实验室生物安全标准操作规程.docx

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实验室生物安全标准操作规程

实验室生物安全标准操作规程

ZHCADC-PGC-2015

（第二版）

受控状态：

Y□N□

受控编号：

持有人：

2015年1月11日发布2015年1月20日实施

哈尔滨市动物疫病预防控制中心

实验室生物安全标准操作规程（SOP）

ZHCADC-PGC-2010

修订表

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第1版第0次修订

2010年1月11日发布/1月20日实施

修订表

版号

规程号

修订次序

修订内容

批准

日期

实验室生物安全标准操作规程（SOP）

ZHCADC-PGC-2010

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第1版第0次修订

2010年1月11日发布/1月20日实施

目　录

ZHCADC-PGC01-2010

BSL-2实验室个人防护装备的总体要求

ZHCADC-PGC02-2010

实验室人员进出实验室

ZHCADC-PGC03-2010

实验室检测样品采集

ZHCADC-PGC04-2010

实验室检测样品包装和运送

ZHCADC-PGC05-2010

实验室检测样品接收

ZHCADC-PGC06-2010

样品检测操作规程

ZHCADC-PGC07-2010

电气设备操作规程

ZHCADC-PGC08-2010

实验室消毒剂配制标准操作规程

ZHCADC-PGC09-2010

无菌间使用标准操作规程

ZHCADC-PGC10-2010

实验室废弃物处理标准操作规程

ZHCADC-PGC11-2010

实验室消毒标准操作程序

ZHCADC-PGC12-2010

实验室意外事故处理

实验室生物安全标准操作规程（SOP）

ZHCADC-PGC01-2010

实验室个人防护装备的总体要求

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2010年1月11日发布/1月20日实施

1目的

个人防护装备是减少操作人员暴露于气溶胶、喷溅物以及意外接种等危险的一个屏障。

为了实验人员的安全，以保证实验室人员的安全及实验室环境不被污染。

2适用范围

适用于生物安全实验室选用个人防护装备（防护口罩、防护手套、防护服与防护鞋）的质量控制。

3职责

实验室组织有关人员采购符合要求的个人防护装备，并且严格控制其质量。

4过程要求

实验室所用的个人防护装备应符合国家标准GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》。

在生物因子危害评估的基础上，按不同级别的防护要求选择适当的个人防护装备。

4.1防护口罩

根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》、GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》、《医用防护口罩技术要求》，生物安全实验室选用P2级的防护口罩，必须满足GB19083-2003以下条件：

（1）长方形口罩展开后中心部分尺寸：

长度不小于17cm、宽度不小于17cm；密合型拱形口罩尺寸：

横径不小于14cm，纵径不小于14cm。

（2）口罩表面不得有破洞、污渍；口罩带应调节方便，应有足够强度固定口罩位置。

每根口罩带与口罩体连接点的断裂强力应不小于10N。

（3）口罩滤料的颗粒过滤效率应不小于95％；经环氧乙烷灭菌的口罩，其环氧乙烷残留量应不超过10μg/g；不能从防护口罩中检出致病菌；口罩对皮肤无刺激。

4.2防护手套

实验室防护手套选择用国内生产的一次性乳胶手套和耐酸碱手套。

技术要求见国标GB7543-1996

实验室生物安全标准操作规程（SOP）

ZHCADC-PGC01-2010

BSL-2实验室个人防护装备的总体要求

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2010年1月11日发布/1月20日实施

4.3防护鞋及鞋套

防护鞋应该选择耐磨、防滑和舒适的合成材料制成的鞋类。

鞋套应为塑料材质制成，可防水、要求一次性使用。

4.4防护服

BSL-2实验室试验操作人员的防护服装主要选择一次性的连体防护服，通常选用国内厂商合格的防护服。

上下连体式，宜连鞋帽，无口袋、无横褶、腰带、接缝封缝、光洁。

发尘量小、不易发生纤维剥落、断丝；不易产生静电和粘附粒子；耐有机溶剂，透明度低、柔软、舒适、不妨碍动作。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）

