔开.许多DNA序列不编码蛋白质,是无生理功能的.真核细胞DNA序列大致上可被分为3类:
(1)不重复序列
(2)中度重复序列(3)高度重复序列――卫星DNA
(4)染色质和核小体
由DNA和组蛋白组成的染色质纤维细丝是许多核小体连成的念珠状结构.(7.)核小体是由H2A,H2B,H3,H4各两个分子生成的8聚体和由大约200bpDNA组成的
5.原核生物mRNAσ因子的作用
(1)σ因子专门负责识别转录起点,当合成了9~12b时,便离去
(2)提高酶辨认启动子的能力,降低酶与非特异序列的结合;
(3)促进DNA开链,提高合成起始的速度,阻止酶分子聚合。
(4)在第一个核苷酸结合后,就由起始转向延伸。
酶要向非特异性序列不断合成RNA就要释放σ因子,(因对特殊的启动序列结合力强),酶的构像也有变化,剩下核心酶,由于有σ因子,使全酶对启动子(特异序列)的结合力高1000倍。
(5)σ因子的另一个重要作用是帮助核心酶选择模板链,因为如果没有σ因子,核心酶可以选择任意一条链为模板合成RNA。
6.真核生物RNA的内含子的剪接方式,分类、
Ⅰ类内含子:
5’U↓A……G↓U 3’,rRNA前体(基因)
Ⅱ类内含子:
5’U↓GUGCG……A↓U 3’,细胞器基因
核基因内含子:
5’AAG↓GUPuAGU………UACUAAC…Py(n)XPyAG↓G3’,一般核基因
(1)核基因内含子的剪接(GU-AG型为主,AU-AC型次要)
剪接体:
hnRNA被剪接加工的场所。
剪接体的构成:
核内小分子RNA(编号为U1,U2,U4,U5,U6)与其相应的蛋白因子(snRNPs)结合构成核蛋白snRNP。
这些核蛋白因子(U1snRNP~U6snRNP)依次和hnRNA结合形成剪接体。
(2)组成型剪接:
有序的,固定的剪接方式。
(3)特异性剪接:
有选择的,非固定的剪接方式,内含子的变位剪接。
(4)Ⅰ类和Ⅱ类内含子的剪接:
具有自我催化活性(无剪接体),能自我剪接
8、真核生物DNA的重复序列
(1)非重复序列(单一序列):
(2)轻度重复序列:
(3)中度重复序列:
(4)高度重复序列:
9.细胞RNA种类
答:
mRNA、tRNA、rRNA,还有真核生物结构基因转录产生的mRNA前体分子,因分子大小很不均一,称核内不均一RNA(hnRNA)。
许多种小分子RNA,如核内小RNA(snRNA),反义RNA(asRNA)等。
10.原核生物的代谢调节(找不到,题目也不清楚,有很多个版本)
11.RNA通过什么键连接,有什么链
磷酸二酯键
编码链(有意义链):
与mRNA序列相同的DNA链。
反义链(模板链):
为模板指导mRNA合成的DNA链。
12.原核生物的起始因子
起始因子
IF-1促进IF-2,IF-3的功能;
IF-2协助fMet-tRNAfmet与30S亚基结合,进而进入P位;
IF-3促进70S核糖体解离(对前一次合成),促进mRNA与30S亚基结合。
13.trp的调节因子有哪些?
作用?
第一套:
trpEDBCA,控制从分支酸合成色氨酸的酶的合成。
(基因融合)
第二套:
aroH基因,编码芳香族氨基酸生物合成共同通路中,催化起始反应的酶之一。
第三套:
trpR调节基因,其产物Trp是一阻遏蛋白,不但可以抑制trpEDBCA和aroH,亦可以阻抑自身的合成,谓之“自体控制”。
(普通现象,也分为正负调控)
14.环状DNA的复制方式
(1)θ型
(2)滚环型(3)D-环型
15.安慰性诱导物有哪些?
异丙基巯基半乳糖苷(IPTG)、巯甲基半乳糖苷(TMG)、O-硝基半乳糖苷(ONPG)
16.DNA后随连合成的条件
引发体、引发酶、RNA聚合酶、DNA聚合酶Ⅲ、引物、冈崎片段、RNaseH、DNA聚合酶Ⅰ、DNA连接酶、
17.乳糖操纵子的有哪些部分?
乳糖操纵子包括调节基因、启动基因、操纵基因和结构基因
18.已知核糖体上有哪些活性中心?
它们在多肽合成中各起什么作用?
