常用pH缓冲溶液的配制和pH值.docx

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常用pH缓冲溶液的配制和pH值

（一）溶液配制注意事项

1.药品要有较好的质量  试剂分为优级纯（保证试剂,Guaranteed reagent,G.R.）、分析试剂（Antalytical reagent,A.R.）化学纯（Chemical pure,C.P.）与实验试剂（Laboratory reagent,L.R.）等等。

工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。

2.药品称量要精确。

3.配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH在5、5~7、0之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４.配好后的溶液,应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质）,以防杂菌生长。

（二）0、067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液

1.1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制:

称取磷酸二氢钾（KH2PO4,A.R.）9、08g,用蒸馏水溶解后,倾入1 000ml容量瓶内,再稀释至刻度（1 000ml）。

2.１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制:

称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4,A、R、）9、47g（或者Na2HPO4·2H2O 11、87g）用蒸馏水溶解后,放入1 000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。

3.按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液。

附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位:

毫升）

pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 

5、8 8、0 92、0 7、1 66、6 23、4 

5、9 9、9 90、1 7、2 72、0 28、0 

6、0 12、2 87、8 7、3 76、8 23、2 

6、1 15、3 84、7 7、3 80、8 19、2 

6、2 18、6 81、4 7、5 84、1 15、9 

6、3 22、4 77、6 7、6 87、0 13、0 

6、4 26、7 73、3 7、7 89、4 10、6 

6、5 31、8 68、2 7、8 91、5 8、5 

6、6 37、5 62、5 7、9 93、2 6、8 

6、7 43、5 56、5 8、8 94、7 5、3 

6、8 49、6 50、4 8、1 95、8 4、2 

6、9 55、4 44、6 8、2 97、0 3、0 

7、0 61、1 38、9 8、4 98、0 2、0 

（三）0、15Mol/L PB液

附表2  0、15Mol/LPB液配制法

pH 0、15Mol/L Na2HPO4（ml） 0、15Mol/L NaH2PO4（ml） 

6、4 26、5 73、5 

6、6 37、5 62、5 

6、8 49、0 51、0 

7、0 61、0 39、0 

7、2 72、0 28、0 

7、4 81、0 19、0 

7、6 87、0 13、0 

Na2HPO4·2H2O分子量=175、05   0、15Mol/L溶液含26、7g/L。

Na2HPO4·12H2O分子量=358、22  0、15Mol/L溶液含53、7g/L。

NaH2PO4·H2O分子量=138、00    0、15Mol/L溶液含20、7g/L。

NaH2PO4·2H2O分子量=156、03   0、15Mol/L溶液含23、4g/L。

（四）0、2Mol/L PB缓冲液

附表3  0、2mol/L PB缓冲液配制法

pH 0、2 Mol/L Na2HPO4（ml） 0、2Mol/L NaH2PO4（ml） 

5、8 8、0 92、0 

6、0 12、3 87、7 

6、2 18、5 81、5 

6、4 26、5 73、5 

6、6 37、5 62、5 

6、8 49、0 51、0 

7、0 61、0 39、0 

7、2 72、0 28、0 

7、4 81、0 19、0 

7、6 87、0 13、0 

7、8 91、5 8、5 

8、0 94、7 5、3 

0、2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35、61g/L

            Na2HPO4·12 H2O溶液含71、64g/L

    0、2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27、60g/L

           NaH2PO4·2 H2O溶液含31、21g/L

欲配0、1Mol/L PB缓冲液则在0、2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。

欲配制PBS液时,则在溶液中加0、85％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（0、15Mol/L PH 7、2）

  NaCl                          8、0g

  KCl                           0、2g

  Na2HPO4                      1、15g

 （如为Na2HPO4·12H2O,则为2、89g）

  KH2PO4                        0、2g

将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中,完全溶解后,115℃高压灭菌10min~15min,存在4℃冰箱中备用。

此液可用于配制与稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）  文章来自:

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zfg

1.硼酸（Ｈ3BO3）

0、2Mol/L硼酸:

硼酸12、37g加水至1 000ml。

2.硼砂（Na2B4O7）

0、05Mol/L硼砂:

