培养基平板用途.docx
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培养基平板用途
血琼脂培养基
【用途】适用于各类需氧及兼性厌氧细菌生长,一般细菌学检验标本的分离培养、溶血鉴别及菌种保存
【原理】羊血或兔血时细菌生长繁殖的良好营养物质。
在45c〜50c的基础培
养基中加加入血液(5〜10%可以保存血液中某些不耐热的生长因子,同时血细
胞不被破坏。
若将NaCl的浓度提高到0.85%,则可使血平皿经35c18〜24h后色泽仍然鲜艳。
在血平板上除可以观察菌落的形态外,还可以判断溶血的情况:
菌
落周围的培养基内红细胞完全破坏为溶血。
菌落周围呈绿色为a溶血。
溶血的情况可以显微镜下用低倍镜观察
【成分】牛肉浸出液1L蛋白陈10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维羊血60mlpH
7.2〜7.4
【制备】将前四项成分混合,加热溶化,校对pH,置三角瓶内,高压灭菌(121C15min)后冷至约50C,加入无菌纤维羊血,旋转式充分摇匀后倾平板。
血琼脂层厚4mm凝固后,抽样置于35c培养18〜24h,如无菌生长,冷藏备用。
【接种】取标本增菌培养物或纯培养物划线接种到平板上,置35c培养1〜2d,
观察结果
【观察结果】在血平板上除可以观察菌落的形态外,还可以判断溶血的情况:
菌
落周围的培养基内红细胞完全被破坏为溶血,菌落周围呈绿色为a
【质量控制】化脓性链球菌,ATCC19615生长良好,-溶血。
肺炎链球菌,ATCC6303为a溶血。
表皮葡萄球菌,ATCC12228生长良好,不溶血。
★巧克力培养基
【用途】主要用于嗜血杆菌的分离,亦可用于奈瑟菌的增菌培养。
【原理】流感嗜血杆菌培养时,需要依赖血液中的X及V因子方能生长繁殖,当培养基加热至80〜90c时,可使血液中的红细胞破裂,以利于嗜血杆菌,奈瑟菌等的生长培养。
凡疑有这些菌种存在的标本,均应接种巧克力平板。
血液标本培养,增菌后又细菌生长,若移种巧克力平板上,有利于分离更多的细菌。
【成分】牛肉浸出液1L蛋白陈10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维马血、羊血或兔
血100mlpH7.2〜7.4
【制备】将前四项成分混合,加热溶化,校对pH,高压灭菌(121C15min)后在80〜90c以无菌方法加入血液,摇匀后置90c水浴中。
&t持该温度15min,使之呈巧克力色取出,至室温冷至约50C,倾制平板。
凝固后,抽样置于35C培养18〜24h,如无细菌生长,冷藏备用。
【接种】将可疑标本直接划线接种于该培养基上,置35c普通培养或置含5%-
10%1氧化碳环境培养18〜24h,取出观察细菌生长状况。
【观察结果】流感嗜血杆菌菌落微小(0.8mm),无色透明、光滑整齐、似露滴状,48h后达1.5mm从血液或脑脊液中分离的菌落往往形成液状,菌落较大,老培养物菌落中心呈凹陷。
【质量控制】流感嗜血杆菌ATCC10211生长良好,菌落典型。
肺炎链球菌,ATCC6305生长良好,菌落典型。
【保存】置冰箱,1周内用完。
★营养肉汤
【用途】用于一般细菌的增加培养,加入1%勺琼脂粉亦可作营养琼脂。
【原理】该培养基含有氮及微量无机盐,适宜一般细菌的生长繁殖,因此是最基础的培养基。
【成分】牛肉浸液1L蛋白陈10氯化钠5PH7.2〜7.4(牛肉浸液可用3.0g牛肉膏和1L蒸储水代替)
【制备】上述各成分混合溶解,校正pHo分装试管,每管3〜5ml。
高压灭菌(121C15min),做无菌试验后冷藏备用。
【质量控制】金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌均生长良好。
★肉浸液培养基
【用途】供作基础培养用。
营养比肉膏汤好,一般营养要求不高的细菌均可生长。
【原理】牛肉含有丰富的营养物质,如蛋白质、碳水化合物及无机盐类等,通过
水解并用Nacl
【成分】新鲜牛肉500蛋白陈10氯化钠5蒸储水1LpH7.4〜7.6
【制备】1.将新鲜牛肉去除脂肪、肌膜及肌腱,切成小块后用绞肉机绞碎(或用
