高等药分考试.docx
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高等药分考试
1,简述逆流色谱分离溶质的基本原理,并说明现代高速逆流色谱仪器的优势与缺陷,高速逆流色谱的方法,装置以及适用范围。
基本原理:
HSCCC利用了单向流体动力学平衡现象。
表现为一根100多米长的螺旋空管,注入互不相溶的两相溶剂中的一相作为固定相,然后作行星运动;同时不断注入另一相,由于行星运动产生的离心力场使得固定相保留在螺旋管内,流动相则不断穿透固定相;这样两相溶剂在螺旋管中实现高效的接触、混合、分配和传递。
由于样品中各组分在两相中的分配比不同,因而能使样品中各组分得到分离。
优势:
1,不用固态载体的高效液-液分配色谱技术,2,不存在样品的不可逆吸附,理论回收率100%,样品负载能力强,制备量大,重现性好,3,操作成本低,无制备柱消耗,后续投入较低,4,可采用广泛的溶剂体系和多样性的操作条件,5,操作简单,无需太多样品前处理。
缺陷:
如消耗溶剂多、检测限较低、灵敏度较差等,新型的逆流色谱仪器装置大多处于实验室设计研究阶段,商品化程度不高,工业化制备也面临着挑战,方法:
1,两相溶剂混合,2,用固定性注满管柱,移动相泵入首段,4,当尾端出现移动时,对检测器和记录仪调零,走基线,5,进样,收集。
装置:
储液罐,泵,螺旋管分离柱,检测器,色谱工作站,馏分收集器,应用范围:
1,天然产物已知有效成分的分离纯化2,化学合成物质的分离纯化3,中药一类、五类新药的开发4,中药指纹图谱和质量控制研究5,抗生素的分离纯化6,天然产物未知有效成分的分离纯化7,海洋生物活性成分的分离纯化8,放射性同位素分离9,多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手性分离等。
2,什么是药品质量标准?
什么是标准物质?
什么是有关物质?
目前药品质量标准中关于有关物质的规定存在哪些问题?
有何解决办法?
简述常用有关物质分析的方法?
答:
把反映的药品质量特性的技术参数,指标明确规定下来,形成技术文件,规定药品质量规格及检验方法,就是药品质量标准。
标准物质:
具有一种或多种足够均匀和很好确定了的特性值,用以校准测量装置、评价测量方法或给材料赋值的一种材料或物质,有关物质:
主要指在生产工艺过程中带入的原料药、中间体、异构体、聚合体、反应副产物、降解产物等。
对药品纯度要求应基于安全性和GMP2方面考虑,允许含少量无害或毒性极低的共存物,但对有毒杂质测定应严格控制。
问题:
主要是对有关物质概念不清,检测采用的方法研究不够,质量标准检查项中主要考虑药品的有效性、纯度、安全性3个方面。
对影响药品有效性和安全性的杂质是检查重点。
分析方法:
有关物质检查通常采用色谱法,其专属性好,灵敏度高。
根据有关物质的性质选择TLC,HPLC,GC,呈色反应或分光光度法,首先要考察系统适应性试验。
3,简述质谱常用的离子源和质量分析器。
离子源:
对于气相质谱来说,主要有电子轰击电离源(EI)、化学电离源(CI)和场致电离源(FI)及场解吸电离源(FD)。
对于液相质谱(LC/MS)来说,主要有大气压离子源(API)、快原子轰击源(FAB)和基质辅助激光解析电离源(MALDI)三种电离方式。
质量分析器:
磁质量分析器,四极杆质量分析器,离子阱质量分析器,飞行时间质量分析器,傅里叶变换离子回旋共振质量分析器等。
4,气相色谱的种类和原理。
气相色谱法的分离原理是利用要分离的诸组分在流动相和固定相两相间的分配有差异,当两相作相对运动时,这些组分在两相间的分配反复进行,从几千次到数百万次,即使组分的分配系数只有微小的差异,随着流动相的移动可以有明显的差距,最后使这些组分得到分离。
1,填充柱气相色谱:
气-液色谱,气-固色谱,2,毛细管气相色谱:
毛细管柱,填充毛细管柱,开管型毛细管柱,3,裂解气相色谱
5,简述什么是内标法,以及内标法计算的原理。
内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中,然后对含有内标物的样品进行色谱分析。
原理:
将已知量的内标样加入标准样品,制成混合标样,并配制一系列的已知浓度的工作标样。
混合标样中标样与内标样的摩尔比不变。
注入色谱柱,以(标样峰面积/内标样峰面积)为响应值。
根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系,即W=f×A,制成标准曲线。
将已知量的内标样加入未知样品,注入色谱柱,得到欲测组分的响应值。
根据已知的系数f,即可求出欲测组分的浓度。
6,毛细管电泳的种类有哪些?