硼砂19、07g加水至1 000ml。

附表4  不同pH的0、2Mol/L硼酸缓冲液配制法

pH 0、05Mol/L硼砂（ml） 0、2Mol/L硼酸（ml） pH 0、05Mol/L硼砂（ml） 0、2Mol/L硼酸（ml） 

7、4 1、0 9、0 8、2 3、5 6、5 

7、6 1、5 8、5 8、4 4、5 5、5 

7、8 2、0 8、0 8、7 6、0 4、0 

8、0 3、0 7、0 9、0 8、0 2、0 

（七）巴比妥缓冲液

1.pH8、2离子强度0、05Mol/L巴比妥缓冲液

   巴比妥钠                 47、6g

   蒸馏水                   3 000ml

   1、17N  HCl               55、0ml

  （1、17 N  HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）

⑴ 将4、76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。

⑵ 加1、17 N  HCl 55ml。

⑶ 用HCl调节pH到8、2,并加蒸馏水至4 265ml。

    2.pH8、4  0、06Mol/L巴比妥缓冲液

        巴比妥                   1、84g

        巴比妥钠                 10、30g

        加蒸馏水至               1 000、00ml

    3.pH8、6  0、06Mol/L巴比妥缓冲液

        巴比妥                   1、66g

        巴比妥钠                 12、76g

        加蒸馏水                 1 000、00ml

（八）0、2Mol/L醋酸盐缓冲液  见表附表5

附表5  0、2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法

pH 0、2Mol/L

Tris（ml） 0、1Mol/L

HCl（ml） pH 0、2Mol/L

Tris（ml） 0、1Mol/L

HCl（ml） 

23℃ 37℃ 23℃ 37℃ 

9、10 8、95 25 5 8、06 7、90 25 27、5 

8、92 8、76 25 7、5 7、96 7、82 25 30、0 

8、75 8、60 25 10、5 7、87 7、73 25 32、5 

8、62 8、48 25 12、5 7、77 7、63 25 35、0 

8、50 8、37 25 15、5 7、66 7、52 25 37、5 

8、40 8、27 25 17、5 7、54 7、40 25 40、0 

8、32 8、18 25 20、0 7、36 7、22 25 42、5 

（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）

不同pH,0、05Mol/L

25ml0、2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0、1NHCl,加水稀释至100ml（见下表）

附表6  Tris—HCl缓冲液配制法

    pH 0、2Mol/L

Tris（ml） 0、1NHCl

（ml）     pH 0、2Mol/L

Tris（ml） 0、1NHCl

（ml） 

23℃ 37℃ 23℃ 37℃ 

9、10 8、96 25 5 8、05 7、90 25 27、5 

8、92 8、78 25 7、5 7、96 7、82 25 30、0 

8、74 8、60 25 10、0 7、87 7、73 25 32、5 

8、62 8、48 25 12、5 7、77 7、63 25 35、0 

8、50 8、37 25 15、0 7、66 7、52 25 37、5 

8、40 8、27 25 17、5 7、54 7、40 25 40、0 

8、32 8、18 25 20、0 7、36 7、22 25 42、5 

8、23 8、10 25 22、5 7、20 7、05 25 45、0 

8、14 8、00 25 25、0     25   

三羟甲基氨基甲烷（Tris）

 分子量=121、14

 0、2Mol/L三羟甲基氨基甲烷:

Tris24、23g,加水至1 000ml。

 0、1NHCl:

取HCl8、6ml,加水至1 000ml。

（十）0、5Mol/L pH9、5碳酸盐缓冲液

 NaHCO3                 3、70g

 Na2CO3                  0、60g

溶于600、00ml蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。

最好小量配制。

（十一）甘油磷酸缓冲液

1.配制pH8、0磷酸缓冲液

   0、1Mol/L Na2HPO4       94、50ml

   0、1N NaH2PO4           5、50ml

   混合即可

2.9份甘油与1份pH8、0磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液。

 用途:

用于免疫荧光试验。

（十二）Hank’s液

1.贮存液

   NaCl                   80、00g

   KCl                    4、00g

   Na2HPO4·12 H2O        1、52g

   KH2PO4                 0、60g

   葡萄糖                  4、00g

   0、4％酚红液             50、00ml

   双馏水加至             100、00ml

 115℃高压灭菌15min,冰冻保存。

2.工作液

   贮存液                 1份

   双馏水                 9份

 115℃高压灭菌15min。

临用时用灭菌的5、6％NaHCO3液调pH值至7、2左右（溶液呈橙红色）。

（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）

配方1:

氯化汞             6、0g

       碘化钾              12、4g

       20％NaOH           30ml

       加蒸馏水至          100ml

配方2:

碘化汞              11、5g

       碘化钾               8g

       蒸馏水               50ml

    （完全溶解后）过滤,加20％NaOH 50ml。

  用途:

检测溶液中氨离子。

（十四）阿氏（Alsever’s）液

       葡萄糖               2、05g

       柠檬酸钠             0、80g

       氯化钠              0、42g

       蒸馏水              100ml

  溶解后,以10%柠檬酸调节pH至6、1,过滤,分装,10磅10min灭菌,4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S.P.液或双抗液）

       青霉素（40万U）    5支

       链霉素（200万μg）  1支

  分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中,混合后分装小瓶,置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。

  临用时,按1%的量加入营养液或其她溶液中,最后浓度就是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml。

