体外诊断试剂生产及质量控制核心技术指导原则.docx

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体外诊断试剂生产及质量控制核心技术指导原则

附件1：

体外诊断试剂生产及质量控制技术指引原则

——酶联免疫诊断试剂生产及质量控制技术指引原则

酶联免疫诊断试剂是指在酶标板上包被有关抗原（或抗体）后，运用直接或间接办法与待测样品中有关抗体（或抗原）反映，形成抗原抗体复合物再与相应酶标记抗体和/或抗原进一步反映，通过酶催化底物发生显色反映，由形成颜色强弱来判断样本中相应抗体或抗原存在。

为了规范酶联免疫诊断试剂生产和质量控制，制定本技术指引原则。

本指引原则合用于应用酶联免疫法第三类诊断试剂（病原微生物）生产和质量控制，其她类酶联免疫诊断试剂（如第二类等）参照本指引原则执行。

国家药物监督管理部门将根据科学技术发展需要，适时组织修订。

一、基本原则

（一）酶联免疫诊断试剂生产用各种原料、辅料等应制定其相应质量原则，并应符合关于法规规定。

（二）酶联免疫诊断试剂生产公司应具备相应专业技术人员、仪器设备以及适当生产环境，获得《医疗器械生产允许证》；同步，应按照《体外诊断试剂生产实行细则（试行）》规定建立相应质量管理体系，形成文献和记录，加以实行并保持有效运营；还应通过《体外诊断试剂生产公司质量管理体系考核评估原则（试行）》考核。

公司应对试剂使用范畴作出明确规定，并经国家药物管理部门批准。

（三）酶联免疫诊断试剂在研制时，应当遵循科学、规范原则，各反映条件选取和拟定应符合基本科学原理。

（四）酶联免疫诊断试剂生产过程中所用各种材料及工艺，应充分考虑也许涉及安全性方面事宜。

（五）生产和质量控制总体目的：

保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。

二、原材料质量控制

（一）重要生物原料

与诊断试剂质量最密切有关生物原料重要涉及各种生物活性抗原、重组抗原、单克隆杭体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。

此类原料可用于包被酶标反映板、标记有关酶（辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）、中和反映用抗原或抗体、制备校准品（原则品）等。

使用前应按照工艺规定对此类生物原料进行质量检查，以保证其达到规定质量原则。

重要生物原料若为公司自己生产，其工艺必要相对稳定；若购买，其供应商规定相对固定，不能随意变更供应商，如果重要原料（涉及工艺）或其供应商有变更，应根据国家有关法规规定进行变更申请。

重要生物原料常规检查项目普通涉及：

1．外观

肉眼观测，大某些生物原料为澄清透明液体，不含异物、浑浊或摇不散沉淀或颗粒；或者为白色粉末，不具有其她颜色杂质；特殊生物原料应具备相应外观原则。

2．纯度和分子量

重要经SDS-PAGE电泳后，运用电泳扫描仪进行分析，也可用其她适当办法，如高效液相法等。

依照所检测生物原料分子量选取适当丙烯酸胺凝胶浓度进行电泳。

普通状况下，每个电泳道加样量为5μg，同步用已知分子量蛋白原则品作参照，采用适当电泳电流，电压和电泳时间；电泳后凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。

染色后凝胶用电泳扫描仪分析原料纯度和分子量，纯度应达到相应质量原则，分子量大小应在对的条带位置。

3．蛋白浓度

蛋白浓度可通过Lowry法、280nm光吸取法、双缩脲办法等进行检测。

4．效价

效价测定普通依照蛋白含量测定成果，通过倍比稀释法进行。

效价应达到规定规定。

5．功能性实验

功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中状况，普通考查使用该原料试剂敏捷度、特异性和稳定性等，并比较其与上批次原料有关性。

（二）生物辅料

生物辅料指是在生产过程中作为蛋白保护剂用途一类生物原料，重要涉及小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。

