中药五类新药赤芍总苷制剂临床前药学实验研究.docx
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中药五类新药赤芍总苷制剂临床前药学实验研究
中药五类新药赤芍总苷制剂临床前药学实验研究
班级:
2013级药物制剂
【小组成员及分工】
小组成员:
组长:
xx
副组长:
xx
组员:
xx
任务安排:
xx:
项目概述(中药五类新药、赤芍、赤芍总苷)
xx:
原材料检查及鉴别标准、资料整理
xx:
赤芍总苷的提取工艺及技术方案、资料整理
xx:
赤芍总苷的纯化工艺及技术方案
xx:
干燥工艺
xx:
建立质量标准
1、【项目概述】
1.1中药五类新药概述
1.1.1中药新药的定义
是指未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂。
也指改变国内已上市销售药品的剂型,但不改变给药途径的制剂。
按照国家《药品注册管理办法》的规定,中药新药注册分为9类。
①未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效成分及其制剂。
②新发现的药材及其制剂。
③新的中药材代用品。
④药材新的药用部位及其制剂。
⑤未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂。
⑥未在国内上市销售的中药、天然药物复方制剂。
⑦改变国内已上市销售中药、天然药物给药途径的制剂。
⑧改变国内已上市销售中药、天然药物剂型的制剂。
⑨已有国家标准的中药、天然药物。
1.1.2五类新药的分类
第一类:
中药材的人工制成品;新发现的中药材及其制剂;中药材中提取的有效成分及其制剂。
第二类:
中药注射剂;中药材新的药用部位及其制剂;中药材、天然药物中提取的有效部位及其制剂;中药材以人工方法在体内的制取物及其制剂。
第三类:
新的中药制剂;以中药为主的中西药复方制剂;从国外引种或引进养殖的习用进口药材及其制剂。
第四类:
改变剂型或改变给药途径的药品;国内异地引种和野生变家养的动植物药材。
第五类:
增加新主治病证的药品。
1.1.3.提交的资料内容:
1.名称及命名依据(包括中文名、汉语拼音、拉丁名)。
选题的目的与依据,文献古籍、经验或现代有关该品种研究等情况的综述。
2.中药材的来源及其鉴定依据,主要产地,药用部位。
3.生态环境、生长特征、栽培或培殖技术,产地加工和炮制方法等资料。
4.药材性状、组织特征、理化性质等研究资料(方法、数据、附图和结论)及文献资料。
5.根据中医药理论和经验提供的有关依据。
6.与功能主治有关的主要药效学试验资料及文献资料。
7.一般药理研究的试验资料及文献资料。
8.动物急性毒性试验资料及文献资料。
9.动物长期毒性试验资料及文献资料。
10.致突变试验资料及文献资料。
11.致癌试验资料及文献资料。
12.生殖毒性试验资料及文献资料。
13.临床研究用药材的质量标准草案及起草说明。
14.药材的初步稳定性试验资料及文献资料。
15.按质量标准有代表性三批样品及其检验报告书,并提供原动、植、矿物标本,引种(养)药材还需同时提供原产地的动、植、矿物标本,引种(养)药材还需同时提供原产地的动、植、矿物标本各二份(包括带花、果、种子等鉴定特征)。
每批样品数量应为全检需要量的三倍。
16.拟进行临床研究计划及供临床医师参阅的临床前药理、毒理研究结论综述。
17.药材的质量标准及起草说明,并提供对照品及有关资料(留作初审单位审核用)。
18.药材的稳定性试验资料、结论和有关文献资料。
19.按质量标准有代表性样品至少三批及其检验报告书,并提供原动、植、矿物及引种(养)药材原产地的动、植、矿物标本各二份(包括带花、果、种子等鉴定特征)。