刀剁碎)。
取500g碎肉,加蒸储水1L,混合后置冰箱中冷浸过夜。
2.将肉浸液取出,煮沸20〜30min(并不断搅拌,以免沉底、烧焦)。
冷后,用绒布或麻布挤压过滤,使所有的肉浸汁尽量挤出。
3.加入蛋白陈、氯化钠,加热溶解,补足蒸发的水分。
矫正Ph至7.4〜7.6。
4.用滤纸过滤,装瓶。
高压灭菌(121c15min)即成肉浸液。
5.与1L肉浸液中加入2〜3g琼脂,即成肉浸液琼脂。
【使用】根据用途不同可以制成营养肉汤,以此为基础制成其他培养基。
如制作固体培养基,加入琼脂1.5〜2端成。
【质量控制】金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好。
【保存】置冰箱可使用较长时间。
★蛋白月东水
【用途】1.供细菌靛基质(呷深)试验用2.一般细菌培养和传代
【原理】培养基中的蛋白陈含有色氨酸,能被有些细菌利用而成靛基质,与试剂对二甲氨基苯醛缩二呷咪。
而不利用色氨酸的细菌则无此反应,故可鉴别细菌。
因含有陈和氯化钠,故可供一般培养和传代。
【成分】蛋白陈(或胰蛋白陈)10氯化钠5蒸储水1LpH7.2
【制备】将上述成分溶于水中,校正pH,分装试管,每管2〜3ml,至121c灭菌15min备用
【接种】将待检菌接种培养基内,经35c培养18〜24h。
【质量控制】大肠埃希菌,生长极好,靛基质(+)伤寒沙门菌,生长良好,靛基质(-)金黄色葡萄球菌,生长良好,靛基质(-)
★血液增菌培养基
【用途】用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。
【成分】牛肉浸液1L际陈或多价蛋白陈10氯化钠5葡萄糖3〜枸檬酸钠3酵母
浸膏3琼脂0.750.75%对氨基苯甲酸5mlpH7.4
【制备】将上述各成分混合校正pHo分装于螺旋盖有橡皮塞可穿刺的瓶,每瓶
50ml。
高压灭菌(121C15min)后,无菌手续加入灭菌硫酸镁(24.65%)溶液1ml。
也可选用各种商品血液培养系统。
★葡萄糖肉汤
【用途】用于血液增菌。
【成分】蛋白陈10氯化钠5肉浸液(或心浸液)1L葡萄糖3枸檬酸钠30.5%对氨基苯甲酸水溶液10ml24.65%MgSO4?
7H2O溶液20ml青霉素酶1000U
【制备】将蛋白陈、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解,再加入葡萄糖、枸檬酸钠、对氨基苯甲酸及硫酸镁,继续煮沸5min,并补足失水,调整pH至7.8。
过滤分装于带有反口橡皮塞的玻璃瓶内,每瓶装50ml,高压灭菌115c20min,每瓶加入青霉素酶50U,经无菌试验合格后,冷却备用。
【接种】将采取的血液标本,以无菌手续注入培养液瓶中(血液1ml,培养液10ml),置35c培养箱内,每日取出观察一次结果。
【观察结果】经35c培养,如有细菌生长,可出现数种不同的表现,应随时做分离培养,可选用血琼脂、EMBt巧克力平板等。
无细菌生长表现的培养瓶,需连续观察7d,仍无细菌生长方可弃去。
在观察的过程中,至于应做2次分离培
养。
【临床经验】1.枸檬酸钠为抗凝剂,使血液加入培养基中不凝固。
2.对氨基苯甲酸能中和血液中磺胺类药物的抑制作用。
3.硫酸镁能破坏血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑制作用。
4.本培养基近年来有许多改良配方,如加入0.3〜0.5%酵母浸膏以增菌培养;加0.2%a酸刺激细菌生长;力口0.1%占液素能被覆于细菌的表面,使细菌免受抗体破坏;加入SPS可提高检出率。
常用阳性及阴性球菌分离培养基
★甘露醇琼脂
【用途】供致病性葡萄球菌分离培养用。
【原理】根据致病葡萄球菌耐盐性强和发酵甘露醇的两大特性,在25g/L含盐量
的甘露醇琼脂平板上能生长,并形成橙黄色均落,酚红指示剂起显色作用。
而凝固酶阴性葡萄球菌不发酵甘露醇呈现红色菌落。
微球菌及大部分革兰阴性杆菌基本不生长。
因此该平板起选择性分离和鉴别作用。
【成分】际蛋白陈10牛肉膏10氯化钠25琼脂20甘露醇100.2%酚红水溶液
12.5ml蒸储水1LpH7.4