这些生物原料均应按照《中华人民共和国生物制品重要原辅材料质控原则（）》所规定质量原则规定进行检查，达到相应质量原则后方应用于生产。

建议作如下检查：

1.牛血清或羊血清

外观：

为浅黄色澄清稍粘稠液体，无溶血或异物

无菌实验：

将血清直接放37度培养7天，放在明亮处观测，不得浮现混浊。

总蛋白含量：

用双缩脲办法来测定，原则为不不大于32mg/ml。

球蛋白含量：

取待测血清1ml，加入0.85%NaCl溶液。

加入饱和硫酸铵1ml，置4℃，2小时，8000rpm离心10分钟，弃上清。

沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至1ml，用Lowry办法测定蛋白含量，不能不不大于2mg/ml。

2.牛血清白蛋白：

外观：

应为浅黄色冻干粉末无吸潮，无结块，无肉眼可见其他杂质颗粒。

溶解性：

将牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解时间在18-26度时应不不不大于15分钟。

1%水溶液ｐＨ值应为6.5~7.1。

总蛋白含量：

用双缩脲办法来测定，其原则为不不大于等于95％。

总蛋白中BSA含量：

采用硝酸纤维素膜电泳法，其原则为≥95%。

BSA净含量：

总蛋白含量乘总蛋白中BSA含量，其原则为≥90%。

3.酪蛋白：

酸度应符合生产所需质量原则。

4．标记用酶

应在产品质量原则中明示所使用标记用酶名称（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等），同步应依照不同生产厂家检查办法和质量原则进行检查，酶纯度RZ值（OD403nm/OD280nm）应不不大于3.0。

对于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，还应进行功能性实验，即以其为原料配制一定浓度稀释液作为样品，进行酶联免疫测定，均不得浮现非特异性反映。

生物辅料供应商同样规定相对固定，不得随意变更供应商。

（三）化学原材料

参照《中华人民共和国生物制品重要原辅材料质控原则（）》分析纯级别进行检查。

重要检测指标涉及：

外观、普通盐类检测、溶液pH值、溶解状况、干燥失重、炽灼残渣等。

重要化学原材料供应商规定相对固定，不得随意发生变更。

化学原材料在购入时，原材料生产商必要提供该批次化学原材料质量保证材料和质量检查报告，其质量原则应达到生产所需质量原则。

（四）其她物料

1．酶标板

⑴外观

明亮处用肉眼观测板条外观质量。

如有欠注、飞边、肮脏、表面光洁度差，底部有波纹及划伤等应剔除。

⑵吸附能力和精密性

用一定浓度正常人IgG包被板条，再用一定浓度抗人IgG酶结合物吸附，通过显色反映，双波长酶标仪（主波长450nm，参照波长630nm）读数。

计算CV值，批内CV≤5％，批间CV≤10％。

2．液体试剂装量瓶

涉及阴阳性对照、样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液等液体组分，均应有相应装量瓶，并建立相应质量控制原则，如不同液体试剂所用装量瓶规格、装量瓶颜色、瓶盖颜色等。

3．其她材料

涉及试剂瓶标签、粘胶纸、铝箔袋、衬垫、可密封塑料袋、阐明书、干燥剂和包装外盒等，应参照国家食品药物监督管理局颁布《体外诊断试剂阐明书编写指引原则》和《医疗器械阐明书、标签和包装标记管理规定》建立相应质量控制原则。

（五）公司质控品

公司质控品普通涉及阴阳性参照品符合率、敏捷度（最低检出量）、精密性（均一性）、hook效应等质控样品，对于定量检测试剂，还涉及线性质控品样品。

如该产品具备国标品或参照品，应使用国标品（参照品）进行标化；若该诊断试剂没有国标品（参照品），则公司参照品质量原则不能低于国家药物监督管理部门已经批准同类试剂质量原则。

公司质控品基质应与诊断试剂待测样品基质基本一致，如待测样品为血清/血浆，质控品基质也应为血清/血浆。

三、试剂盒各组分生产

酶联免疫诊断试剂盒重要组分生产涉及酶标记物制备及滴配过程（酶工作液浓度拟定）、各种工作溶液配制、包被酶标反映板、分装及包装等环节；并通过产品半成品检查和成品检查两个质控过程来保证其质量符合规定。

