实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测.docx

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实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测

实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测

实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测

篇一:

实验五十动物病毒的鸡胚培养实验五十一动物病毒的鸡胚培养

三、器材

1（病毒痘苗病毒（Vacciniavirus），鸡新城疫病毒（Necastledistasevirus）。

2.仪器或其他用具孵卵器，检卵灯，齿钻，磨壳器，钢针，蛋座

木架，注射器，

2.5,碘酒，70,乙醇，镊子，剪刀，封蜡（固体石蜡加1,4凡士林，溶化），灭菌培养板，灭菌盖玻片等。

3.白壳受精卵（自产出后不超过10d，以5d以内的卵为最好）。

四、操作步骤

1（准备蛋胚孵育前的鸡卵先用清水以布洗净，再用干布擦干，放‎‎入孵卵器内进行孵育（37?

，相对湿度是45%~60%），孵育3d后，鸡卵每日翻动1~2次。

孵至第4d，用检卵灯观察鸡胚发育情况，未受精

卵，只见模糊的卵黄黑影，不见鸡胚的形迹，这种鸡卵应淘汰。

活胚

可看到清晰的血管和鸡胚的暗影，比较大一些的可以看见胚动，随后

每日观察一次，将胚动呆滞的或没有运动的、血管昏暗模糊者，即可

能是已死或将死的鸡胚，要随时加以淘汰。

生长良好的蛋胚一直孵育

到接种前，具体胚龄视所拟培养的病毒种类和接种途径而定。

鸡卵孵化期间，箱内应保持新鲜空气流通，特别是孵化5~6d后，鸡胚发育加快，氧气需要量加大，空气供应不足，会导致鸡胚大量死亡。

2.接种

（1）绒毛尿囊膜接种

?

将孵育10~12d的蛋胚放到检卵灯上，用铅笔勾出其实与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育的好的地方。

?

用碘酒消毒气室顶端与绒毛尿囊膜记号处，并用磨壳器或齿钻在记号处的卵壳上磨开一三角形或正方形（每边约5~6mm）的小窗，不

可弄破下面的壳膜。

在气室顶端钻一小孔。

?

用小镊子轻轻揭去所开小窗处的卵壳，露出壳下的壳膜，在壳膜

上滴一滴生理盐水，用针尖小心地划破壳膜，但注意切勿伤及紧贴在

下面的绒毛尿囊膜，以利两膜分离。

?

用针刺破其实小孔处的壳膜，‎‎再用橡皮乳头吸出气室内的空气，是绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室‎‎（图?

—4）。

?

用注射器通过窗口的壳膜窗孔滴0.05~0.1ml痘苗病毒液于毛绒尿囊膜上。

?

在卵壳的窗口周围涂上半凝固的石蜡，作成堤状，立即盖上消毒盖玻片。

也可用揭下的卵壳封口‎‎，则将卵壳盖上，接缝处涂以石蜡，但石蜡不能过热，以免流入卵内。

将鸡卵始终保持人工气室在上方的位置进行37?

培养，48~96h观察结果。

温度对痘苗病毒病灶的形成影响显著，应严格控制培养温度在37?

，高于40?

的培养温度，鸡胚不能产生典型病灶。

（2）尿囊腔接种用孵育10~12d的蛋胚，因这是尿囊液积存得最

多。

?

将蛋胚在检卵灯上照视，用铅笔画出其实与胚胎位置，并在绒毛尿囊膜血管较少的地方做记号。

?

将蛋胚竖放在蛋座木架上，钝端向上。

用碘酒消毒气室蛋壳，并

用钢针在记号处钻一小孔。

?

用带18mm长针头的1ml注射器吸取鸡新城疫病毒，针头刺入孔内，经绒毛尿囊膜入尿囊腔，注入0.1ml病毒液（图?

—5）。

?

用石蜡封孔后于37?

孵卵器孵育72h。

（3）羊膜腔接种

?

将孵育10~11d的蛋胚照视，画出气室范围并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。

?

用碘酒消毒气室部位的蛋壳。

用齿钻在气室顶端磨一三角形，每边约1cm的裂痕。

注意勿划破壳膜。

?

用灭菌镊子揭去蛋壳和壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明，以便观察，若将蛋胚放在检卵灯上，则看得更清楚。

?

用灭菌尖头镊子，两页并拢，刺穿下层壳膜和绒毛尿囊膜没有血管

的地方，并夹住羊膜从刚才穿孔处拉出来（图?