每批样品数量至少应为全检需要量的三倍。
20.临床研究负责单位整理的临床研究总结资料,并附各临床研究单位的临床报告等资料。
21.药材包装材料的性能、规格的设计样稿和说明。
包装上必须附有品名、贮藏、质量合格标志、产地、调出单位和日期等内容。
1.2赤芍概述
本品为毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPalL或川赤PaeoniaveitchiiLynch的干燥根。
为类圆形薄片或斜片,直径0.5~3cm,厚0.3~0.5cm。
表面粉白色或粉红色,中心有放射状纹理,皮部窄,有的有裂隙。
周边灰褐色。
质硬而脆。
味微苦、酸涩。
具有清热凉血、散瘀止痛的功效,其主要有效成分为芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药花苷等单萜苷类化合物,总称赤芍总苷,可改善机体微循环,抑制血小板凝聚,抗血栓形成,具有广泛的药理活性[1~3],是一种可用于保健食品的中药。
巅春、秋二季采控,除去根茎、须根及泥沙,晒干。
苦,微寒。
归肝经。
有清热凉血,活血祛瘀的功效。
赤芍是著名野生地道中药材,应用历史悠久,用量较大、用途广泛且需求较为刚性,每年都有相当数量的出口。
(主治功效):
清热凉血;活血祛瘀。
主温毒发斑;吐血衄血;肠风下血;目赤肿痛;痈肿疮疡;闭经;痛经;崩带淋浊;瘀滞胁痛;疝瘕积聚;跌扑损伤。
用于温毒发斑,吐血衄血,目赤肿痛,肝郁胁痛,经闭痛经,症瘕腹痛,跌扑损伤,痈肿疮疡。
(作用):
①抗血栓形成作用;②抗血小板聚集作用;③降血脂和抗动脉硬化作用;④对心血管系统的影响;⑤抗肿瘤作用;⑥保肝作用。
1.3赤芍总苷概述
1.3.1赤芍总苷
赤芍中的化学成分主要有苷类成分,有赤芍苷(约3.5%—8%),苯甲酰芍药苷,芍药内酯苷,苯甲酰羟基赤芍苷,羟基赤芍苷,赤芍苷元,胡萝卜苷等苷,另外含有鞣质(约12.6%)、蔗糖、棕榈酸等。
赤芍药材所含丰富的苷类成分总称为赤芍总苷(TGP)。
按干燥品计算,含芍药苷不得少于40.0%,赤芍总苷为单萜苷类化合物,有一定水溶性及醇溶性,对热光酸及碱较敏感,长时间接触,常会引起氧化,重排及聚合反应,导致结构变化,因此在提取,分离及贮存萜类化合物时,应注意尽量避免这些因素,水煎煮会破坏芍药苷等成分。
赤芍总苷(TGP)为赤芍药材的主要活性部位。
体内实验表明,赤芍总苷可使实验性脑缺血模型小鼠的脑毛细血管通透性降低;增强断头小鼠神经细胞耐缺氧能力,显著降低脑耗氧量;改善脑缺血再灌注小鼠被动学习记忆能力,对脑缺血再灌注小鼠脑组织LDH的减少有一定抑制作用;抑制脑组织细胞膜质过氧化物MDA的产生,减少NO自由基的进一步生成,并能显著提高脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。
体外实验表明,一定浓度的赤芍总苷对Caf,kcl和NMDA诱导的不同类型大脑皮层神经细胞钙超载损伤均有显著保护作用。
此外,赤芍总苷还具有免疫增强作用,通过重建机体免疫功能而发挥抗肿瘤作用;对药物所致小鼠学习记忆障碍有明显的改善作用,同时对D-半乳糖衰老小鼠学习记忆有促进作用。
在药理学上,赤芍总苷对血液具有抗凝血、抗血栓以及抗内毒素和改善微循环的作用。
并且赤芍总苷对缺血性损伤如心肌缺血同样具有保护作用,正是这样的良好使用疗效,我们需要对赤芍总苷进行更多的研究,来保证临床的使用疗效。
巅
1.3.2提取研究现状巅
目前报道的赤芍总苷提取工艺文献中,多采用正交试验设计法。
即分别称取赤芍药材若干,以不同的提取液(水、乙醇)分别按正交试验设计表试验,滤过,合并滤液,量取体积,即得正交试验各试验的提取液。