答:
核糖体上具有一系列与蛋白质合成有关的结合位点与催化位点:
①与mRNA的结合位点;②与新掺入的氨酰tRNA的结合位点――氨酰基位点,又称A位点,又叫受位;③与延伸中的肽酰tRNA的结合位点――肽酰基位点,又称P位点,也叫供位;④肽酰转运后与即将释放的tRNA的结合位点――E位点,是中间听靠站;⑤与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶(即延伸因子EF-G)的结合位点;⑥肽酰转移酶的催化位点。
此外还有与蛋白质合成有关的其他起始因子、延伸因子和终止因子的结合位点。
核糖体的活性位点
(1)mRNA结合位点:
位于30S亚基的头部,16S3’端
(2)P位点:
由30亚基(大部)+50亚基(小部)组成,供肽酰-tRNA结合。
亦可与起始tRNA即fMet-tRNA相结合。
(3)A位点:
主要由50S亚基上的活性部位组成,供AA-tRNA结合。
(4)肽基转移酶活性位点(转肽酶中心):
位于P位与A位连接处。
(5)5SrRNA位点(50S上):
靠近转移酶位点,可能与tRNA进入有关。
(6)E位点(50S上):
与氨酰基-tRNA释放有关。
19.原核生物蛋白质合成时的延伸因子有哪些?
延伸因子
IF-Tu协助将AA-tRNA带入A位,不能与起始tRNA作用。
EF-Ts使行使功后的EF-Tu.GDP重新活化,再生位EF-Tu.GTP
EF-G负责延伸过程中的移位、耗能,肽基-tRNA从A→P,mRNA移动一个密码子的距离。
真核生物对应的因子是EF-1和EF-2
20.真核细胞普遍的转录因子有哪些?
功能?
21.凝胶电泳中影响迁移率的因素
影响迁移率的因素:
(1)与电场强度、电泳分子净电荷成正比;
(2)与电泳分子的摩擦系数成反比
分子摩擦系数为分子大小、极性、介质粘度的函数。
22.tRNA结构(四臂、四环)
接受臂,TψC臂,反密码子臂,D臂,多余臂(可变环)。
TψC环,反密码子环,D环,可变环
23.细胞内蛋白质的修饰作用一般有那些?
修饰作用①磷酸化(核糖体蛋白)②糖基化(糖蛋白)③甲基化(组蛋白)
④羟基化(胶原蛋白)
三、简答题:
1.有哪些条件可促使DNA变性
DNA变性是指双螺旋区氢键断裂,空间结构破坏,形成单链无规线团状态的过程。
其条件有:
高温、强酸强碱、低离子强度或是加入变性剂(甲酰胺、尿素、甲醛等)。
2.mRNA在总RNA所占比例少的原因
(1)mRNA的半衰期。
短转录开始1min后,降解可能就已经开始。
一般半衰期为2min。
转录蛋白的量取决于转录和翻译的起始效率。
(2)DNA转录的mRNA少(3)容易降解
3蛋白质的合成所需蛋白因子
起始因子:
IF-1促进IF-2,IF-3的功能;
IF-2协助fMet-tRNAfmet与30S亚基结合,进而进入P位;
IF-3促进70S核糖体解离(对前一次合成),促进mRNA与30S亚基结合。
延伸因子:
EF-Tu协助将AA-tRNA带入A位,不能与起始tRNA作用;EF-Ts使行使功后的EF-Tu.GDP重新活化,再生位EF-Tu.GTPEF-G负责延伸过程中的移位、耗能,肽基-tRNA从A→P,mRNA移动一个密码子的距离。
终止因子:
识别终止密码,终止合成,释放核糖体。
RF-1:
识别UAA,UAG
RF-2:
识别UAA,UGA;RF-3:
协助上述两个因子
4、原核生物代谢作用:
葡萄糖对其他糖代谢的影响(葡萄糖效应)
葡萄糖在糖酵解途径中产生的某些代谢物是腺苷酸环酶活性的抑制剂,腺苷酸环酶活性是ATP转化成cAMP的催化剂。
当原核生物内有葡萄糖时,在葡萄糖代谢的影响下cAMP的量减少,cAMP-CRP复合物减少而无法启动乳糖操纵子的正调节,乳糖操纵子不表达
5、不同碱基合成核苷酸链破译密码子
理论上的推测:
mRNA有四种核苷酸,而蛋白质中有20种氨基酸。
若二联子:
排列方式有42=16种,不够代表20种氨基酸。
若三联子:
排列方式有43=64种,即有64种密码子,可以满足20种氨基酸的需要。
6、组蛋白与非组蛋白有哪些生物特性
组蛋白的生物特性:
1)进化上的保守性
(2)无组织特异性(3)氨基酸分布不对称(4)化学修饰:
磷酸化甲基化乙酰化
(5)组蛋白H5具有种特异性
非组蛋白的生物特性:
(1)多样性
(2)组织专一性(3)种属专一性
7,当乳糖操纵子的弱启动子突变成强启动子时对转录效率有什么作用?
