肾移植术后巨细胞病毒感染初期检测方式.docx
- 文档编号:7687256
- 上传时间:2023-01-25
- 格式:DOCX
- 页数:5
- 大小:20.76KB
肾移植术后巨细胞病毒感染初期检测方式.docx
《肾移植术后巨细胞病毒感染初期检测方式.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《肾移植术后巨细胞病毒感染初期检测方式.docx(5页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
肾移植术后巨细胞病毒感染初期检测方式
肾移植术后巨细胞病毒感染初期检测方式
摘要】肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染具有较高的发病率和病死率,初期准确的检测有利于临床医治,本文就CMV感染的检测方式尤其是感染初期的几种诊断方式进行论述。
【关键词】肾移植;巨细胞病毒;检测方式
巨细胞病毒(CMV)感染是肾移植术后的常见并发症,据文献报导CMV活动性感染率在肾移植术患者中约50%~75%,有10%~30%的患者为有病症的CMV感染。
一旦发生严峻的CMV感染,专门是间质性肺炎,病死率高达25%[1]。
在移植术后,随着各类免疫抑制剂的应用,病毒将被激活。
在肾移植受体中,CMV感染的临床发病率与供体和受体移植前的血清学状态和所用免疫抑制剂的种类和剂量有关。
受体CMV阳性R+/供体CMV阴性D,为继发性感染,病症较轻;若是由于供体肾及术后利用血液制品CMV阳性,即R/D+,为原发性感染,病情最为严峻;假设为重复感染,即R+/D+,病情较重[2]。
有文献报导术前供、受体CMV血清反映均为阳性时,术后患者发生临床CMV感染的概率可达50%,供体阳性、受体阴性时术后CMV病的发生率近66%,因此而造成的CMV病、移植物丧失及医疗花费都比其他因素的大[3]。
急行排斥反映和免疫抑制剂的利用是CMV感染最要紧的诱发因素[4],抗淋巴细胞球蛋白(ALG),OKT3及细胞毒性药物能直接促使暗藏的病毒活化,而环孢素A、FK506及糖皮质激素能够抑制机体的免疫系统,致使病毒感染的播散与迁延,进一步加重病情,其中多克隆或单克隆抗淋巴细胞抗体刺激CMV感染的效应最强,成为阻碍移植术后CMV感染发生的重要因素。
因此初期诊断和及时预防性抗病毒医治是降低移植术后CMV病发病率和病死率的关键。
CMV感染的病症常表现为不明缘故的发烧,伴有白细胞减少或淋巴细胞增多、血小板减少、肌肉痛、关节痛和胃纳差等,当进展为CMV病时,常引发间质性肺炎,表现为干咳和呼吸困难,严峻者可发生急性呼吸衰竭。
另外,还可引发脑炎、肝炎、胃肠炎、急性视网膜炎、消化道溃疡等。
1CMV感染的检测方式
一样检查外周血白细胞减少或淋巴细胞增多,血小板减少;尿常规可发觉蛋白尿,并有少量红细胞、白细胞,可有ALT和胆红素升高,肺部X线检查:
双下肺炎症改变。
组织学检查病毒分离培育,取尿、血、咽拭子、支气管肺泡灌洗液及组织标本直接培育,病毒培育灵敏性低,耗时常需要3周~6周时刻出结果,无益于指导临床用药。
组织学检查找巨形细胞,一样在严峻原发性感染时更成心义。
血清学检查包括CMV抗体检查,CMV抗原血症测定法,CMV多聚酶链测定法和PP67mRNA的监测。
现就血清学检查的具体方式介绍如下。
CMV抗体检查采纳ELISA法测定血清中CMVIgM、IgG。
抗CMV抗体血清学检查方式简单,但CMVIgM在原发性感染初期不显现,CMVIgG在继发性感染中需升高4倍才成心义。
由于肾移植患者术后常规利用免疫抑制剂,CMV抗体产生常延迟或缺乏,阻碍阳性检出率。
一样用于监测移植前供、患者的CMV携带状况。
CMV抗原血症测定法机体感染CMV后可在外周血白细胞中检测到CMV抗原,成为CMV抗原血症,CMV抗原血症的显现明显早于临床病症的显现和血清学的改变。
CMVPP65抗原检测能够初期诊断CMV感染,已成为国际公认的监测HCMV活动性感染的“标准方式”之一[6]。