巅
1.3.3纯化研究现状巅
目前报道的赤芍总苷纯化工艺文献中,多采用正丁醇萃取法和大孔树脂吸附法。
即将提取过程中,包括糖类、脂类等许多杂质在内的浸膏提取液,补充蒸馏水至药材的2倍量,作为待纯化样品溶液。
巅
纯化方法1(正丁醇萃取法):
取上述待纯化样品溶液200ml,取等量石油醚萃取3次,除去石油醚层,然后用水饱和后的正丁醇萃取3次,收集正丁醇层,再用200ml蒸馏水洗1次,弃去水层,减压回收正丁醇,所得浸膏于真空干燥器中干燥。
巅
纯化方法2(大孔树脂吸附法):
D101大孔吸附树脂100g,经95%乙醇浸泡12h,充分溶胀后装柱,蒸馏水洗至无醇味,备用。
上述待纯化样品溶液取200ml,上树脂柱,3倍量蒸馏水洗,再用3倍量的乙醇洗脱,收集20%洗脱组分,减压回收乙醇,剩余浸膏于真空干燥器中干燥。
巅
赤芍中所含丰富的苷类成分总称赤芍总苷,为赤芍的主要活性部位,其中以芍药苷的含量最高,选择芍药苷作为含量测定的指标成分。
【实验目的】
1.通过赤芍总苷提取纯化工艺与质量控制方案的设计和研究,掌握大孔吸附树脂用于苷类成分纯化的主要影响因素和工艺参数考察的方法,掌握中药五类新药原料的质量控制方法及技术要求。
2.通过设计完成中药五类新药赤芍总苷制剂的临床前药学实验研究,掌握中药新药研究程序和中药新药申报资料的技术要求
3.熟悉我国中药新药分类、申报资料要求以及新药审批的基本程序
2.实验设计方案
2.1原材料的质量检查
2.1.1.药典对药材的检查
[性状]本品呈圆柱形,稍弯曲,长5〜40cm,直径0.5〜3cm表面棕褐色,粗糙,
有纵沟和皱纹,并有须根痕和横长的皮孔样突起,有的外皮易脱落。
质硬而脆,易折断,断面粉白色或粉红色,皮部窄,木部放射状紋理明显,有的有裂隙。
气微香,味微苦、酸涩。
2.1.2[鉴别]
(1)本品横切面:
木栓层为数列棕色细胞。
栓内层薄壁细胞切向延长。
韧皮部较窄。
形成层成环木质部射线较寬,导管群作放射状排列,导管旁有木纤維。
薄壁细胞含草酸钙鑛晶,并含淀粉粒。
(2)取本品粉末0.5g,加乙醇10ml,振摇5分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2mL使溶解,作为供试品溶液。
另取芍药苷对照品,加乙醇制成每lmL含2mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述两种溶液各知4µl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:
5:
10:
0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点。
2.2赤芍总苷提取工艺研究
2.2.1提取工艺
方法:
乙醇-水回流提取法
称取赤芍药材9份,每份l0g,以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间为考察因素,以芍药苷含量为指标,加热回流提取2次,合并每次所得提取液,回收乙醇浓缩、干燥,依2.2.1方法测定提取物的芍药苷含量。
提取因素水平表(见表2),正交试验结果(见表3)以及芍药苷含量正交试验方差分析表(见表4)[1]。
由方差分析可知,以药材中芍药苷含量为指标,因素A与因素C对提取结果有显著性影响,故筛选工艺为A3B3C2或A3B2C2,即加入量为药材量的12倍或lO倍80%乙醇,每次1h,提取2次,提取液减压浓缩至干燥,称重,出膏率为37%。
2.2.2确定赤芍总苷提取工艺条件
以80%乙醇为提取溶媒,12倍量,每次回流提取1h,共提取2次,为下一步大孔吸附树脂分离纯化赤芍药材奠定基础。
2.3赤芍总苷的纯化工艺
2.3.1 方法