（十六）洗液（清洁液）

配方1:

重铬酸钾            150g

        蒸馏水             300ml

        浓硫酸             3 000ml

将重铬酸钾加入蒸馏水中,使之自然溶解或水浴溶解,亦可在大坩埚中加热溶解,然后慢慢加入浓硫酸,边加边搅拌,见发热过剧则稍停,冷却后再继续加。

此为强洗液。

盛清洁液的容器要坚固,上加厚玻璃盖,操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜与厚胶皮手套,以保安全。

洗液一旦变绿,表示铬酸已经还原,失去了氧化能力,不宜再用。

如将这样洗液加热,再加适量重铬酸钾,又可重新使用。

配方2:

浓硫酸              50%

        蒸馏水              50%

        重铬酸钾            5%

此为中等强度洗液。

配方3:

重铬酸钾             100g

        蒸馏水              1 000ml

        加热溶解,冷却后缓慢加入

      工业硫酸             100ml

此液为弱洗液,为棕红色。

使用此液时,必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净,经自来水冲洗,沥干然后才能浸入,否则该洗液很快失效

　　缓冲溶液（英文:

buffersolution）就是一种能在加入少量酸或碱与水时大大减低pH变动的溶液。

pH缓冲系统对维持生物的正常pH值与正常生理环境起到重要作用。

多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动,而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。

在生物体中有三种主要的pH缓冲体系,它们就是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及磷酸盐缓冲系统。

每种缓冲体系所占的分量在各类细胞与器官中就是不同的。

　　在生化研究工作中,常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。

研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到研究工作的成效。

如果“提取酶”实验体系的pH值变动或大幅度变动,酶活性就会下降甚至完全丧失。

所以配制缓冲溶液就是一个不可或缺的关键步骤。

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常用作缓冲溶液

　　常用作缓冲溶液的酸类由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。

生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羟甲基氨基甲烷）等系统,生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系,因为有时影响实验结果的因素并不就是缓冲液的pH值,而就是缓冲液中的某种离子。

如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐与三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。

　　硼酸盐:

硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。

　　柠檬酸盐:

柠檬酸盐离子容易与钙结合,所以存在有钙离子的情况下不能使用。

　　磷酸盐:

在有些实验,它就是酶的抑止剂或甚至就是一个代谢物,重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。

而且它在pH7、5以上时缓冲能力很小。

　　三羟甲基氨基甲烷:

它可以与重金属一起作用,但在有些系统中也起抑制作用。

其主要缺点时温度效应。

这点往往被忽视,在室温pH就是7、8的Tris缓冲液,4℃时就是8、4,37℃时就是7、4,因此,4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时,其氢离子浓度就增加了10倍。

在pH7、5以下,其缓冲能力极为不理想。

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缓冲溶液组成

　　缓冲体系由

　　１、弱酸与它的盐（如HAc---NaAc）

　　2、弱碱与它的盐（NH3、H2O---NH4Cl）

　　3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4---Na2HPO4）

　　的水溶液组成。

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决定缓冲液pH值的因素

　　设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数）,平衡时弱酸的浓度为[酸],弱酸盐的浓度为[盐],则由弱酸的电离平衡式可得下式:

　　[H+]=Ka{[弱酸]/[共轭碱]}

　　pH=pKa+log{[共轭碱]/[弱酸]}

　　这就就是Henderson-Hasselbach等式。

　　如果[弱酸]=[共轭碱],

　　pH=pKa

　　根据此式可得出下列几点结论:

　　1缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐与酸的浓度有关。

弱酸的pH值衡定,但酸与盐的比例不同时,就会得到不同的pH值。

酸与盐浓度相等时,溶液的pH值与PK值相同。

　　2酸与盐浓度等比例增减时,溶液的pH值不便。

　　3酸与盐浓度相等时,缓冲液的缓冲效率为最高,比例相差越大,缓冲效率越低,缓冲液的一般有效缓冲范围为PK±1pH。

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缓冲溶液的配制

　　只要知道缓冲对的PK值,与要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）,就能按公式计算[盐]与[酸]的量。

这个算法涉及对数换算,较麻烦,前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。

只要我们知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算处所用缓冲剂的比例与用量。

例如配制500nmpH5、8浓度为0、1M磷酸缓冲液。

　　经查表知pH5、8浓度为0、2MNa2HPO48、0毫升,而0、2MNa2HPO492、0毫升。

依此可推论出配制100ml0、1M的磷酸缓冲液需要0、1MNa2HPO48、0毫升,而0、1MNa2HPO4需要92、0毫升。

　　计算好后,按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中,加少量蒸馏水溶解,转移入50ml容量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,就能得到所需的缓冲液。

　　各种缓冲溶液的配制,均按表格按比例混合,某些试剂,必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等。

另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。