不同受精方式对单原核胚胎发育潜能的影响.docx
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不同受精方式对单原核胚胎发育潜能的影响
不同受精方式对单原核胚胎发育潜能的影响
【第一作者简介】王珊珊(1986-),女,实习研究员、硕士,主要从事生殖医学研究。
【摘要】目的:
探讨常规体外受精(IVF)及卵胞浆内单精子注射(ICSI)后单原核胚胎的发育潜能,为提高卵子利用率探寻可行的方法。
方法:
回顾性分析3614个IVF周期和1306个ICSI周期的患者资料。
按照年龄分为35岁3组,分析不同授精方式下女方年龄对单原核受精卵出现的影响,并进一步研究35岁以下患者中,不同授精方式对单原核胚胎发育潜能的影响。
结果:
在IVF和ICSI周期中,>35岁组的单原核受精卵形成率显著高于<30岁组(P<0?
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05)。
35岁以下女性患者中,IVF组单原核胚胎的囊胚形成率及优质囊胚形成率显著高于ICSI组(28?
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97%vs12?
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12%,11?
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90%vs0),并具有统计学差异(P<0?
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05)。
结论:
女方年龄、授精方式可能与异常受精的发生有关。
在行辅助生殖技术(ART)时应综合考虑这些因素,为临床提高卵子利用率提供新思路。
【关键词】体外受精;卵胞浆内单精子注射;单原核
InfluenceofdifferentfertilizationmodesonthedevelopmentalpotentialofmonopronucleusembryosWANGShanshan,ZENGHuiming,ZHANGNingyuan,SUNHaixiang△.ReproductiveMedicineCenter,Drum-TowerHospitalAffiliatedtoNanjingUniversityMedicalSchool,Nanjing210008,China
【Abstract】Objectives:
Toinvestigatethedevelopmentalpotentialofmonopronucleusembryosinin-vitrofertilization(IVF)andintracytoplasmicsperminjection(ICSI)toexploreafeasibleapproachforimprovingtheutilizationrateofoocytes.Method:
Dataof3614patientsinIVFcyclesand1306patientsinICSIcycleswereretrospectivelyanalyzedrespectively,anddividedintothreegroupsaccordingtoageofpatients,35yearsgroup.Theimpactofageonmonopronucleuszygoteswasanalyzedindifferentfertilizationmodesandtheinfluenceofdifferentfertilizationmodesonthedevelopmentalpotentialofmonopronucleuszygoteswasfurtherstudiedingroupofpatientsunder35yearsold.Results:
Theformationrateofmonopronucleuszygotesforthegroup>35yearswassubstantiallyhigherthanthatingroup<30years(P<0?
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05)inIVFandICSIcycles.Amongfemalepatientsunder35yearsold,theblastocystrateandhigh-qualityblastocystrateofembryosfrommonopronucleuszygotesintheIVFgroupweresubstantiallyhigherthantheICSIgroup(28?
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97%vs12?
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12%,11?
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90%vs0),withstatisticallysignificantdifferences(P<0?
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05).Conclusion:
Theageoffemalepatientsandfertilizationmodesmayberelatedtotheoccurrenceofabnormalfertilization.Multiplefactorsshouldbeconsideredduringassistedreproductivetechnology(ART),toprovidenewideasforimprovingtheutilizationofoocytes.
【Keywords】Invitrofertilization;Intracytoplasmicsperminjection;Monopronuclear
【中图分类号】R329.1【文献标志码】A
在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)过程中,卵子在常规体外受精(invitrofertilization,IVF)或卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmicsperminjection,ICSI)后16~18h,显微镜下观察到两个原核(2PN),且在卵周隙内可见2个极体,该受精卵则被判断为正常受精,而出现单原核(monopronucleuszygotes,1PN)及多原核(≥3PN)则视为异常受精。
有研究报道,多核胚胎不仅使胚胎的着床失败率和自然流产率升高,还可导致葡萄胎的产生和染色体异常儿的出生,不能用于移植\[1\]。
对于单原核胚胎,是否有可利用价值,目前尚无定论。
因此,临床上通常选择正常受精而发育形成的优质胚胎进行移植。
细胞遗传学研究表明,发生卵裂的单原核卵子80%为二倍体,12%为单倍体,另有7%为三倍体\[2\]。
除了遗传学因素外,不同授精方式在卵裂的过程中也起着非常重要的影响,导致1PN胚胎的染色体组成不同。
YanJ等\[3\]研究显示,常规IVF周期中约54?
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35%的1PN胚胎为二倍体,而ICSI周期中只有约31?
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51%的1PN胚胎为二倍体,提示IVF周期中1PN受精卵发育形成的胚胎有一定可利用价值。
本研究通过回顾性分析4920个周期的患者资料,探讨不同年龄及不同授精方式下,单原核胚胎的发育潜能,为进一步提高卵子及胚胎的可利用率提供指导。
1材料与方法
1?