(不可诱导,难诱导)
启动子(P)是与RNA聚合酶结合部位,同时P与O有7bp的重叠,是阻遏蛋白占据了聚合酶位置,而实现阻遏作用。
如先有酶占据,则不能阻遏。
当弱启动子突变形成强启动子时,启动子与RNA聚合酶结合加强,形成难诱导或不可诱导突变,最终导致转录效率增强或不用诱导而持续转录。
8.构建分子克隆载体所需的条件?
分子克隆的步骤?
分子克隆载体所需条件:
①能在宿主细胞内独立进行高效的自我复制。
②具备比较容易识别的筛选标志。
③分子量大小适当,与载体的外源基因大小有关。
④容易进入宿主细胞。
⑤具有适当的限制性内切酶的单一酶切位点,即多克隆位点,该位点通常不能位于选择性标记基因内。
⑥高拷贝。
分子克隆步骤:
①目的基因的制备。
②基因载体的选择。
③目的基因和载体的剪切。
④目的基因和载体的连接。
⑤宿主细胞的转化(重组DNA分子导入宿主细胞,从而获得新的遗传特性)。
⑥重组体的筛选和鉴定。
⑦克隆基因的表达及表达产物的检测和分离纯化。
可简单地概述为:
分、切、接、转、筛、捡。
9.基因定点突变的技术原理
对已知基因序列设计突变位点,合成短核苷酸引物,突变的核苷酸包含其中。
与原基因进行分子杂交,再复制扩增,成为带有突变位点的新基因(或基因片段)。
10真核细胞内含子的种类有哪几类?
其剪接特点是什么?
答:
有:
①Ⅰ类内含子:
(5’U↓A……G↓U 3’,rRNA前体(基因);其剪接特点:
一、二价离子;自由的鸟苷酸辅助因子(GTP,GDP,GMP);无需能量,经过三次转酯反应,内含子形成环状被切出。
②Ⅱ类内含子:
(5’U↓GUGCG……A↓U 3’,细胞器基因)其剪接特点是:
无需外部因子参与。
由内含子内部的一个A的2’-OH作为亲核基团攻击内含子5’端磷酸二酯键,经二次转酯反应,内含子成套索状被切除
③核基因内含子:
5’AAG↓GUPuAGU………UACUAAC…Py(n)XPyAG↓G3’,一般核基因
11.DNA复性的特点有哪些?
变性的DNA的互补链在适当条件下重新缔合成双螺旋的过程称为DNA的复性。
其特点有:
复性温度不宜过低,一般在Tm—25℃较合适;需维持一定的离子强度,复性速度与单链片段的浓度、长度及复杂度有关。
(不确定)
12使原核生物基因转录能精确进行的相关的序列、结构
必不可少的三个序列:
-35(RNA聚合酶结合位点)、-10(RNA荣合酶起始位点)启动子序列和终止子;
13安慰性诱导物、作用、例子、定义。
P239
答:
安慰诱导物是一种与天然诱导物结构相似的化合物,它虽然能诱导操纵子表达,但是它不能被操纵子基因产生的酶分解。
在lac操纵子中异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是乳糖的类似物能代替异乳糖作为诱导物,但不能作为β-半乳糖苷酶的底物进入代谢途径。
为了证实诱导物的作用是诱导新酶合成,而不是将已存在于细胞中的酶前体转化成有活性的酶,科学家设计了同位素示踪实验。
他们把大肠杆菌细胞放在有放射性35S标记的氨基酸但没有任何半乳糖苷诱导物的培养基中繁殖几代,然后再将这些带有放射活性的细菌转移到不含35S、无放射性的培养基中,随着培养基中诱导物的加入。
β-半乳糖苷酶便开始合成。
分离纯化β-半乳糖苷酶,发现这种酶无35S标记,说明酶的合成不是由前体转化而来的,而是加入诱导物后新合成的。
14.DNA的大小沟的作用
P34形成沟状结构是DNA与蛋白质相互作用所必需的,这样DNA结合蛋白与DNA修饰蛋
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