Eppendorf plus 移液枪校准方法.docx

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Eppendorfplus移液枪校准方法

Eppendorfplus移液枪校准方法

1、准备超纯水、万分之一天平〔如果校正0.5~2.5ul量程的，至少要十万分之一的天平〕、温湿度计、恒温室，还需准备一个小口容器，防止水分挥发。

2、按移液器总量程的100%、50%、10%分别进展第三和第四步。

3、吸头要反复吸取超纯水三次后，吸取固定容积的超纯水，推入放置在天平上的小口容器中，待数据稳定读取天平数值，同时记录温度。

重复10次。

4、将测量的数据用iso8655中的计算公式计算获得对应温度下的体积，取平均值。

5、根据三个测量点的偏差，用移液器专用的校正扳手通过移液器的校正窗进展调整。

6、重复3、4步，直至偏差在ISO8655的要求内为止。

ISO8655-1-2002活塞式容量测量仪器.第1局部:

术语、一般要求和用户使用建议

ISO8655-2-2002活塞式容量测量仪器.第2局部:

活塞式吸量管

ISO8655-6-2002活塞式容量测量仪器.第6局部:

确定测量误差的重量分析法

三、校准方法与步骤操作环境：

温度应控制在15-30℃，恒定在±0.5℃，相对湿度50%-80%，要保持较高的空气湿度以减少水分蒸发对结果造成的影响。

建议使用防蒸发装置。

测试应在独立无通风的房间内进展，并配备温度和湿度显示。

所需设备：

1、分析天平一台。

确保室内空气流动平缓，应防止天平正对空调出风口。

根据所测试的移液器的容量来选择适合的天平：

移液器容量X围

天平可读性

天平的重复性和线性

测量不准确度

1μl~10μl

0.001mg

0.002mg

≤0.002mg

10~100μl

0.01mg

0.02mg

≤0.02mg

>100μl

0.1mg

0.2mg

≤0.2mg

2、纯水、三蒸水或去离子水，需达到ISO3696三级水的标准。

3、独立工作间，配备防震、防尘、远离热源、无阳光直射的操作台。

4、温度计、湿度计。

校准操作：

为确保校准的准确性，采用三点移液十次，具体步骤如下：

1、同温处理，将移液器、吸头、天平、测试用水、操作台等校准用具放置在同一工作间内，至少四小时。

2、在正式操作前，先预洗吸头，吸排测试用水5次。

3、用最大体积、50%最大体积和最小体积〔或10%最大体积〕，各移液10次，记录每次移液的质量。

4、计算每组数据的平均值，代入计算公式，计算出不准确度与不准确度。

5、比照可允许的最大误差限度，根据实际需要确定进展调整。

附：

相关计算公式质量体积转换公式1：

V=（w+e）×Z式中：

V=体积〔μl〕w=质量〔mg〕e=蒸发损失〔mg〕Z转换因子以上公式参考ISO8655标准。

蒸发损失对测量小体积液体影响较大，因此应将蒸发损失计算在内。

方法：

在称过重的容器中注入定量清水，按下秒表观察30秒，读出损失量，然后算出每秒的损失量。

〔假如30s内质量损失3mg，如此损失量为3mg÷30s=0.1mg/s〕。

记录移液时间，将移液时间乘以每秒损失量，算出实际蒸发损失量，代入上述公式计算实际体积。

假如使用防蒸发装置，通常可以忽略蒸发损失量。

不同温度、压力下水的质量和体积不同，具体转换因子Z值请查看附录1。

公式2：

V20=m×K（t）式中：

V20=标准温度20℃下实际体积〔μl〕m=质量〔mg〕K（t）值以上公式参考JJG646-2006移液器检定规程。

根据天平测试蒸馏水的质量，以与检测时温度所对应的K（t）值，即可计算出标准温度下蒸馏水的实际体积。

具体K（t）值请查看附表2。

计算式时，请根据实际需要，选择公式进展计算。

不准确度〔系统误差〕不准确度是指实际移取体积和显示体积的差异。

A=-V0式中：

A=不准确度=平均值V0=标称容量A%=100%×A/V0不准确度〔随机误差〕不准确度指每次实际移取体积与实际体积平均值的差异，其变化是不可预计的测量误差的一局部。