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1研究对象
选择2012年1月至2013年8月在南京大学附属鼓楼医院生殖医学中心治疗的3614个IVF周期和1306个ICSI周期的患者资料进行回顾性分析。
排除完全受精失败、部分受精失败及卵子发育异常的患者。
年龄分组以30岁和35岁为界点分为3组。
由于35岁以上女性的卵母细胞质量明显下降,所以仅研究年龄小于35岁患者的1PN胚胎的发育潜能。
其中IVF组1159枚1PN胚胎,ICSI组156枚1PN胚胎。
1?
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2人卵母细胞的采集与处理
按常规方案超促排卵,卵泡生长发育充分后,在B超介导下经阴道穿刺取卵。
获取的卵丘-卵母细胞复合物(OCCs)经Gamete(Vitrolife,Sweden)洗涤后,转入IVF(Vitrolife,Sweden)序贯培养微滴中,于37℃/6%CO2培养箱行3h的受精前培养。
1?
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3受精与卵裂观察
1?
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3?
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1IVF采用短时受精方法,获卵3h后按10000条精子/卵母细胞的比例加精。
精卵共孵育4h后机械剥离颗粒细胞,转入G1(Vitrolife,Sweden)序贯培养液中培养。
通过观察第二极体是否形成判断受精,16~18h后将培养皿置于倒置显微镜下观察原核。
1?
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3?
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2ICSI孵育3h后的卵母细胞经透明质酸酶(Vitrolife,Sweden)消化后机械剥离颗粒细胞。
将卵子置于IVF培养液预培养1h后,挑选形态相对正常的精子对成熟卵母细胞行ICSI术。
注射后的卵母细胞转入G1培养液中培养,16~18h后将培养皿置于倒置显微镜下观察原核,判断是否受精。
若出现单个原核,则为1PN;行IVF或ICSI术后,正常受精卵出现2个原核(2PN)。
受精后分别于44h及68h在倒置显微镜下进行胚胎质量评估
1?
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4囊胚培养及观察
将Day3剩余的分裂期胚胎转入囊胚培养液G2(Vitrolife,Sweden)微滴中,继续培养至Day6,观察囊胚发育情况。
根据Garnder囊胚分级法对囊胚进行分级\[4\]。
首先,根据囊胚的扩张及孵出程度将囊胚分成1~6级:
1级,早期囊胚,囊胚腔体积囊胚总体积的1/2;3级,完全扩张囊胚,囊胚腔占据整个囊胚;4级,扩张后囊胚,囊胚腔体积较早期囊胚明显扩大,透明带变薄;5级,正在孵化的囊胚,囊胚正在从透明带破裂口孵出;6级,孵化出的囊胚,囊胚完全从透明带中脱出。
3~6级囊胚需要对滋养外胚层细胞(trophectoderm,TE)和内细胞团(innercellmass,ICM)进行进一步评估。
TE评分:
A级,细胞数目多,囊胚四周均有细胞分布;B级,细胞数目较少,上皮细胞较松散;C级,细胞数目极少。
ICM评分:
A级,细胞数目多,结合紧密;B级,细胞数目较少,结合较松散;C级,细胞数目极少。
本中心将评分≥3BC的囊胚定为优质囊胚。
1?
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5统计学分析
结果以均数±标准差(±s)或率(%)表示,采用SPSS17?
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0软件对数据进行统计分析。
率的比较采用χ2检验,多组间结果比较采用单因素方差分析(One-WayANOVA),P<0?
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05为差异有统计学意义。
2结果
2?
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1女方年龄对ICSI胚胎单原核形成的影响
在ICSI周期中,女方不同年龄组间1PN形成率呈递增趋势,>35岁女性患者的1PN形成率为2?
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75%,显著高于<30岁组(1?
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59%),且有统计学差异(P<0?
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05)。
见表1。
表1ICSI周期女方年龄对1PN形成的影响年龄(周岁)获卵数1PN形成率(%)3511832.75±0.12*P35岁组相比
2?
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2女方年龄对IVF胚胎单原核形成的影响
IVF短时受精后,女方不同年龄组间1PN形成率呈递增趋势,并且>35岁女性患者的1PN形成率最高,为4?
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24%,显著高于<30岁组,两组间有统计学差异(P<0?
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05)。
见表2。
表2IVF周期女方年龄对1PN形成的影响年龄(周岁)获卵数1PN形成率(%)3553074.24±0.12*P35岁组相比
2?
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3授精方式对单原核胚胎发育潜能的影响
35岁以下的女性患者中,将单原核胚胎按授精方式的不同进行比较,IVF组的1PN卵裂率和优质胚胎率高于ICSI组,但无统计学差异。
在1PN囊胚形成率及优质囊胚形成率中,IVF组显著高于ICSI组,且具有统计学差异(P<0?
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05)。
见表3。
表3IVF周期与ICSI周期中单原核胚胎发育潜能的比较IVFICSIP值患者年龄28.8±3.228.25±3.29>0.051PN卵数1159156卵裂数1051135卵裂率(%)90.68(1051/1159)86.54(135/156)>0.0
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