—6）。

?

左手用另一把无齿镊子夹住拉出的羊膜，右手持带有26号针头的注射器，刺

入羊膜腔内，注入鸡新城疫病毒液0.1ml针头最好用无斜削尖端的钝‎‎头，以免刺伤胚胎。

?

用绒毛尿囊膜接种法的封闭方法将卵壳的小窗封住，于37?

孵卵器内孵育48~72h，保持蛋胚的钝端朝上。

鸡胚接种病毒的操作过程及使用器械应严格无菌，尽可能在无菌工作台上进行。

3.收获

（1）绒毛尿囊膜

?

用碘酒消毒人工气室上卵壳，去除窗孔上的盖子。

?

将灭菌剪子插入窗内，沿人工气室的界限剪去壳膜，露出绒毛尿

囊膜，再用灭菌眼科镊子将膜正中夹起，用剪刀沿人工气室边缘将膜

剪下，放入加有灭菌生理盐的培养板内，观察病灶形状。

然后或用于

传代，或用50%甘油保存。

（2）尿囊腔接种法收获尿囊液

?

将蛋胚放在冰箱内冷冻半日或一夜，使血管收缩，以便得到无胎血的纯尿囊液。

?

用碘酒消毒气室处的卵壳，并用灭菌剪刀除去气室的卵壳。

切‎‎开壳膜及其下面的绒毛尿囊膜，翻开到卵壳边上。

?

将鸡卵倾向一侧，用灭菌吸管吸出尿囊液，一个蛋胚约可收获6ml左右尿囊液，收获的尿囊液暂贮4C冰箱，经无菌试验合格后于-30C长期贮存。

收获尿囊液时均勿损伤血管，否则病毒会吸附在红

细胞上，使病毒滴度显著下降。

?

观察鸡胚，看有无典型的症状。

（3）羊膜腔接种法收获羊水

?

按收获尿囊液的方法消毒、去壳，翻开壳膜和尿囊膜。

?

先吸出尿囊液。

?

再用镊子夹出羊膜，以尖头毛细吸管插入羊膜腔，吸出羊水，放

入灭菌试管内，每蛋胚可吸0.5~

1.0ml。

经无菌试验合格后，保存于低温中。

?

观察鸡胚的症状。

五、试验报告

1.结果

（1）描写痘苗病毒在鸡胚绒毛尿囊膜上培养后，所出现的病变状况。

（2）描写鸡新城疫病毒接种鸡胚培养后，鸡胚所出现的变化。

2.思考题

（1）本实验所用的两种病毒，储能在鸡胚中进行培养外，还能用哪些方法进行培养,试比较它们的优缺点。

（2）接病毒后的鸡胚常出现非特异性的意外死亡和病毒感染引起

的特异性死亡，如何判定死亡原因,实验五十二昆虫病毒的培养

一、目的要求

1.学习用感染宿主的方式培养昆虫病毒的基本方法。

2.观察核型多角体的形态。

二、基本原理昆虫病毒是以昆虫为宿主的病毒，与宿主的特异性高。

研究昆虫病毒的重要目的是保护益虫和杀灭害虫。

例如蚕遭到病‎‎毒的侵害会造成巨大的经济损失，因此，研究与杀灭这些病毒，对防治与控制蚕病从而达到保护蚕业生产有重要价值;另方面对农林作物有害的昆虫，又要利用其特异病毒作为杀灭害虫的手段。