ZHCADC-PGC02-2010

BSL-2实验室人员进出实验室

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2010年1月11日发布/1月20日实施

1目的

制定BSL-2实验室人员进出的标准操作程序，保障实验室生物安全。

2适用范围

适用于BSL-2实验室人员进出程序。

3职责

实验室工作人员执行本程序的规定。

各科室负责人负责监督执行。

4规程要求

4.1进入程序

4.1.1实验室人员需将外衣挂入休闲吧内，避免将外衣与工作服混放。

4.1.2实验室人员进入实验室前在人员位置示意图上做好标记，将自己的名字磁扣贴在欲达到的位置。

4.1.3实验室工作人员进入BSL-2更衣室，脱掉自已所穿鞋，放入外侧鞋柜内，转向内侧，从内侧鞋柜取出工作鞋换上。

4.1.4实验室工作人员进入更衣室，穿上医用白大褂或连体工作服。

4.1.5按要求戴手套，口罩等防护用品。

4.2退出程序

4.2.1试验结束后，实验室工作人员在实验室脱掉一次性口罩和一次性乳胶手套和一次性防护服，装入高压灭菌袋中。

4.2.2实验室工作人员先用0.5%新洁尔灭对手进行消毒，再用消毒肥皂洗手。

实验室工作人员在更衣室脱下医用白大褂，打开更衣室的紫外灯进行紫外消毒。

4.2.3实验室工作人员在更衣室脱掉工作鞋，放入内侧鞋柜，转向外侧，从外侧鞋柜中取出自己所穿鞋。

4.2.4实验室工作人员退出实验室后，将BSL-2实验室入口门关好，将人员示意图上标记复位，离开实验室。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）

ZHCADC-PGC03-2010

实验室检测样品采集

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1目的

为保障检测实验的顺利进行，规范采样程序，防止病原微生物在采样过程中产生污染。

2适用范围

适用于实验室样品的采集。

3职责

3.1采集检测样品的工作人员在采集过程中应当防止病原扩散，并对样本的来源、采集过程和处理方法等作详细记录。

3.2检验人员必须严格按照本操作规程操作，不可擅自做出超出本规程的操作，所有实验人员对所从事的工作负相应的责任。

4过程要求

4.1工作要求

采集和处理检测样品应当具备下列条件：

4.1.1具有采集、处理样品所需要的生物安全防护设备；

4.1.2具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员；

4.1.3具有有效的防止病原扩散的措施；

4.1.4具有保证检测样品质量的技术方法和手段。

4.2实验材料

准备灭菌的解剖器械（剪刀、镊子、手术刀、大刀、斧头等）、灭菌试管、平皿或自封袋、载玻片、棉签、营养肉汤、30%、50%甘油盐水缓冲液、加抗生素的PBS（病毒保存夜）、50％甘油磷酸盐缓冲液、酒精灯、灭菌注射器、15mL的离心管、1.5mLEP管、记号笔、签字笔、防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、铅笔、空白标签纸、胶布、75%酒精棉球、碘酒棉球、冰袋、冷藏容器、消毒药品、采样单等。

4.3活畜样品的采集

4.3.1血清样品的采集

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ZHCADC-PGC03-2010

实验室检测样品采集

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4.3.1.1采血方法

对采血部位的皮肤先剃（拔）毛，碘酊消毒，75%的酒精消毒，待干燥后采血。

采血方法推行生猪站立式前腔静脉、牛羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血，采血过程严格无菌。

4.3.1.2采血数量

单一病种抗体监测的每头（只）采集2～3mL全血，多病种抗体检测的每头（只）采集5～10mL全血。

4.3.1.3全血保存

采集好的全血转入盛血试管，斜面存放，室温凝固后直接放在盛有冰块的保温箱，送实验室。

从全血采出到血清分出的时间不超过10h。

4.3.1.4血清分离

凝固全血在室温2～4h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入4℃冰箱4～8h后，待大量血清析出时，吸出血清。