CMVPP65抗原是CMVUL83基因编码的初期即刻蛋白(IEA),在CMVDNA复制前就有合成,对CMV的复制具有调控作用,是体内初期活动性CMV病毒复制的标志[6,7]。
CMV抗原血症测定法计数阳性细胞,依照已制定的参数标准来决定是不是采取抗病毒医治。
通常通过免疫组织化学染色法(即标记链丝菌素生物素结合法,LSAB法)检测外周血白细胞CMV抗原,该方式能够幸免用ABC法致使内源性过氧化物酶的非特异性染色而呈现假阳性的结果,而且用一般显微镜即可作出诊断。
在一般光学显微镜下观看并计数5万个白细胞中CMV阳性细胞个数(称抗原指数)。
阳性细胞在镜下细胞核为黄色或棕黄色,阴性细胞核为蓝色或蓝紫色。
测定CMVPP65抗原灵敏性及特异性均高,达90%以上,可是CMV抗原血症测定法的缺点是需要新鲜血标本(标本必需在8h内及时处置),来取得最正确灵敏性,不然PP65阳性细胞数将会减少,实验的灵敏性将会降低。
CMV多聚酶链测定法用多聚酶链反映(PCR)来扩增DNA被证明是检查临床标本CMV感染的靠得住方式。
通常有定性PCR技术和定量PCR技术。
定性PCR定性PCR要紧检测外周血白细胞CMV的磷酸化蛋白PP71基因序列,要严格依照PCR诊断试剂盒操作说明书进行操作。
依照文献报导,CMV激活性感染和暗藏性感染患者的单个核细胞中存在着低水平的CMVDNA,该方式不能区分CMV活动性感染和暗藏性感染,因此关于临床监测CMV感染有必然的局限性[8]。
因此不适于CMV活动性感染的初期诊断。
定量PCR定量PCR技术幸免了上述缺点,由于单个核细胞中CMV负荷量与中性粒细胞中CMV负荷量相较能够忽略不计,因此能够采纳定量PCR检测外周血白细胞内的CMV负荷量,是目前较为公认的诊断CMV活动性感染的一项实验室技术、灵敏性和特异性别离为100%、92%[9,10,11],而且标本的运输,延误时刻超过2d均不阻碍PCR分析。
方式如下:
抽取外周血制备白细胞,PCR法测定CMV即刻初期基因含量,以基因拷贝数(S1)/10000表示。
采纳自动基因扩增及检测系统,由厂家提供阳性、阴性对照,运算机自动进行质控。
CMVDNA检出说明体内有CMV复制,存在着活动性CMV感染。
术前对患者进行外周血白细胞CMVDNAPCR检测,阳性者且拷贝数较高,那么采取抗病毒医治,待CMVDNA下降至必然水平或转阴后再行移植手术,同时对供者外周血白细胞进行CMVDNA检测及做出相应处置。
据报导,病毒含量超过1000拷贝/10000都进展成为有病症的CMV病,以1000拷贝/100000白细胞为预测CMV病病症发作的阈值,其灵敏性为35%,特异性为100%。
若是超过该阈值即需要抗病毒医治。
在医治的进程中,反复检测外周血白细胞CMVDNA(通常术后3个月1次/周,术后3个月~6个月每两周一次),随着抗病毒药物的应用,CMVDNA的拷贝数会下降。
当CMVDNA水平缓慢下降或不下降,体内CMV的半减期延长时,可能是CMV对抗病毒药物如更昔洛韦耐药性的一个初期提示[12]。
由此可见,定量PCR技术在决定受体进行移植手术的最正确时刻、供体的选择和预测肾移植受者CMV感染的病症发作和监测抗病毒药物的疗效等方面有着极为重要的价值。
目前有一种新的PCR技术称为RealtimePCR动态监测技术,所谓RealtimePCR是指热循环仪在每一个PCR循环进程中,通过检测反映管内荧光信号的转变来推导反映体系中待测物的起始模板数,不仅能够测定病毒负荷,还能监测病毒负荷的动态,反映病毒复制水平[13,14],并依照病毒的拷贝数来调整免疫抑制方案,从而通过调整机体的免疫状态来预防CMV病[15]。
郑克立等提到决定肾移植术后CMV感染状态的要紧因素是机体本身的免疫力,术后合理利用免疫抑制剂幸免过度抑制尤其重要,术后机体尽管处于免疫抑制状态,但对体内持续存在的病毒如CMV仍具有相应的应答,当这种平稳被破坏,就可能发生CMV病[16,17]。