培养昆虫病毒主要采取组织培养和感染宿主两种方法，后者比较容易成功，使‎‎用更为广泛。

本实验以斜纹夜蛾（Prdenialitura）核型多角体宿主来培

养病毒。

斜纹夜蛾能危害棉花、蔬菜等多种作物。

核型多角体病毒

是多角体病毒侵入宿主细胞后，在细胞核内形成多角体，多角体内包

含着很多病毒粒子。

斜纹夜‎‎蛾多角体的形状有三角形、四角形、五角

形、六角形和圆形，直径大小在

1.2~

3.4μg，用普通显微镜可观察到。

多角体蛋白可被碱性溶液溶解，而释放出病毒粒子。

因此，多角体通过污染食物经口感染后，被昆虫的碱性胃液所溶解，释放的病毒粒子通过中肠上皮组织而进入血腔，在脂肪组织及其他组织（包括血细胞）中增殖。

斜纹夜蛾感染病毒后明显的特征是体色变化，30C下感染后3d左右幼虫腹面体色由正常的绿色变为粉红色。

发病后期，食欲减退，死亡前半天到一天，停止摄食，排稀粪，幼虫常向上爬行，在自然界常倒悬或附着于枝叶上而死亡。

在病毒大量繁殖后，血液中出现大量多角体，通过皮肤可以看到血液呈混浊状，此时皮肤脆弱易破，有时前腹背后端破裂，流出

乳白色货稍带粉红色液体，似脓汁，具有很强的感染性。

三、器材

1.病毒材料及宿主斜纹夜蛾核型多角体病毒材料（保存于冰箱的虫尸），三龄斜纹夜蛾幼虫。

2.仪器或其他用具蓖麻或甘薯叶片，1%漂白粉或5%石灰水，甘油，玻璃缸，纱布，血细胞计数板，显微镜，离心机等。

四、操作步骤

1.病毒悬液制备

（1）将斜纹夜蛾核型多角体病毒材料加适量蒸馏水置研钵中研磨‎‎，加水稀释并通过两层纱布过滤，再将滤液离心（3000r/min离心30min）。

（2）将离心后的沉淀物用蒸馏水悬浮，并再离心，这样反复多次，即可得到初步提纯的白色多角体。

（3）将提纯的多角体先用适量的蒸馏水均匀悬浮，并用血细胞计数板计数，然后再加8水稀释成每毫升1X10个多角体的悬液。

（4）向上述悬液中加入每毫升含青、链霉素各1500~201X单位，以防止杂菌污染。

2.接种

（1）将由田间采来的健康三龄斜纹夜蛾幼虫放于玻璃缸内，缸口

用多层纱布盖好。

虫2口密度一般在33mm一头左右为宜。

（2）用1%的漂白粉液或5%石灰水浸泡蓖麻或甘薯叶片进行消毒，然后再用清水洗涤，晾干后，用上述核型多角体悬液浸泡或用蘸有多角体悬液的棉球涂抹，晾干。

（3）待幼虫经短时间的饥饿以后，将晾干的带毒叶片放于玻璃缸

内供食，通过幼虫口食接种病毒。

供食带毒叶片的次数可为1~3次，一般供毒次数多则发病率高。

盖好纱布后，置30C温室培养。

（4）培养过程仍需喂食，加强管理与观察。

3.收获与保存

（1）在幼虫死亡前，虫体变白，通过皮肤看到血液混浊时，在尾角或腹脚处剪破，收获脓汁，保存于甘油水溶液（水:

甘油=1:

2）中，置冰箱保存。

（2）或将脓汁经洗涤、离心，取多角体沉淀加乳糖制成糊状，冷冻干燥保存。

（3）若整个死虫保存，则将未放出脓汁的病死虫直接放甘油水溶液中，冰箱保存。

4.涂片镜检

（1）从尾角或腹脚取血涂片，加上盖玻片。

（2）于（600X）高倍镜下观察。

五、实验报告

1.结果

（1）绘图表示显微镜下观察到的多角体形态。

（2）描写斜纹夜蛾幼虫感染斜纹夜蛾核型多角体后，体表的变化。

2.思考题

（1）学会对昆虫病毒的培养，对农作物病虫害的防治有什么意义,

（2）用昆虫病毒进行害虫的防治，对人、畜和其他有益昆虫有无

危害,为什么,

（3）如果某项研究或实际工作要求你从自然环境中分离高毒效的

斜纹夜蛾核型多面体病毒，你将到什么地方,用什么材料进行分离，

请写出简单的实际方案。

实验五十三动物病毒毒力测定

一、目的要求

1、学习用培养细胞单层测定病毒毒力的基本方法。

2、掌握病毒半数细胞培养物感染剂量的测定技术及计算方法。

二、基本原理病毒感染能力测定是评估其毒力的常用方法之一。

通常采用测定实验动物的半数致死量（50%lethaldse,LD50）和测定细胞培养物的半数组织（细胞）培养物感染量（50%tissuecultureinfectiusdes,TCID50）来评估病毒的感染能力（毒力）。

用细胞培养物测定病毒的TCID50较实验动物的LD50简便、经济，且易控制实

验条件，加之细胞系的同质性高，敏感性比较一致，没有个体间的遗

传差异。

所以本实验介绍的TCID50测定方法。

溶细胞性病毒的毒力与其致细胞病变的能力直接相关，固可用不同含量的病毒液接种敏感‎‎的宿主细胞培养物测定毒力。

实验中病毒的毒力以其致细胞病变效应‎‎

（cytpathiceffectCPE）的程度确定，即观察病毒致细胞病变的最‎‎高和最低值，以半数细胞病变为病毒感染剂量。

然而，实验中所能观‎‎察到的是不同稀释病毒致细胞病变的定性结果‎‎，需要将结果统计处里，用Reed-Muench公式计算，才能获得病毒TCID50的相对定量（滴度

或效价）。

为了便于理解，以一病毒致细胞病变的观察结果，介绍

Reed-Muench公式的计算方法。

首先获得表?