必要时经离心机3000rpm、30min离心，吸出血清。

分离的血清，一般不加防腐剂。

血清若在1～2周内即可检验，可放在4℃冰箱内保存；如果保存时间较长，应放在-20℃～-80℃冰箱内保存。

运送血清时可将血清放在盛有冰块的保温箱中运送。

4.3.2全血样品的采集

全血采集后应直接注入盛有抗凝剂的试管中，立即摇动，充分混合。

也可将全血液注入盛有玻璃珠的灭菌瓶中，立即连续振荡脱纤维蛋白。

4.4活禽样品的采集

咽喉拭子的采集：

将棉签插入喉头口及上颚裂处来回刮3～5次取咽喉分泌液，泄殖腔拭子的采集：

将棉签插入取泄殖腔转2～3圈并沾取少量粪便，再将咽喉拭子、泄殖腔拭子一并放入盛有0.8～1.0mL加有抗生素PBS的EP管中，加盖，编号。

4.5病死（屠宰）畜禽样品的采集

4.5.1解剖前检查

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ZHCADC-PGC03-2010

实验室检测样品采集

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2010年1月11日发布/1月20日实施

急性死亡的牛、羊、猪、马等动物，解剖之前应作临床检查，疑似炭疽病的应采血、镜检，排除炭疽病时，方可解剖。

动物死亡后应在6h内进行剖检。

解剖人员要做好自我防护工作。

4.5.2肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏样品的采集

在肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏有病变的部位各采取2～3cm3的小方块，分别置于灭菌的试管或平皿中。

其他畜禽采集整个心脏，置于自封袋中。

细菌分离样品的采集可用烧红的刀片烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后的铂金耳伸入孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检或划线接种于适宜的培养基上。

4.5.3脑、脊髓样品的采集

取脑、脊髓2～3cm3浸入50%甘油盐水中或将整个头部（猪、牛、马除外）割下，用消毒纱布包裹，置于不漏水的容器中。

4.5.4肠、肠内容物及粪便样品的采集

肠样品的采集：

选择病变最严重的部分，将其中的内容物弃去，用灭菌的生理盐水轻轻冲洗后，置于试管中。

肠内容物样品的采集：

烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取肠内容物，放入盛有30%甘油盐水中或者直接将带有粪便的肠管两端结扎，从两端剪断。

粪便样品的采集：

用棉签插到直肠黏膜表面采集粪便，然后将拭子放入盛有30%甘油盐水中。

4.5.5液体病料样品的采集

采集胆汁、脓、粘液、关节液、水泡液等样品时，用药物或烫烙法消毒采样部位，用灭菌吸管（毛细吸管、注射器）经消毒部位插入，吸取内部液体，然后将病料注入灭菌试管中，加盖。

也可用接种环经消毒部位插入，提取病料直接接种在培养基上。

4.5.6胎儿样品的采集

取流产后的整个胎儿，装入自封袋或不透水塑料薄膜中。

4.5.7皮肤样品的采集

用清水清洗病变皮肤后，取病变皮肤3～5g放入灭菌小瓶中，加适量50％甘油磷

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ZHCADC-PGC03-2010

实验室检测样品采集

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酸盐缓冲液（pH7.4），加盖密封。

4.5.8死（屠宰）禽样品的采集

死（屠宰）禽样品的采集除按上述方法采集，也可将整个死禽装入不透水塑料薄膜袋或自封袋中或其他容器内。

4.6组织样品采集完后的无害化处理

活畜禽、病死畜禽组织样品采集完后，应做好样品外包装和环境消毒以及病死畜禽及其产品的无害化处理。

4.7样品编号、抽样单填写

4.7.1样品编号

每头动物的不同部位的组织样品应单独包装。

包装好后，在样品袋或平皿外贴上标签，标签注明动物种类代号（Z表示猪，N表示牛，￥表示羊，J表示鸡，Y表示鸭，E表示鹅）、样品名称、样品编号、采样日期等，全市每种动物血清样品，每次单独包装，每种动物样品编号每月由1、2、3、4…阿拉伯数字连续编号。