分离的驱动力是什么?
毛细管电泳比高效液相色谱高效的原因是什么?
毛细管电泳CE,是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。
分类:
1,毛细管区带电泳CZE2,胶束电动毛细管色谱MECC,3,毛细管凝胶电泳CGE4,毛细管等速电泳CITP5,毛细管等电聚焦CIEF6,毛细管电动色谱PICEC。
毛细管电泳是以高压电场为驱动力。
细管电泳比高效液相色谱高效的原因:
(1)高效CE理论塔板数为几十万,而HPLC一般几千到几万;毛细管电泳中,使用空心毛细管柱,无涡流扩散项,毛细管内壁也不涂渍固定液,消除了组分在固定相与流动相间平衡所需的时间,传质阻抗项趋零,而高效液相色谱中存在两种影响因素,因而CE的柱效高于HPLC。
(2)快速CE一般在十几分钟内完成分离;(3)微量CE进样所需的样品体积为nL级,仅为HPLC的几百分之一(4)多模式可根据需要选用不同的分离模式且仅需一台仪器;(5)经济实验消耗不过几毫升缓冲溶液,维持费用很低;(6)自动CE是目前自动化程度较高的分离方法
7,常用的手性固定相有哪些?
并简述其各自的原理
手性固定相是通过物理吸附或者化学键合的方法把手性化合物键合到固相载体上,由于样品中的对映体与键合的手性分子形成非对映异构体络合物的结合能力的差异而达到拆分目的。
手性固定相可以根据其化学类型分类为:
(1)Pirkle型(刷型)CSP:
具有确定的化学结构,①被分离溶质与CSP芳环的π-受体和π-授体之间的π-π作用;②CSP上的仲胺、羰基基团与溶质的酸性质子、羟基、氨基之间的氢键作用;③偶极-偶极作用;④大体积非极性基团靠近CSP手性中心而产生的空间立体效应。
(2)配体交换型CSP:
利用配体交换的分离机制而制成的,一个金属离子可结合一个配体分子和一个对映体溶质分子,形成可逆的非对映体复合物,以达到分离对映体的目的。
主要用于拆分氨基酸,(3)蛋白质类CSP:
由L-氨基酸组成的高分子聚合物,具有天然的手性选择性质,其具有大量不同的可与样品分子结合的部位,固定相与疏水性溶质之间发生较强的疏水作用。
对酸类、胺类药物的拆分较好。
(4)冠醚类CSP:
冠醚是具有一定大小空腔的大环聚醚化合物,和一定的金属离子形成包容性络合物,手性试剂与其中的金属离子相互作用,从而使对映体得到拆分。
溶质分子与手性冠醚环腔形成主客体络合物的稳定常数不同。
冠醚的手性“臂障"越大,其手性识别能力越高。
(5)环糊精类CSP:
环糊精的手性识别主要来自环内腔对芳烃或脂肪烃类侧链的包容作用,以及环外壳上的羟基与药物对映体分子发生氢键缔合作用。
8,手性高效液相色谱法的分类有哪些?
并简述其各自的原理
1)间接法即衍生化试剂法(CDR)采用非手性固定相将光活性试剂SE引入溶质分子内,对映体混合物以手性试剂SA作柱前衍生,形成一非对映异构体对,然后以常规的固定相分离
2)直接法a.手性固定相法(CSP)利用手性固定相与对映体消旋物相互作用,其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物,使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同,从而得到分离。
b.手性流动相添加剂法(CMP)将手性试剂添加到流动相中,利用手性试剂与药物消旋物中各对映体结合的稳定常数不同,以及药物与结合物在固定相上分配的差异,实现对映体的分离。
9,简述药物分析试验方法学验证的内容及其具体含义,表示手法等.