【制备】将上述成分(除甘露醇、酚红外)溶于水中,加热后溶解,校正pH后
加入甘露醇和酚红水溶液,摇匀分装,经115C15min灭菌,待冷却到50c时倾注平皿,凝固后冷藏备用。
【接种】取待检标本或增菌培养物划平板,置35c培养18〜24h。
【观察结果】挑取橙黄色菌落,接种营养琼脂斜面,经培养后做涂片和其他生化鉴定0
【质量控制】金黄色葡萄球菌,生长,菌落呈黄色,直径>1.0mm表皮葡萄球菌,生长,菌落呈红色,直径〉1.0mm.普通变形杆菌、大肠埃细菌,基本不生长。
【保存】置冰箱内,使用期限2〜3d,如用无菌塑料袋包装可延长使用时间。
★哥伦比亚血琼脂
【用途】供革兰阳性球菌分离用。
【原理】培养基内含有蔡噬酸和黏菌素,对革兰阴性菌有很强的抑制作用。
【成分】胰酪蛋白冻12牛肉蛋白冻15玉米淀粉1氯化钠5黏菌素10mg蔡噬酸15mg琼脂粉12蒸储水1L脱纤维羊血50mlpH7.2〜7.4
【制备】将上述各成分(羊血和抗菌药物除外)充分混合,加热溶解,调pH7.2〜7.5,115C15min灭菌。
待冷至50c时加入脱纤维羊血50ml及黏菌素和紊噬酸
(预先溶于5ml水中)。
混匀,勿使产生气泡。
倾入无菌平皿,凝固后备用。
【接种】取经过增菌的标本或其他标本,直接划种于平板上,置35c24〜48h
观察结果。
【质量控制】配成的培养基应呈鲜红色,冰箱放置后可变为暗红色。
大肠埃希菌,ATCC25923抑制性生长。
肺炎链球菌,ATCC6303生长良好。
化脓性链球菌,ATCC19615生长良好。
★淋病奈瑟菌分离琼脂(GCAgar)
【用途】用于分离培养淋病奈瑟菌(亦可分离培养脑膜炎奈瑟菌))
【原理】因淋病奈瑟菌的繁殖对营养要求较高,标本含杂菌又多,难以分离,所有培养基内必须含有马血、血清及卵黄,以及多种氨基酸、维生素和辅酶等增补剂,如lsovitaleX(BBL)\Vitox(Oxoid)等。
另外,T-M(Thayer-Martin)培养基是在GC®脂的基础上,添加抗菌药物抑制剂以抑制革兰阳性细菌和真菌的生长,增强其选择性,提高检出率。
【成分】基础琼脂(双倍浓缩)多价陈(Oxiod)15麦淀粉1.0氯化钠
5K2HPO44.0KH2PO41球月旨粉10蒸储水500mlpH7.2增补齐1J2ml/100ml培养基马血(水溶解物)100ml/100ml培养基
【制备】将基础琼脂成分混合溶于水中,煮沸溶解,矫正pH,分装每瓶100ml,
经121
C灭菌15min备用。
临用时将琼脂基础100ml加热熔化,冷却至50c时加入无菌的5%^血水溶液(先欲温50C)100ml,再加入增补剂2ml,倾注平板。
注:
T-M培养基:
取GC®脂9、(双倍浓度)100ml,加入血红蛋白2%K溶液100ml,增补剂2ml,在倾注平板前加入抗菌药物混合液1ml。
抗菌药物培养基内最终浓度含有发:
TMP5ug/ml万古霉素3ug/ml,多黏菌素7.5ug/ml,制霉菌素12.5ug/ml。
【接种】取病灶部位分泌物(棉拭子),在取样现场迅速直接涂布在平板上,保温到实验室再做4区划线,立即置含10%C氧化碳温箱内,亦可用二氧化碳(或蜡烛缸),注意培养环境的适度,培养1〜d。
【观察结果】菌落较小(0.5〜1.0mm,湿润,光滑,凸起,透明无色成水珠状。
然后做涂片染色镜检和氧化酶等实验等进行鉴定。
【质量控制】使用前必须进行目的菌的生长试验,质量合格者,方可使用。
【保存】置冰箱内,一周内用完。
★中国蓝琼脂
【用途】可抑制革兰阳性细菌,使较好的弱选择性培养基。
【原理】以中国蓝为指示剂,无抑制作用,玫瑰红酸仅能抑制革兰阳性细菌生长,而对大肠杆菌没有抑制作用。
发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同,在此种
平板上的菌落颜色不同,便于鉴别菌种。
该培养基中不含胆盐,与SS琼脂配对用于粪便中志贺菌和沙门菌的分离是比较合理的。
【成分】牛肉膏5氯化钠5蛋白陈10琼脂15乳糖10蒸储水1L无菌1刈国蓝水溶液3ml1%玫现红酸乙醇溶液3
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