据临床报导肾移植术后利用骁悉后CMV病发生率有所上升,是因为骁悉的强烈免疫抑制作用破坏了免疫平稳点造成免疫失衡。
采纳RealtimePCR动态监测体内CMVDNA的拷贝数,依照病毒复制情形及时调整免疫抑制方案,完全能够预防CMV病的发生。
RealtimePCR动态监测患者术后白细胞内CMVDNA的拷贝数,参考ROBERT实验,选择以800拷贝/100000白细胞为预测CMV病的阈值,对拷贝数超过800拷贝/100000白细胞者,予调整免疫抑制方案,减少环孢素的用量,以提高机体的自身免疫力,白细胞内的CMVDNA可慢慢降至平安范围。
本法比PP65抗原血症测定有更高的灵敏性,而费用更低,操作更简单[18]。
PP67mRNA的监测利用核酸系列扩增技术(NASBA)检测CMV后期基因表达(PP67)是一种快速、灵敏性和特异性都很高的诊断方式。
研究发觉CMV是一种多嗜性病毒,它在体内的基因表达有些受到限制,也确实是有即刻初期(IE)基因和初期(E)基因表达,而没有晚期(L)基因表达,即所谓病毒流产型感染,而在其他一些细胞里,IE、E和L基因全数表达,形成转录型感染,致使病毒的复制、传播和后继疾病的进展,而这种所谓转录型病毒感染的重要标志就LmRNA的显现。
PP67是LmRNA编码的CMV基质表层蛋白,它检测真正的晚期LmRNA,真正反映活动性的CMV感染,对PP67的监测能够准确地反映出体内CMV的活动状态。
PP65是属于初期的CMV抗原,它的显现反映了病毒在宿主中的初期感染时期,但在临床实践中常发觉PP65阳性细胞能够出此刻未成熟的、流产型感染中,患者阳性抗原血症并非必然进展成全身CMV感染。
因此,若是初期医治是成立在即刻初期抗原或初期抗原指标的基础上,那么有一部份患者实际上是不需要同意抗病毒医治的,而晚期抗原如PP67与活动性病症性感染周密相关,采纳晚期抗原如PP67作指标,那么能够使这一部份比例得以减少。
PP67检测可早于PP65抗原血症测定发觉CMV感染,其灵敏性也高于后者,且能及时发觉停药后感染复发的病例,对诊断CMV病很有效[19,20]。
2结语
CMV是疱疹病毒科B属的DNA病毒,正常人群中感染普遍,但多为隐性感染或病症轻微,有资料显示CMV感染者占发达国家人口的30%~70%,占进展中国家人口的90%~100%[2]。
由于肾移植术后,随着免疫抑制剂的应用,暗藏的CMV都将被激活。
血清CMV抗体检测CMVIgM在原发性感染初期不显现,CMVIgG滴度需升高4倍才成心义,一样用于监测移植前供、患者的CMV携带状况,而不用于CMV感染的初期诊断。
CMV抗原血症检测技术关于CMV活动性感染的诊断具有高度的灵敏性和特异性,同时对CMV病的发生还具有重要的预测意义,是一种经济可行的诊断方式。
定性PCR容易显现假阳性结果,而且不能区分CMV活动性感染和暗藏性感染,因此不适于CMV活动性感染的初期诊断。
定量PCR是目前较为公认的诊断CMV活动性感染的一项实验室技术,一样具有高度的灵敏性和特异性,PP67mRNA的监测是一项新的技术,该法有效、客观,能够准确反映CMV的活动状态,值得推行应用。
总之,CMV抗原血症测定法和定量PCR技术是目前诊断CMV活动性感染应用较广的两种检测技术,有研究说明两种方式检测结果具有良好的一致性(92%),其中阳性符合率67%,阴性符合率92%[9]。
两种方式的联合应用对监测CMV活动性感染、临床疗效及预后加倍客观、准确。
【参考文献】
[1]陈劲松,唐政.肾移植后肺部巨细胞病毒感染[J].肾脏病与透析肾移植杂志,2003,12(4):
397400.
[2]SchnitzlerMA,WoodwardRS,BrennanDC,etal.Theeffectsofcytomegalovirusserologyongraftandrecipientsurvivalincadavericrenaltransplantation:
implicationsfororganalloction[J].AmJKidneyDis,1997,29(3):
428434.