-2的观察结果:

从表中可见，该病毒的TCID50在10-3和10-4稀释度之间。

表?

-2病毒CPE观察结果根据Reed-Muench公式“TCID50=高

于50%CPE百分率病毒稀释度的对数+比距×稀释因子的对数”

（1）式中，比距=高于50%CPE百分率,50

（2），将表?

高于50%CPE百分率,低于50%CPE百分率9

1.6,50=0.8。

再将比距值代入

（1）式中，?

10-3+0.89

1.6,40-2的数值代入

（2）式中，则比距=×?

10-1=-

3.8，则?

TCID50=-

3.8，即TCID50=10-

3.8。

查反对数得6310，即该病毒6310倍稀释度0.1ml等于1个TCID50。

三、器材

1.病毒及宿主甲型流感病毒（influenzavirusA），传代犬肾细胞系MDCK（Canisfamiliaris）。

2.培养基DMEM细胞培养液（含10%小牛血清，100μg/ml的青、链霉素）。

3.溶液或试剂0.25%胰酶液，0.1ml/L，磷酸缓冲液（PBS,pH

7.2）。

4.仪器或其他用具96孔细胞培养板，10~200μl可调试加样器，无菌小试管，血细胞计数器，倒置显微镜，普‎‎通显微镜，C2培养箱。

四、操作步骤

1.MDCK细胞培养常规复苏液氮冻存的MDCK细胞，接种于培养方

瓶中，加入7~10mlDMEM培养液，充分混匀，置37C培养2~3d，待细

胞形成致密单层备用。

2.细胞悬液制备MDCK单层细胞一瓶，弃上清夜，加0.25%胰酶1ml，37C消化2~5min，待细胞完全脱壁后加入3mlDMEM培养液，充分分散细胞。

取样显微计数，调整细胞浓度为2×105~5×105/ml。

胰酶消化时间不宜过长，否则对细胞造成损伤。

初学者可将细胞培养瓶置显

微镜下观察，细胞变圆脱壁即可。

3.细胞接种取96孔塑料细胞培养板一块，用加样器分别向每孔加

入细胞悬浮液200μl。

4.细胞培养板置37C，5%C2的培养箱中培养24h，细胞快速生长，形成70%左右的单层可用于病毒接种。

5.病毒稀释将病毒液在5ml无菌试管内作连续10倍稀释，即用1ml吸管吸取0.2ml病毒液，加到-1装有

1.8mlPBS的第1支小试管内（10），充分混匀后，更换吸管，吸取0.2ml加入第2管-6中，连续如此操作，继续第3支稀释，如此类推，稀释到第6管（10）.

篇二:

边缘检测实验报告图像边缘提取实验报告

一、实验目的通过课堂的学习，已经对图像分割的相关理论知识

已经有了全面的了解，知道了许多图像分割的算法及算子，了解到不

同的算子算法有着不同的优缺点，为了更好更直观地对图像分割进行

深入理解，达到理论联系‎‎实际的目的，特制定如下的实验。

二、实验原理检测图像边缘信息，可以把图像看做曲面，边缘就是图像的变化最剧烈的位置。

这里所讲的边缘信息包含两个方面:

一是边缘的具体位置，即像素的坐标;而是边缘的方向。

微分算子有两个重要性质:

定域性（或局部性）、敏感性（或无界性）。

敏感性就是说，它对局部的函数值变化很敏感，但是因其对变化过于敏感又有了天然的缺陷——不能抵抗噪声。

局部性意思是指，每一点的导数只与函数在该点

邻近的信息有关。

主要有两大类基于微分算子的边缘检测技术:

一阶微分算子边缘检测与二阶微分算子边缘检测。

‎‎这些检测技术采用以下的基本步骤:

（1）将相应的微分算子简化为离散的差分格式，进而简化为模板（记为T）。

（2）

（3）利用模板对图像f（m,n）进行运算，获得模板作用后‎‎的结果Tf（m,n）。

提出阈值h,在采用一阶微分算子情形记录下高于某个阈

值h的位置坐标Sh?