目的:
证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求。
验证内容有:
(一)准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,用百分回收率表示。
数据要求:
规定的范围内,至少用9次测定结果评价,如制备三个不同浓度样品各测三次。
RSD≤2℅
(二)精密度是指在规定条件下,同一个均匀样品,经多次取样测定所得结果之间的接近程度。
用偏差(d)、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)表示。
(三)专属性,指有其他成分(杂质、降解物、辅料等)可能存在情况下,采用的方法能准确测定出被测物的特性,能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。
(四)检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。
是限度试验参数,无需定量测定。
常用%、ppm、ppb表示。
常用的方法:
1.非仪器分析目视法2.信噪比法(五)定量限指样品中被测物能被定量测定的最低量,结果应具有一定准确度和精密度。
常用%、ppm、ppb表示(六)线性在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。
(七)范围指达到一定精密度、准确度和线性的条件下,测试方法适用的高低限浓度或量的区间。
(八)耐用性指测定条件稍有变动时,结果不受影响的承受程度,为常规检验提供依据。
是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。
10,简述质量标准制订的基础,原则,以及起草说明的原则。
药品(质量)标准是国家对药品质量、规格及检验方法所作的技术规定,是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。
我国现行的药品标准分为:
国家药典(中国药典)、局标准(国家药品监督局药品标准)。
药品质量标准制订的基础:
⑴文献资料查阅及整理;⑵对有关研究资料(化学、工艺、辅料等)的了解。
原则:
1)安全有效性:
药品质量的优劣,主要表现为安全、有效,药物的毒副反应、生物利用度、晶型等要着重研究。
2)先进性:
采用较先进的选择性强、灵敏度高的方法;如果研制的药物国外已有标准,那么国内的标准应尽可能达到或超过国外的标准。
3)针对性:
从生产工艺、流通、使用各环节了解影响药品质量的因素,针对药物本身的特点,做到安全有效、技术先进、经济合理。
4)规范性:
要按照SFDA制订的基本原则、基本要求和一般的研究规则进行。
坚持质量第一,充分体现“安全有效、技术先进、经济合理、不断完善”的原则,使标准能起到提高药品质量、保证择优发展和促进对外贸易的作用。
起草说明的原则:
1)原料药质量标准的起草说明应包括:
①概况——说明本品的临床用途,②生产工艺——用化学反应式表明合成路线,说明精制方法及可能引入的杂质。
③标准制订的意见或理由——按标准内容依次说明。
④与国外药典或原标准进行对比,并对本标准的水平进行评价。
⑤起草单位及复核单位对本标准的意见⑥列出主要参考文献。
2)新增制剂标准的起草说明还应包括:
①处方——列出附加剂的名称和用量。
②制法——列出简要的制备方法。
③标准制订的意见和理由——除与原料药要求相同外,还应有对制剂有效期建议的说明。
3)上版药典已收载品种的修订说明:
对修订部分分别说明①对药典附录方法有实质性修改的项目,如崩解时限法,栓剂,气雾剂等,应说明照新附录对产品考核结果,并列出具体数据。
②对原标准的检验方法进行修改的项目或新增的检验项目,要说明增修订理由,方法来源,并写出产品的检验数据。
含量测定方法的修改要附有专题研究材料。
③对原标准限度的修订,要说明理由并列表说明产品的检验数据及与国外药典本项目的比较,对不修订部分,要写出综合材料说明不修订的理由。
4)其他:
应阐明曾经做过的有关实验,包括不成熟的、尚待完善的或失败的,暂未或不能受灾与正文的鉴定方法的理由,并提供相关的试验资料。
11,简述色谱适用性研究包括哪些内容?
检查色谱系统在实验条件影响下是否符合要求,色谱系统适用性试验通常包括:
理论踏板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。
理论塔板数:
不得低于各品种项下规定的最小理论塔板数,分离度:
除另有规定外,分离度应大于1.5,重复性:
取各品种项下对照品2连续进样5次,除另有规定外,其峰面积测量值的相对标准偏差不大于2.0%,拖尾因子:
除另有规定外,拖尾因子应在0.95~1.05之间。
12,ELISA检测试剂盒的技术和应用
是酶免疫测定技术中应用最广的技术。
其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
ELISA检测试剂盒广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。
用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体。
在动物检疫方面,ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。
13,什么是指纹图谱?