（一）各种工作液配制

酶联免疫诊断试剂研制生产过程中所用工作液普通涉及：

包被液、封闭液、阴性阳性对照、样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液、终结液等，对定量检测试剂，还涉及原则品（或校准品）溶液。

若阴性、阳性对照或其她液体组分涉及生物安全性问题，制备时应在相应生物安全实验室完毕。

各种工作液在配制过程中应严格按质量原则中配方进行配制，充分混匀保证液体中各种成分均匀，同步进行相应质量检查并达到质量原则后，方可使用或者分装。

对于定量检测试剂，其原则品（或校准品）溶液应当在量值上具备溯源性。

应对配制过程及配制液体进行质量控制，重要涉及酶结合物功能性实验及稳定性；各种溶液外观、pH值等；酶作用底物应测定在无相应酶状况下自身显色状况，并制定合理限定指标；终结液应对其终结酶促反映能力进行测定。

（二）包被酶标反映板

包被前应对酶标反映板进行质量检查，如尺寸、外观、包装、吸附性能、精密性等，并记录酶标反映板批号、数量、标记。

酶标反映板经检查合格后方能用于包被。

不同批号板条不能混用。

选取经检查合格包被原料（如抗原、抗体等），经一定办法拟定最佳包被浓度和酶结合物工作浓度，按照诊断试剂生产规程，配制包被缓冲液、封闭液，经检查合格后，包被酶标反映板，经干燥后，已包被酶标反映板用铝箔纸封闭（内置干燥剂），抽真空后，保存于2~8℃。

应对包被过程进行相应质量控制，如包被用原料（抗原或者抗体等生物活性原料）质量检查、包被液和封闭液质控（如配方、外观、pH值）、包被过程监控（涉及包被和封闭体积、温度、湿度、时间等）、包被均一性检查、干燥过程监控等。

（三）分装和包装

样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液等溶液应严格按照质量原则中量进行无菌解决后再分装，分装量误差应不大于5%。

分装及包装均应按照相应SOP规定进行。

包装前，应严格检查试剂盒品名、批号等，核对各试剂盒各组分数量，并在关盒迈进行复核。

四、质量控制

（一）半成品质量控制

1．半成品抽样

检查人员按试剂批号，依照抽样申请单抽取规定数量半成品各组分，作号标记、待检。

2．半成品检查

运用上一批检查合格试剂盒相应组分，对本批生产出各种试剂盒组分分别进行检查，检查成果达到产品质量原则。

半成品检查，普通使用国标品（参照品）或经国标品（参照品）标化后公司质控品。

若某类试剂没有国标品（参照品），则使用公司参照品，但该公司参照品质量原则不能低于国家药物监督管理部门已经批准同类试剂质量原则。

检测所抽样半成品试剂盒性能，涉及阴阳性参照品符合率、敏捷度（最低检出量）、精密性等，均应达到相应质量原则规定，对精密性，普通状况下CV不得高于15％（采用竞争抑制法诊断试剂CV不得高于20％）。

对定量检测试剂，同步应分析其线性有关系数和校准品检测成果精确性。

公司应当对每一批试剂半成品进行稳定性研究。

试剂盒各组分应留样，2~8℃定期作稳定性考核，同步作37℃热稳定性实验，实验成果应符合产品质量原则。

（二）成品质量控制

产品包装完毕后，质检人员依照试剂批号、实际包装量、抽样申请单规定进行抽样，同步填写抽样数量和抽样日期，并且由抽样人签名。

抽样数量应涉及检查用数量和留样数量。

质检人员同步应检查有关原始记录。

每一批酶联免疫诊断试剂报批批量应至少为10000人份。

⑴成品检查

普通使用国标品（参照品）对成品进行检查，并达到质控品质量规定。

若该诊断试剂没有国标品（参照品），则使用公司参照品，但其质量原则不能低于国家药物监督管理部门已经批准同类试剂质量原则。

⑵稳定性实验

在批放行前，每一批酶联免疫诊断试剂应完毕37℃热稳定性实验，实验成果应符合产品质量原则。