大孔吸附树脂法
2.3.2大孔吸附树脂型号的筛选:
首先需要选择适宜的大孔吸附树脂,以保证大孔吸附树脂对待分离组分的高选择性和高吸附性,从而满足分离纯化的要求,提高分离纯化的效率。
而型号为D101和AB-8具有很大的适用范围,本实验将探究两种大孔吸附树脂对赤芍总苷的纯化程度[3]。
2.3.3 动态吸附试验
本实验以芍药苷吸附解析率和残留液中芍药苷含量为评价指标,取AB-8型和D-101型大孔吸附树脂各20mL,装于树脂柱中(径高比为1∶8),取样液40mL上样。
先用3BV蒸馏水,再用5BV20%乙醇洗脱,合并乙醇洗脱液,测定,结果见表5。
由表5可知,从芍药苷吸附解析率和残留液中芍药苷含量综合考虑,优选AB-8型树脂纯化赤芍提取物。
2.3.4 泄漏曲线考察
取AB-8型大孔吸附树脂20mL,装于树脂柱中(径高比1∶8),取样品液60mL上样,吸附流速为1.0mL*min-1。
收集流出液,每5mL为一流分。
按2.2.1方法测定,绘制泄漏曲线,见下图。
由图可知,上样体积为95mL时,芍药苷开始泄露,因此上样体积应小于95ml。
2.3.5上样浓度考察
取AB-8型大孔吸附树脂3份,每份20mL,装柱(径高比为1∶8),分别取含生药浓度为0.1g*mL-1、0.2g*mL-1、0.3g*mL-1样品液上样,吸附流速为1.0mL*min-1。
然后用3BV水洗脱,再以5BV20%乙醇洗脱,按2.2.1方法测定醇洗脱液中芍药苷含量,结果见下表。
由表可知,上样浓度为0.1g*mL-1时芍药苷洗脱率最高。
芍药苷是赤芍主要有效成分之一,选其为指标评价赤芍的提取和优化工艺较为恰当。
2.3.6最佳大孔树脂纯化工艺为:
赤芍总苷乙醇提取浓缩液(浓度0.2g*mL-1),过AB-8大孔吸附树脂柱(药材:
树脂比1∶2,树脂径高比1:
8),吸附流速1mL*min-1,3BV蒸馏水洗涤,5BV20%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压干燥[2]。
2.4干燥工艺研究
收集经大孔树脂纯化后的川赤芍提取物,采用喷雾干燥的方法制备川赤芍提取物浸膏粉。
对浸膏相对密度、浸膏温度,以及进口、出口热风温度等因素进行考察,筛选最佳条件。
2.4.1干燥工艺的研究
喷雾干燥与传统干燥方法相比,具有干燥速度物料受热时间短,生产工序简单,产品流动性大,质地均匀,质量可控性强,适用于工业化大生产等优点。
本工艺采用喷雾干燥制备川赤芍浸膏粉。
影响喷雾干燥的主要因素有清膏的相对密度、进风温度、出风温度等。
喷雾干燥工艺浸膏的相对密度对喷雾干燥效果有较大影响。
密度过高,易粘结并堵塞喷头,太低则操作费时且粘度不够,影响成品率。
进口、出口热风温度控制时本法的关键条件之一。
如果进口热风温度过高,易造成喷雾药滴未与辅料粉体接触便被干燥成粉而不能凝聚成粒反之,若进口热风温度过低,则易造成凝聚颗粒难以及时干燥而结块成团。
为使干燥工艺更合理,须对这些因素进行考察。
具体参数见表26,结果见表27。
实验结果显示,条件2下制得的浸膏粉水分最低,芍药苷纯度最高,且浸膏粉收率最高。
根据以上研究,确定喷雾干燥工序较佳条件为将药液浓缩至相对密度1.15的清膏,喷雾干燥,清膏温度50℃,进口、出口热风温度分别为140℃、90℃。
2.5质量标准研究
【药典】
2.5.1色谱条件与系统适用性试验
以十八焼基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.05moi/L磷酸二氢钾溶液(40:
65)为流动相;检测波长为230nm。
理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000.