4.7.2抽样单填写

同时填写动物血清和组织（拭子）抽样单、流行病学调查表、动物检测样品送检单和动物疫病预防控制中心接诊单。

动物血清和组织（拭子）抽样单一式三份，一份由被抽样单位保存、一份由送检单位保存、一份由检测单位保存（原始记录）。

动物检测样品送检单一式两份，一份由送检单位保存，一份由检测单位保存。

动物疫病预防控制中心接诊单一式两份，一份由送检单位保存，一份由检测单位保存（原始记录）。

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ZHCADC-PGC04-2010

实验室检测样品包装和运送

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2010年1月11日发布/1月20日实施

1目的

维护检测样品的质量，防止病原的泄漏和扩散，保障样品检测的顺利开展。

2适用范围

适用于检测样品的包装和运送。

3职责

3.1操作者必须严格按照本程序操作，不可擅自做出超出本程序的操作，所有实验人员对所从事的工作负相应的责任。

3.2实验室负有对样品包装、运输的监督和管理职责，并监督检查相关工作人员的安全工作程序和行为。

4过程要求

拟运输的样品，要求严密包装，外表加以消毒，编号、登记后，贴上“生物危险”标识，并严防标识脱落。

样品必须经三层包装。

4.1样品的包装

4.1.1内包装

4.1.1.1必须是不透水、防泄漏的主容器，保证完全密封。

4.1.1.2必须是结实、不透水和防泄漏的辅助包装。

4.1.1.3必须在主容器和辅助包装之间填充吸附材料。

吸附材料必须充足，能够吸收所有的内装物。

多个主容器装入一个辅助包装时，必须将它们分别包装。

4.1.1.4主容器的表面贴上标签，注明样品类别、编号、名称、数量等信息。

4.1.1.5相关文件，例如毒种或样本数量表格、危险性声明、信件、毒种或样本鉴定资料、发送者和接收者的信息等应当放入一个防水袋中，并贴在辅助包装的外面。

4.1.2外包装

4.1.2.1外包装的强度应当充分满足对于其容器、重量及预期使用方式的要求。

4.1.2.2外包装应当印上生物危险标识并标注“高致病性动物疫病病原微生物，非

专业人员严禁拆开！

”的警告语。

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ZHCADC-PGC04-2010

实验室检测样品包装和运送

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第1版第0次修订

2010年1月11日发布/1月20日实施

4.1.3包装要求

4.1.3.1液体或者固体样品

在辅助包装周围必须放置冰、干冰或者其他冷冻剂，或者按照规定将冷冻剂放在由一个或者多个完整包装件组成的合成包装件中，内部要有支撑物，干冰或者干冰消耗掉以后，仍可以把辅助包装固定在原位置上。

如果使用冰，包装必须不透水；如果使用干冰，外包装必须能排出二氧化碳气体；如果使用冷冻剂，主容器和辅助包装必须保持良好的性能，在冷冻剂消耗完以后，仍能承受运输中的温度和压力。

4.1.3.2冻干样品

主容器必须是火焰封口的玻璃安瓿或者是用金属封口的胶塞玻璃瓶。

在辅助包装周围还必须放置冰、干冰或者其他冷冻剂。

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ZHCADC-PGC05-2010

实验室检测样品接收

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第1版第0次修订

2010年1月11日发布/1月20日实施

1目的

规范接收检测样品，保证生物安全。

2适用范围

适用于送检样品的交接管理。

3职责

3.1接样室负责接收样品和接样的生物安全。

3.2检验室负责样品检测和检测样品的生物安全。

4过程要求

4.1检测样品由样品管理员统一接收，任何人不得直接对外承接检测样品。

4.2样品管理员在接收送检样品时应填写《检测业务委托协议》和《接收样品登记表》,并对样品进行符合性检查，检查包括：

（1）样品包装、标志及外观是否完好；

（2）对照抽样单核查样品的名称、采样地点、样品数量、性状等信息；

（3）样品是否损坏、污染或已过有效期。

4.3样品符合性检查后，样品管理员应作好样品登记，确定样品唯一性编号。

4.4业务办公室制样人员负责制备样品，将样品处理、分装备份。

对样品进行实验编号，应与原始编号一一对应，确保准确无误。

所有备份的样品要送至样品保存室进行登记保存。

4.5样品管理员进行样品符合性检查、标识、登记和制样后，应填写《检测任务书》和《样品流转卡》，并通知实验室领样检测。

4.6检测人员按检测内容，需要尽快检测的样品立即进行检测。

检验后的剩余样品交还样品管理员，按相应的保存条件，妥善保存。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）

ZHCADC-PGC06-2010

样品检测操作规程

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第1版第0次修订

2010年1月11日发布/1月20日实施

1目的

为规范样品的检测，特制定本规程。

2适用范围

适用不同待检样品的检测。

3职责

3.1实验室工作人员严格依照本规程进行样品的检测。

3.2实验室主任负责监督实验室工作人员样品的检测工作。

4过程要求

样品的检测方法应采用《作业指导书-检测标准》规定的方法。

5.相关文件

《作业指导书-检测标准》

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ZHCADC-PGC07-2010

电气设备操作规程

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2010年1月11日发布/1月20日实施

1目的

为规范实验室电气设备的使用和维护，特制定本规程。

2适用范围

适用于电气设备的操作和维护。

3职责

实验室工作人员严格依照本规程进行使用电器设备。

4过程要求

4.1实验室工作人员必须得到相应培训并予使用授权，必须具有熟悉仪器的性能、用途、使用方法等技能，严格按照使用说明书的要求，遵守仪器操作规程。

不得擅自操作任何授权以外的电气设备。

4.2使用仪器设备前必须先观察设备上的标志，绿色标签为表示该仪器设备处于正常工作状态，准许使用；黄色标签表示该仪器设备部分功能停用，此时只准使用允许使用的功能，不得超过规定使用范围；红色标签表示该仪器设备停用。