它可以表示为标准差S或变异系数CV：

式中：

S=标准偏差=平均值n=测量次数Vi=单次测量数值

CV=100%×S／附表1：

转换因子Z（μl/mg）数值表〔无菌水〕

温度

气压〔KPa〕1KPa=10hPa

〔℃〕

80

85

90

95

100

101.3

105

15.00

1.0017

1.0018

1.0019

1.0019

1.0020

1.0020

1.0020

15.50

1.0018

1.0019

1.0019

1.0020

1.0020

1.0020

1.0021

16.00

1.0019

1.0020

1.0020

1.0021

1.0021

1.0021

1.0022

16.50

1.0020

1.0020

1.0021

1.0021

1.0022

1.0022

1.0022

17.00

1.0021

1.0021

1.0022

1.0022

1.0023

1.0023

1.0023

17.50

1.0022

1.0022

1.0023

1.0023

1.0024

1.0024

1.0024

18.00

1.0022

1.0023

1.0023

1.0024

1.0025

1.0025

1.0025

18.50

1.0023

1.0024

1.0024

1.0025

1.0025

1.0026

1.0026

19.00

1.0024

1.0025

1.0025

1.0026

1.0026

1.0027

1.0027

19.50

1.0025

1.0026

1.0026

1.0027

1.0027

1.0028

1.0028

20.00

1.0026

1.0027

1.0027

1.0028

1.0028

1.0029

1.0029

20.50

1.0027

1.0028

1.0028

1.0029

1.0029

1.0030

1.0030

21.00

1.0028

1.0029

1.0029

1.0030

1.0031

1.0031

1.0031

21.50

1.0030

1.0030

1.0031

1.0031

1.0032

1.0032

1.0032

22.00

1.0031

1.0031

1.0032

1.0032

1.0033

1.0033

1.0033

22.50

1.0032

1.0032

1.0033

1.0033

1.0034

1.0034

1.0034

23.00

1.0033

1.0033

1.0034

1.0034

1.0035

1.0035

1.0036

23.50

1.0034

1.0035

1.0035

1.0036

1.0036

1.0036

1.0037

24.00

1.0035

1.0036

1.0036

1.0037

1.0037

1.0038

1.0038

24.50

1.0037

1.0037

1.0038

1.0038

1.0039

1.0039

1.0039

25.00

1.0038

1.0038

1.0039

1.0039

1.0040

1.0040

1.0040

25.50

1.0039

1.0040

1.0040

1.0041

1.0041

1.0041

1.0042

26.00

1.0040

1.0041

1.0041

1.0042

1.0042

1.0043

1.0043

26.50

1.0042

1.0042

1.0043

1.0043

1.0044

1.0044

1.0044

27.00

1.0043

1.0044

1.0044

1.0045

1.0045

1.0045

1.0046

27.50

1.0045

1.0045

1.0046

1.0046

1.0047

1.0047

1.0047

28.00

1.0046

1.0046

1.0047

1.0047

1.0048

1.0048

1.0048

28.50

1.0047

1.0048

1.0048

1.0049

1.0049

1.0050

1.0050

29.00

1.0049

1.0049

1.0050

1.0050

1.0051

1.0051

1.0051

29.50

1.0050

1.0051

1.0051

1.0052

1.0052

1.0052

1.0053

30.00

1.0052

1.0052

1.0053

1.0053

1.0054

1.0054

1.0054

附表2：

K〔t〕值表〔β=0.00045/℃〕

水温

K（t）

水温

K（t）

水温

K（t）

℃

cm3/g

℃

cm3/g

℃

cm3/g

15.0

1.004213

18.4

1.003261

21.8

1.002436

15.1

1.004183

18.5

1.003235

21.9

1.002414

15.2

1.004153

18.6

1.003209

22.0

1.002391

15.3

1.004123

18.7

1.003184

22.1

1.002369

15.4

1.004094

18.8

1.003158

22.2

1.002347

15.5

1.004064

18.9

1.003132

22.3

1.002325

15.6

1.004035

19.0

1.003107

22.4

1.002303

15.7

1.004006

19.1

1.003082

22.5

1.002281

15.8

1.003977

19.2

1.003056

22.6

1.002259

15.9

1.003948

19.3

1.003031

22.7

1.002238

16.0

1.003919

19.4