为什么要用指纹图谱的方法评价中药质量?
指纹图谱有何优缺点?
可能存在哪些问题?
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后,采用一定的分析手段,得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。
中药指纹图谱是一种综合的,可量化的鉴定手段,它是建立在中药化学成分系统研究的基础上,主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。
“整体性”和“模糊性”为其显著特点。
中药及其制剂均为多组分复杂体系,因此评价其质量应采用与之相适应的,能提供丰富鉴别信息的检测方法,但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题,建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量,进而对药品质量进行整体描述和评价。
这也正好符合中医药整体学说。
在此基础上,如果进一步开展谱效学研究,可使中药质量与其药效真正结合起来,有助于阐明中药作用机理。
总之,中药指纹图谱的研究和建立,对于提高中药质量,促进中药现代化具有重要意义。
优点是:
中药指纹图谱是一种综合的,可量化的鉴定手段,它是建立在中药化学成分,系统研究的基础上,主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。
“整体性”和“模糊性”为其显著特点。
1,从整体质量来说,有利鉴别中药材真伪;2,有助分辨药材不同的部位及成分区别;3,有助跟踪中药成分的变化及稳定性的改变4,有助监察中药的生产工艺;5,有助评价每一批药材的质量稳定性。
缺点:
主要有四点:
一是中药来源的混乱无序,指纹图谱研究首先需要解决这个源头问题。
因此在制定标准指纹图谱时,所选取的药材来源及成药的工艺应相对稳定,有足够的代表性,同时保证质量,才能保持标准指纹图谱的先进性和代表性,二是新技术的应用还不够前沿,对于中药这样一个复杂体系,需要解决分离与检测两大问题,而采用单一分离模式勉为其难,采用传统的检测手段或单一联用技术也易丢失大量信息;三是由于实验室条件,仪器设备的不同造成指纹图谱差异,从药材提取分离到分析检测全过程的标准化、规范化程度不够,影响实验室之间的重现性,难以推广。
四是对大量信息的化学计量处理方法还不够完善,指纹图谱的特征性不够明确具体,指纹图谱与药理作用的相关性缺乏研究。
14,中药材鉴别的方法有哪些?
原理?
中药为什么要炮制?
第一,对药材的外观性状的鉴别。
一、看外观,1、看药材的表面。
不同种类的药材由于用药部位的不同,其外形特征会有所差异。
2、看颜色。
药材颜色的不同或变化,不仅与它的品种和本身的质量有关,不适当的加工和储藏方法也会直接影响药材的色泽,3、看断面。
很多药材的断面都具有明显的特征,而这些特征就是药材内部构造的直接体现,二、手摸。
用手感受药材的软硬、轻重,疏松还是致密,光滑还是粘腻,细致还是粗糙,以此鉴别药材的好坏。
三、口尝。
四、鼻闻。
五、水试和火试。
第二,利用显微镜来观察药材的组织结构,细胞形状,以及内含物的特征,用以鉴定中药的真伪和纯度。
第三,理化鉴定,鉴定中药的有效成分的有无和含量多少,鉴定中药的真实性,纯度和品质等。
炮制目的:
(1)消除或降低药物的毒性
(2)为了矫臭、矫味,便于服用。
(3)提高和改变药物的疗效。
(4)便于贮藏。
15,简述分子印迹技术的原理及其在色谱分析中的应用。
分子印迹聚合物是通过分子印迹技术合成的对特定目标分子(模板分子)及其结构类似物具有特异性识别和选择性吸附的聚合物,其基本原理为模板分子和功能单体先通过共价键或非共价键作用结合,形成主客体配合物;然后加入交联剂使主客体配合物与交联剂发生自由基共聚,从而得到在模板分子周围形成高度交联的刚性聚合物;最后用适当的溶剂将聚合物中模板分子洗脱。
所得的聚合物具有对模板分子在功能基团、分子尺寸、空间结构具有记忆功能的结合位点,可以根据预定的选择性和高度识别性能进行分子识别。
应用:
1,手性化合物的拆,2,结构类似物的分,3,实际样品的分离分析等
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