{（m,n）|（m,n）?

h}（而采用二阶微分算子情形，

一般是对某个阈值?

?

0确立Sh?

{（m,n）|Tf（m,n）?

?

}）

（4）对集合Sh进行整理，同时调整阈值h。

Rberts算子Rberts算子是一种利用局部差分算子寻找边缘的算子，两个模板分别为?

10?

?

0?

1?

Rx?

?

R?

y?

?

10?

0?

1?

?

?

?

则，

Rxf（i,j）=f（i,j）?

f（i?

1,j?

1）Ryf（i,j）=f（i?

1,j）?

f（i,j?

1）算法的步骤为:

（1）首先用两个模板分别对图像作用得到Rxf和Ryf;

（2）对Tf（i,j）?

Rx?

Ry，进行阈值判决，若Tf（i,j）大于阈值则相应的点位于便于边缘处。

对于阈值选取的说明:

由于微分算子的检测性能受阈值的影响较大，为此，针对具体图像我们采用以下阈值的选取方法，对处‎‎理后的图像统计大于某一阈值的点，对这些数据求平均值，以下每个程序均采用此方法，不再做说明。

Sbel算子Sbel算子采用中心差分，但对中间水平线和垂直线

上的四个邻近点赋予略高的权重。

两个模板分别如下:

21?

?

?

101?

?

1?

?

?

?

Sx?

?

?

202?

‎‎Sy?

?

000?

?

?

101?

?

?

1?

2?

1?

?

?

?

?

22Preitt算子Preitt算子也属于中心差分类型，但没有给最邻近点较高的权重，两个模板如下:

11?

?

?

101?

?

1?

?

?

?

Px?

?

?

101?

Py?

?

000?

?

?

101?

?

?

1?

1?

1?

?

?

?

?

采用一阶微分算子很难找到一个一致的阈值选择办法，保证检测出的图

像有相对均匀的宽度，克服这个障碍的办法是改用二阶微分算子进行

边缘检测定位。

Laplace采用一阶微分算子很难找到一个一致的阈值选择办法，保证检测出的图像有相对均匀的宽度，克服这个障碍的办法是改用二阶微分算子进行边缘检测定位。

经常采用如下Laplace微分算子:

?

2f?

2f?

f（x,y）?

2?

2?

x?

y并进而寻找?

f（x,y）的跨零点的位置（零点的局部正和负的取值都有）。

当然实践中可以通过模板来实现，本程序采用如下模板:

?

010?

?

?

?

?

1?

41?

?

?

?

010?

?

无论什么样的微分算子，直接用来进行边缘检测，会受到噪声很大的干扰。

即使是二阶微分算子也不能克服噪声干扰。

但是如果采用高斯低通滤波，所得的结果则比较好地保留了图像的边缘特征。

Marr-Hildrech的LG边缘检测算法:

Canny检测子Canny算子采用和数据内容相关的滤波技术。

Canny算子求边缘点具体算法步骤如下:

1.用高斯滤波器平滑图像（

2.用一阶偏导有限差分计算梯度幅值和方向.

3.对梯度幅值进行非极大值抑制（

4.用双阈值算法检测和连接边缘（步

1.图像与高斯平滑滤波器卷积:

篇三:

遗传实验报告微核检测环境中诱变物质的微核检测摘要:

微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁状结构，是染色体发生畸变的另一种表现形式，微核发生率用来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。

本实验以大蒜根尖作为实验材料，分别以清水和一定梯度的叠氮化钠溶液作为阴性对照和阳性对照，用一定梯度的咖啡溶液和电池浸出液对实验组大蒜根尖进行诱变。

最后卡诺固定液进行固定、用改良苯酚品红染色、压片后观察统计各组的微核千分率，从而了解微核检测的方法和意义以及通过检测评价环境中常见物质

的诱变情况。

1.引言微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁状结构，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。

微核是染色体畸变的一种表现方式。

许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。

目前研究表明，微核发生率同作用因子的剂量呈正相关，微核发生率来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。

微核试验是一种建立在细胞水平上分析DNA损伤的技术。

该技术以其经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点，成为检测致突变剂和环境污染物等经典的短期试验方法。

目前许多国家和国际组织将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理性安全性评价的必做试验并用于染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。

本试验采用大蒜作为试验材料，具有许多优点:

?