[3]SchnitzlerMA,LowellJA,HardingerKL,etal.TheassociationofcytomegalovirusseropairingwithoutcomesandcostsfollowingcadavericrenaltrausplantationpriortotheintroductionoforalganciclovirCMVprophylaxis[J].AmJTransplant,2003,3(4):
445451.
[4]AbbottKC,HypoliteIO,ViolaR,etal.HospitalizationsforcytomegalovirusdiseaseafterrenaltransplantationintheUnitedStates[J].AnnEpidemiol,2002,12(6):
402409.
[5]李敏,季育华.监测HCMV活动性感染的一种新方式—HCMVPP65抗原血症检测[J].中国免疫学杂志,2002,18(6):
439441.
[6]EganJJ,BarberL,LomaxJ,etal.Detectionofhumancytomegalovirusantigenaemia:
arapiddiagnostictechniqueforpredictingcytomegalovirusinfection/pneumonitisinlungandhearttranspiantrecipients[J].Thorax,1995,50
(1):
913.
[7]MeyeKonigU,SerrA,etal.Humancytomegalovirusimmediateearlyandlatetranscriptsinperipheralbloodleukocytes:
diagnosticvalueinrenaltransplantrecipients[J].JInfectDis,1995,171(3):
705709
[8]安菁,申昆玲,吴敏媛,等.白血病患儿巨细胞病毒感染的PCR与抗原检测方式比较[J].中华微生物学和免疫学杂志,2000,20
(1):
7478.
[9]严晓敏,唐勤,陈明,等.荧光定量PCR和外周血白细胞PP65抗原血症实验对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测[J].江苏医药,2003,29(12):
890892.
[10]TongCY,CuevasL,WilliamsH,etal.Useoflaboratoryassaystopredictcytomegalovirusdiseaseinrenaltransplantrecipients[J].ClinMicrobiol,1998,35(9):
26812685.
[11]罗光华,叶青,高锦声.定量PCR检测巨细胞病毒在肾移植中的应用[J].国外医学临床生物化学与查验学分册,2001,22
(1):
3435.
[12]RobertsTC,BrennanDC,BullerRS,etal.Quantitativepolymerasechainreactiontopredictoccurrenceofsymptomaticcytomegalovirusinfectionandassessresponsetoganciclovirtherapyinrenaltransplantrecipients[J].JInfectDis,1998,178(3):
626635.
[13]RazonableRR,vanCruijsenH,BrownRA,etal.Dynamicsofcytomegalovirusreplicationduringpreemptivetherapywithoralganciclovir[J].JInfectDis,2003,187(11):
18011808.
[14]HumarA,KumarD,BoivinG,etal.Cytomegalovirus(CMV)virusloadkineticstopredictrecurrentdiseaseinsolidorgantransplantpatientswithCMVdisease[J].JInfectDis,2002,186(6):
829833.
[15]许贤林,叶启发,何小舟.RealtimePCR动态检测巨细胞病毒在肾移植术后的临床应用[J].中国现代医学杂志,2005,15(7):
10421045.
[16]刘东,郑克立.肾移植术后HCMV感染的临床流行病学研究[J].广州医药,2001,32(5):
79.
[17]张泓,武大林,吴涛,等.肾移植术后排斥反映与巨细胞病毒感染有关[J].中国现代医学杂志,2002,12
(2):
2122.
[18]PangXL,ChuiL,FentonJ,etal.ComparisonofLightCyclerbasedPCRCOBASamplicorCMVmonitorandPP65antigenemiaassaysforquantitativemeasurementofcytomegalovirusviralloadinperipheralbloodspecimensfrompatientsaftersolidorgantransplantation[J].JClinMicrobiol,2003,41(7):
31673174.
[19]CaliendoAM,StGeorgeK,AllegaJ,etal.Distinguishingcytomegalovirus(CMV)infectionanddiseasewithCMVnucleicacidassays[J].JClinMicrobiol,2002,40(5):
15811586.
[20]GernaG,BaldantiF,LilleriD,etal.Humancytomegaloviruspp67mRNAemiaversuspp65antigenemiaforguidingoreemptivetherapyinheartandlungtransplantrecipients:
aprospectiverandomizedcontrolledopenlabeltrial[J].Transplantation,2003,75(7):
10121019.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 移植 术后 巨细 病毒感染 初期 检测 方式