2.5.2对照品溶液的制备
取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液,即得。
2.5.3供试品溶液的制备
取本品粗粉约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加人甲醇25ml,称定重量,浸沲4小时,超声处理20分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.5.4测定法
分别精密吸取对照品溶液与供诫品溶液各10μl,注人液相色谱仪,测定,即得。
本品含芍药苷(C23H28011)不得少于1.8%[6]。
【质量标准研究试验】
2.5.5赤芍总苷的制备
取干燥后的赤芍总苷。
分为3批赤芍总苷样品。
2.5.6赤芍总苷样品供试液制备
精密称定赤芍总苷3批样品各约60mg,置三个25ml容量瓶中,分别加20%乙醇溶解,稀释至刻度,摇匀,密塞,即得。
2.5.7芍药苷对照品溶液配制
精密称取经五氧化二磷减压干燥36h的芍药苷对照品17.6mg,置10mL容量瓶中,加20%乙醇溶解,稀释至刻度,摇匀,密塞即得。
吸取1mL置微量试剂瓶中,供色谱鉴别。
2.5.8高效液相色谱(HPLC)法检测芍药苷实验
①色谱条件 S-GelC18,5μm色谱柱;流动相:
甲醇-水(50:
50);柱温40℃;流速0.8ml*min-1;检测波长230nm(根据紫外光谱图设定);进样量均为20μl。
②系统适用性试验 按照上述色谱条件,吸取对照品溶液(200.0mg*L-1)、供试品溶液(约含芍药苷200.0mg*L-1),分别注入液相色谱仪,结果见下图。
实验结果可见,赤芍总苷中芍药苷色谱峰保留时间与芍药苷对照品相同,tR=5.65±0.25min,峰形一致,理论塔板数均大于5000。
赤芍总苷中芍药苷色谱峰与相邻组分分离度R=3.287。
芍药苷HPLC色谱图
a.对照品;b.供试品
③线性关系考察
将芍药苷对照品溶液(浓度为0.704g*L-1),稀释成浓度的系列70.4,140.8,211.2,281.6,352.0mh*L-1对照品溶液,按上述色谱条件,分别进样20μl,以峰面积A为纵坐标,对照品浓度C为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为A=19108C+56994,r=0.9999。
结果表明芍药苷浓度在70.4~352.0mg*L-1范围内,与峰面积A呈良好线性关系。
④精密度试验
将高、中、低三种浓度芍药苷对照品溶液(浓度为352.0,211.2,70.4mg*L-1)分别连续进样5次,每次进样20μl,测得峰面积平均值分别为6447437.8,3980173.0,1308837.4,
RSD分别为0.52%,0.63%,0.73%。
⑤稳定性试验
取赤芍总苷供试品溶液(批号为011108)分别按上述色谱条件于0,2,4,8,12,24h进样,测得峰面积平均值为3241872.0,RSD=0.98%。
结果表明,供试品溶液在24h内稳定。
⑥重复性实验
精密量取赤芍总苷样品溶液(约含芍药苷2g*L-1)2ml,分别置5只10ml容量瓶中,稀释至刻度,分别进样20μl,得峰面积平均值3241872.0,RSD为0.98%。
⑦回收率实验
精密量取芍药苷对照品溶液(约70.0mg*L-1)0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5ml,分别置10ml容量瓶中,各精密加入1mlTPG样品溶液(约含芍药苷2g*L-1),加溶剂稀释至刻度,分别进样20μl,得峰面积A,以回归方程,通过相减消除法,计算回收率,结果见下表。
回收率实验结果
⑧样品测定
精密称定赤芍总苷样品适量,溶解后稀释为含芍药苷约0.2g*L-1的TPG样品溶液。
吸取TPG样品溶液,精密进样20μl,得峰面积A,测3次,求平均值,通过回归方程计算TPG中PAE含量,见下表。
样品测量结果(平均值)
结论:
本方法所建立的HPLC条件较好,确定以甲醇-水(50∶50)为流动相使得保留时间适中,理论塔板数高,重现性较好。
本方法可用以控制赤芍总苷质量[3-4]。
3.实验内容
3.1原材料的质量检查
(1)形状、气味、味道等。
(2)鉴别:
取本品粉末0.5g,加乙醇10ml,振摇5分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2mL使溶解,作为供试品溶液。
另取芍药苷对照品,加乙醇制成每lmL含2mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述两种溶液各知4µl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:
5:
10:
0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点。
3.2赤芍总苷的提取工艺
取赤芍粗粉100g,以80%乙醇为提取溶媒,12倍量,每次回流提取1h,共提取2次,再将提取液浓缩至无醇味。
3.3赤芍总苷的纯化工艺
赤芍总苷乙醇提取浓缩液,过AB-8大孔吸附树脂柱(药材:
树脂比1∶2,树脂径高比1:
8),吸附流速1mL*min-1,3BV蒸馏水洗涤,5BV20%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压干燥。
3.4干燥工艺
喷雾干燥工序较佳条件为将药液浓缩至相对密度1.15的清膏,喷雾干燥,清膏温度50℃,进口、出口热风温度分别为140℃、90℃。
3.5质量检查
[性状]形状、气味、味道等。
[鉴别]薄层色谱鉴别
①赤芍总苷样品供试液制备
取本品粉末0.5g,加乙醇10ml,振摇5分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇2mL使溶解,作供试液。
②芍药苷对照品溶液制备
另取芍药苷对照品,加乙醇制成每lmL含2mg的溶液,作为对照品溶液。
③薄层鉴别
吸取赤芍总苷样品供试液、芍药苷对照品溶液各4µl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:
5:
10:
0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点。
[含量测定]
方法:
按照高效液相色谱法测定,本品含芍药苷(C23H28O11)不得少于1.8%。
①测定条件的选择
以十八焼基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(40:
65)为流动相;检测波长为230nm。
理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000.
②对照品溶液的制备
取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,即得。
③供试品溶液的制备
取本品粗粉0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,浸泡4小时,超声处理20分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl,注人液相色谱仪,测定,即得。
[检查]
①水分取供试品2~5g,平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中,厚度不超过5mm;疏松供试品不超过10mm;精密称定,打开瓶盖在100~105℃干燥5小时,将瓶盖盖好,移置干燥器中,冷却30分钟,精密称定,再在上述温度干燥1小时,冷却,称重,至连续两次称重的差异不超过5mg为止。
根据减失的重量,计算供试品中含水量(%)。
不得过5.0%。
②重金属【炽灼残渣】取供试品1.0~2.0g或各品种项下规定的重量,置已炽灼至恒重的坩埚中,精密称定,缓缓炽灼至完全炭化,放冷至室温;除另有规定外,加硫酸0.5~1ml使湿润,低温加热至硫酸蒸气除尽后,在500~600℃炽灼使完全灰化,移置干燥器内,放冷至室温,精密称定后,再在500~600℃炽灼至恒重,即得。
【重金属】按炽灼残渣检查法进行炽灼处理,然后取遗留的残渣;加硝酸0.5m1,蒸干,至氧化氮蒸气除尽后(或取供试品一定量,缓缓炽灼至完全炭化,放冷,加硫酸0.5~1ml,使恰湿润,用低温加热至硫酸除尽后,加硝酸0.5ml,燕干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷,在500~600℃炽灼使完全灰化,放冷,加盐酸2ml,置水浴上蒸干后加水15ml,滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色,再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml,微热溶解后,移置纳氏比色管中,加水稀释成25ml,作为乙管;另取配制供试品溶液的试剂,置瓷皿中蒸干后,加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml,微热溶解后,移置纳氏比色管中,加标准铅溶液一定量,再用水稀释成25ml,作为甲管;再在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml,摇匀,放置2分钟,同置白纸上,自上向下透视,乙管中显出的颜色与甲管比较,不得更深。
4.仪器和试药
4.1仪器
高效液相色谱仪、真空泵、烘箱、旋转蒸发仪
4.2试药
80%乙醇、20%乙醇、芍药苷对照品、甲醇、乙醇、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:
5:
10:
0.2)、5%香草醛硫酸溶液、硫酸、硝酸、盐酸、氨试液、酚酞指示液、醋酸盐缓冲液、硫代乙酰胺试液
其他:
AB-8型大孔树脂
5.进度安排
实验第一周:
原材料检查与提取完成
实验第二周:
纯化
实验第三周:
制样
实验第四周:
- 配套讲稿:
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- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 中药 新药 赤芍 制剂 临床 药学 实验 研究