用鳞茎进行无性增殖，避免了有性生殖过程中的遗传性变异，

具有遗传背景稳定的优势;

?

分布广、材料易得，不受地区和季节的限制;

?

培养方便，操作简单，蒜瓣去皮后将基部浸入净水中即可萌生新根，无需其他条件，且蒜瓣体积较小，萌生新根的数目较多;?

价格低廉，对诱变剂敏感，是一种理想的试验材料。

近年来，由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出，日

常生活中人类接触到的有潜在遗传毒性的物质越来越多，其中一个较为突出的就是废旧电池的污染。

废旧电池中的化学物质不断渗透在环

境中，其污染将持续若干年，直接或间接的影响人们的身体健康，造

成很大的危害。

咖啡的主要成分为咖啡因。

德国生态学《ke-test》的研究人员发现，他们所检测的所有24种品牌的研磨咖啡和7个品牌的浓咖啡中都含有致癌物质——丙烯酰胺。

检测结果发现，丙烯酰胺也存在于煮熟的咖啡中。

绝大多数研究均表明咖啡与膀胱癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等癌症有一定的关系。

为了研究电池浸出液和电池咖啡是否真正具有诱变致癌作用，本次实验通过用咖啡和电池浸出液进行大蒜诱变培养，在阴性和阳性对照设计下，计算其微核率，通过微核检测技术评价咖啡和电池浸出液的诱变情况。

2.实验材料与方法

2.1实验材料材料:

大蒜器材:

培养皿、单面刀片、双面刀片、Eppendrf管、油性记号笔、显微镜、载玻片、盖玻片、镊子;试剂:

冰醋酸、无水乙醇、1MHCl溶液、100mml/LNaN3溶液、电池内部粉末、雀巢速溶咖啡粉末，改良苯酚品红。

2.2实验方法

2.

2.1取材选取生长良好、大小相对一致的大蒜，剥成一瓣瓣后置于放清水的培养皿中。

于24?

水中浸泡24-36h,选择根长整齐一致，不定根长约0.5,1cm左右的大蒜随机分组。

2.

2.2处理各实验组将实验材料分为六组，放入8ml不同成分的培养液中，其中1组为阴性对照组，培养液为清水;

2、3组为阳性对照组，培养液分别为25mml/L、50mml/LNaN3溶液;5——8组培养液分别为0.50g/ml浓度的咖啡和0.25g/ml浓度的咖啡以及分别添加

2.5g和

5.0g的电池内部粉末。

将培养皿中置于20摄氏度左右室温下培养24h。

表1实验组浓度梯度的设定也可以设定时间梯度，检测微核的形成情况。

实验组如下（实验组采用的诱变剂是NaN3，既是实验组，又是阳性对照组）表2实验组时间梯度的设定

2.

3.4固定卡诺固定液中固定24小时，如不立即检测可移至70%乙醇中4?

下保存。

2.

3.5制片

?

根尖用1MHCl处理的10min,水洗3次。

?

切取近根尖分生区的伸长区组织，用改良苯酚品红染色10min。

?

压片:

加上盖玻片后，用铅笔轻敲使细胞分散，最后垂直压下去。

2.

3.6镜检每个根尖计数1000个细胞，统计含微核的细胞数，然后取平均值，即为该处理的微核千分率。

2.3结果

2.

3.1实验结果图图1含微核的细胞（10*40）图2含微核的细胞（10*40）图31组（10*40）图42组（10*40）图53组（10*40）图64组（10*40）图75组（10*40）图86组、7组（10*40）

2.

3.2实验结果分析与统计图

1、2中可以看到含有微核的细胞，这些细胞都有以下特征:

（1）在主核大小的1/3以下，并与主核分离的‎‎小核。

（2）小核着色与主核相当或稍浅。

（3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。

图3-8分别为1-6组的其中一个视野结果图。

其中，图3中为清水组，没有微核的出现，但是由于加入的染液太多，使得背景呈现紫红色。

图4——7视野中均有微核的出现:

图4的视野中的某些细胞由于敲片力度过大导致‎‎细胞破裂;图5为50mml/l的NaN3溶液，可看到溶液中几乎全是微核，说明NaN3诱导微核的能力很强。

图5与图6进行对照，可看到咖啡的确具有一定的致癌作用，并且浓度