4.3仪器使用过程中发生故障必须立即停止使用，立即报告主任和行政办公室仪器设备维护负责人，及时查找原因，尽快排除，并登记。

4.4每日完成工作后必须对使用过的仪器设备按相关要求安全去污染，以减少其他使用人员和维护人员受化学或生物性污染的风险。

5相关文件

《作业指导书-仪器设备操作规程》（ZHCADC-ZYGC-2010）

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ZHCADC-PGC08-2010

实验室消毒剂配制标准操作规程

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2010年1月11日发布/1月20日实施

1目的

规范实验室消毒剂配制，保证消毒液的有效性和实验室生物安全。

2．适用范围

适用于BSL-2实验室常用消毒剂的配制。

3．职责

实验室工作人员负责常用消毒剂的配制，保证所需消毒剂的供应，实验室主任负责监督。

4．过程要求

4.1消毒剂配制

4.1.1配制前，实验室工作人员应洗净配制容器及量具，自然晾干。

按试剂配制的配方和配质量量取所需药品。

按配制要求的先后顺序加入药品，搅拌均匀配制试剂。

4.3配制过程产热的试剂待自然冷却后分装，并将填写好品名、浓度、配制时间、有效期的标签贴于盛装容器上。

做好配制记录。

常用消毒剂的配方及注意事项见下表1。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）

ZHCADC-PGC08-2010

实验室消毒剂配制标准操作规程

第2页共2页

第1版第0次修订

2010年1月11日发布/1月20日实施

表1常用消毒剂种类和配制方法表

消毒剂名称

用途

配制方法

备注

0.2%新洁尔灭

手消毒，仪器表面消毒等

量取5%新洁尔灭溶液100mL置于配制容器中，加入2400mL纯化水搅拌混匀。

2%NaOH溶液

原位消毒

称取20gNaOH固体，缓慢加入纯化水定容到1000mL。

强碱pH值大于13

75%乙醇

手表面消毒

取750mL无水乙醇加纯化水定容到1000mL。

15%~18%过氧乙酸

实验室薰蒸消毒

冰醋酸∶H2O2∶浓H2SO4按体积比140.0∶60.0∶2.1配制。

根据需要量分别量取所需的过氧化氢、冰醋酸和浓硫酸。

置于配制容器中搅拌均匀。

使用时可加入催化剂高锰酸钾或加热。

配制好的过氧乙酸需室温放置48h后使用。

超过20%的过氧乙酸会发生爆炸。

一周内用完。

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ZHCADC-PGC09-2010

无菌间使用标准操作规程

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2010年1月11日发布/1月20日实施

1目的

确保无菌室环境的无菌状态，特指定本规程。

2适用范围

适用于无菌间空气微生物监测。

3职责

3.1实验室工作人员负责实验室空气微生物监测。

3.2实验室主任监督实验室工作人员实施。

4过程要求

4.1实验室工作人员在进无菌间之前，应先用2%石碳酸或来苏尔对手进行浸泡消毒。

4.2缓冲间在每次使用前，应先打开紫外灯，紫外照射30min；工作人员在进入无菌室前，必须于缓冲间内更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。

检验用的有关器材（待检品除外），搬入无菌室前必须分别进行灭菌消毒。

4.3将无菌间和生物安全柜的紫外灯打开照射30min后，才能进行工作。

4.4实验完毕后，用0.2%新洁尔灭消毒液擦拭生物安全柜台面，打开生物安全柜内紫外灯，照射30min。

同时无菌间和缓冲间的紫外灯一并打开，照射30min。

4.5工作人员在缓冲间脱下工作服、工作帽及工作鞋。

4.6每月应对无菌间进行一次熏蒸消毒。

每月用新洁尔灭消毒液擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。

4.7每月应对无菌间进行一次无菌检查记录

4.7.1营养琼脂平板的制备

按营养琼脂说明书配制营养琼脂，120℃15min高压灭菌后，冷却到50℃左右倾倒于9cm