1.003006

22.8

1.002216

16.1

1.003890

19.5

1.002981

22.9

1.002195

16.2

1.003862

19.6

1.002956

23.0

1.002173

16.3

1.003833

19.7

1.002931

23.1

1.002152

16.4

1.003805

19.8

1.002907

23.2

1.002131

16.5

1.003777

19.9

1.002882

23.3

1.002110

16.6

1.003749

20.0

1.002858

23.4

1.002089

16.7

1.003721

20.1

1.002834

23.5

1.002068

16.8

1.003693

20.2

1.002809

23.6

1.002047

16.9

1.003665

20.3

1.002785

23.7

1.002026

17.0

1.003637

20.4

1.002761

23.8

1.002006

17.1

1.003610

20.5

1.002737

23.9

1.001985

17.2

1.003582

20.6

1.002714

24.0

1.001965

17.3

1.003555

20.7

1.002690

24.1

1.001945

17.4

1.003528

20.8

1.002666

24.2

1.001924

17.5

1.003501

20.9

1.002643

24.3

1.001904

17.6

1.003474

21.0

1.002619

24.4

1.001884

17.7

1.003447

21.1

1.002596

24.5

1.001864

17.8

1.003420

21.2

1.002573

24.6

1.001845

17.9

1.003393

21.3

1.002550

24.7

1.001825

18.0

1.003367

21.4

1.002527

24.8

1.001805

18.1

1.003340

21.5

1.002504

24.9

1.001786

18.2

1.003314

21.6

1.002481

25.0

1.001766

18.3

1.003288

21.7

1.002459

附表3：

移液器容量允许误差和测量重复性简表

JJG-646

ISO8655

检定点

系统误差〔容量允差〕

随机误差〔重复性〕

标称容量

系统误差〔容量允差〕

随机误差〔重复性〕

μl

±〔%〕

≦〔%〕

μl

±〔%〕

≦〔%〕

0.1

20.0

10.0

0.2

20.0

10.0

0.5

20.0

10.0

1

12.0

6.0

1

5.0

5.0

2

12.0

6.0

2

4.0

2.0

5

8.0

4.0

5

2.5

1.5

10

8.0

4.0

10

1.2

0.8

20

4.0

2.0

20

1.0

0.5

25

4.0

2.0

40

3.0

1.5

50

3.0

1.5

50

1.0

0.4

100

2.0

1.0

100

0.8

0.3

125

2.0

1.0

150

2.0

1.0

200

1.5

1.0

200

0.8

0.3

250

1.5

1.0

300

1.5

1.0

500

1.0

0.5

500

0.8

0.3

1000

1.0

0.5

1000

0.8

0.3

1250

1.0

0.5

2000

0.8

0.3

2500

0.5

0.2

5000

0.6

0.2

5000

0.8

0.3

10000

0.6

0.2

10000

0.6

0.3

注：

①标称容量为制造商在移液器上标注的可使用的最大容量，如量程X围是50-1200μl，其标称容量为1200μl。

②JJG-646中，同一个检定点在不同的量程X围，容量允差、重复性要求一致，即无论是1-10μl的移液器还是10-100μl的移液器，10μl这一检定点容量允差都为8%，重复性都为4%。

③ISO8655中，所有有效量程点的容量允差、重复性都与标称容量的一致，即10-100μl的移液器，10μl、20μl、50μl、100μl，其容量允差要求都为0.8%，重复性都为0.3%。

四、维护保养1清洁和消毒为确保移液器的准确度和准确度，应根据具体使用情况进展定期保养。

尤其在移取腐蚀性溶剂后，应该对移液器进展清洁。

通过简单的清洁和保养，可适当地延长移液器的使用。

注意：

在清洁或消毒前，请务必将电池取出。

①外部清洗方法：

根据使用情况，可以用沾有70%乙醇或60％异丙醇的湿棉布拭擦移液器外表，去除外部污垢，再用双蒸水拭擦一遍，然后晾干。

每天开始工作前，检查移液器外表是否有灰尘或污垢，尤其是吸头连杆局部。

②内部清洗清洁步骤：

1、按照步骤拆卸需要清洁的部件。

2、外套柄、吸头连杆用沾有70%乙醇或60％异丙醇的湿棉布拭擦，再用双蒸水淋洗，然后晾干。

3、一般情况，O型圈、活塞无需清洁。

如沾有固体颗状物，请用干净的干棉布轻轻拭去即可。

4、给O型圈、活塞上润滑脂，只需涂上薄薄一层即可。

5、按步骤组装好移液器。

③消毒移液器清洁干净后，在121℃,1bar下，消毒20分钟。

消毒后在室温下冷却至少2个小时后方可使用。

局部手动移液器可整支消毒，电动移液器只可以下端消毒，请根据产品的具体情况进展消毒。

整支在紫外线下进展消毒灭菌，无需拆卸。

2日常维护针对不同性质的液体，有不同的清洗和保养方法，见下表：

处理液体

预防方法

清洗和保养方法

水溶液和缓冲液

拆卸移液器下端，用双蒸水冲洗受污染的部件，在60℃以下枯燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂

无机酸或碱

=使用带有滤芯的吸头

移液完毕后，将移液器下端拆下，并放在通风处。

必要时可用双蒸水冲洗受污染的部件，在60℃以下枯燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂

传染性液体

=使用带有滤芯的吸头=正向移液

将移液器下端拆下，放在实验室常规的消毒剂中浸泡30分钟，随后用双蒸水清洗，对受污染的部件进展121℃、1bar、20分钟高压灭菌

细胞培养物

=使用带有滤芯的吸头

将移液器下端拆下，放在实验室常规的消毒剂中浸泡30分钟，随后用双蒸水清洗，对受污染的部件进展121℃、1bar、20分钟高压灭菌

有机溶剂

=快速移液

移液完毕后，将移液器下端拆下，并放在通风处。

必要时可用双蒸水冲洗受污染的部件，在60℃以下枯燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂

放射性溶液

=使用带有滤芯的吸头=正向移液

将移液器下端拆下，将受污染部件放在复合溶液或专用的清洁溶液中浸泡30分钟后，用双蒸水清洗，在60℃下烘干或自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂

核酸或蛋白质溶液

=使用带有滤芯的吸头=正向移液

核酸：

在氨基乙酸或盐酸缓冲液（pH2.0）中煮沸10分钟，用双蒸水清洗干净，在60℃下烘干或自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂蛋白质：

将移液器下端拆下，用去污剂清洗，再用双蒸水淋洗，在60℃下烘干或自然晾干

故障排除

现象

原因

解决方法

活塞运动异常

=活塞安装过紧=活塞润滑不充分=活塞外表润滑脂凝固=活塞外表有异物或损坏=在活塞、O型圈和吸头连杆之间有杂质和颗粒=O型圈损坏

——拆开下端，重新组装——给活塞上润滑脂——去除旧润滑脂，上新润滑脂——清洁活塞或更换活塞——清洁并润滑O型圈和吸头连杆——更换O型圈

移液体积不准确或漏液

=吸头安装不当=吸头不匹配=在吸头与吸头连杆之间有杂质颗粒=吸头损坏=移液过快=吸头离开液面过快=活塞外表有异物或损坏=在活塞、O型圈和吸头连杆之间有杂质和颗粒=O型圈与活塞润滑不充分=O型圈损坏=操作不正确

——重新安装吸头——清洁吸头连杆，更换适宜吸头——清洁吸头连杆，更换吸头——更换新吸头——调节移液速度，慢吸慢放——移取粘性大、体积大的液体时吸液后停留几秒，再移离液面——清洁活塞或更换活塞——清洁并润滑O型圈和吸头连杆——上润滑脂——更换O型圈——请按说明书操作

吸头内有残液

=选用了带附加液的模式〔反向、分样、不等体积〕=吸头不匹配=吸头安装不当

——按启动键排空吸头——使用适宜的吸头——重新安装吸头

吸头内有残液

=吸头吸附性高=液体粘性过大

——更换低吸附吸头——选用反向移液模式，预洗吸头，调慢吸放速度

操作时有杂音

=活塞润滑不充分

——给活塞上润滑脂

特殊液体分液不准确

=校准不当，高粘度的液体需要重新校准=移取易挥发性或密度与水有明显差异的液体

——用问题液体重新校准——预洗吸头或重新校准

吸头脱落或难以安装

=劣质吸头=吸头已经损坏

——使用优质吸头——更换新吸头

3储放日常储放：

使用完毕，请将移液器竖直挂在移液枪架上。

当移液器吸头内有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞。

当产品长期不使用时，请将电池取出，然后将清洁消毒后的移液器在枯燥、洁净、常温下储存。

防止放置在温度变化大、湿度高、灰尘量大的环境中。

4须知事项 

∙在移液器的化学腐蚀力限度以内使用

∙请勿移取高度易燃的液体

∙假如移取液体与移液器、吸头温度不一致时，移取结果可能会出现偏差，因此三者应保持温度一致

∙请勿在有爆炸危险的气体X围中使用本产品

∙请勿蛮力使用、拆卸移液器

∙假如移液器无法正常运作，应立即停止操作，查阅故障分析章节

∙操作温度应保持在15℃到40℃之间，相对湿度应在80%以下

∙请妥善放置移液器、充电器等物件，防止意外跌落造成损坏