GUIDEVET04实验动物的疼痛与痛苦的识别和缓解制度.docx
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GUIDEVET04实验动物的疼痛与痛苦的识别和缓解制度
SMP:
实验动物的疼痛与痛苦的识别和缓解制度
制定人:
贾敏、张圣香
制定日期:
2008年4月1日
审核人:
查若鹏
审核日期:
2008年4月12日
批准人:
闻丹忆
批准日期:
2008年4月31日
存档人:
狄怡乐
存档日期:
2008年4月31日
分发名单:
质量保证部门(原始档案)
所有SMP手册
1.0目的
为了遵循动物福利法、人道的对待实验动物,对实验操作做出指导。
2.0范围
此SMP适用于所有试验人员、兽医和麻醉剂管理人员。
3.0参考文献
3.1《实验动物管理条例》
3.2《麻醉剂管理条例》
3.3《Thedevelopmentofscience–basedguidelinesforlaboratoryanimalcare》
3.4AmericanCollegeofLaboratoryAnimalMedicine.1997.AnesthesiaandAnalgesiainLaboratoryAnimals.D.F.Kohn,S.K.Wixson,W.J.WhiteandG.J.Benson,eds.AcademicPress.
3.5NationalResearchCouncil.2000.DefinitionofPainandDistressandReportingRequirementsforLaboratoryAnimals.
3.6Wolfensohn,S.andM.Lloyd,1998.HandbookofLaboratoryAnimalManagementandWelfare,SecondEdition.BlackwellScience,Oxford.334pp.
3.7RecognitionandAlleviationofPainandDistressinLaboratoryAnimals.NRC.1992.
4.0内容
4.1疼痛与止痛
●外科手术或具侵略性的实验对动物会产生疼痛而导致一系列的生理反应,严重时会影响实验结果。
站在人道的立场,可以在不影响实验结果的条件下,于手术后24-72h内给予止痛剂注射。
一般可以给予下列药物作止痛、消炎的处理:
✧抗休克的类固醇
✧麻醉性镇痛剂
✧非类固醇类抗炎症药物
●小鼠在实验过程中的疼痛评价与止痛措施:
疼痛程度
评估项目
轻微
中等
严重
体重
体重
体重减少原体重的10%以下
体重减少原体重的10~25%
体重减少原体重的25%以上
外观
身体姿势
短暂弓背,特别是投药后
间歇性弓背
持续性弓背
毛发竖起情形
部分毛发竖起
明显皮毛粗糙
明显皮毛粗糙,并伴随其他症状如弓背、迟钝反应及行为
临床症状
呼吸
正常
间歇性呼吸异常
持续性呼吸困难
流延
短暂的
间歇性弄湿下额皮毛
持续性弄湿下额附近的皮毛
震颤
短暂的
间歇性
持续性
痉挛
无
间歇性(每次10min以下)
持续性(若每次超过10min以上,则建议安乐死)
沉睡、卧倒
无
短暂的(1h以下)
持续1h以上(若每次超过3h以上,则建议安乐死)
无刺激时一般行为
社会化行为
与群体有对等的互动
与群体互动较少
没有任何的互动行为
对刺激的反应
受刺激时行为反应
变化不大
受刺激时也压抑行为反应(如被人捉抓时)
对刺激或外部行为无任何反应
止痛措施
继续观察,至逐渐恢复正常
给予止痛剂
无法解除疼痛,采取安乐死
●大鼠在实验过程中的疼痛评价与止痛措施:
疼痛程度
评估项目
轻微
中等
严重
体重(不包含暂时性体重减轻)
体重
体重减少少于原体重10%
体重减少少于原体重10~25%
体重减少少于原体重25%以上
食物/饮水消耗
72h内仅摄食正常量的40-75%
72h内摄食低于正常量的40%以下
7天内摄食低于正常量的40%,或食欲不振超过72h
外观
身体姿势
短暂弓背,特别是投药后
间歇性弓背
持续性弓背
毛发竖起情形
部分毛发竖起
明显皮毛粗糙
明显皮毛粗糙,并伴其他症状如弓背、迟钝反应及行为
临床症状
呼吸
正常
间歇性的呼吸异常
持续性的呼吸困难
流延
短暂的
间歇性弄湿下额皮毛
持续性弄湿下额附近的皮毛
震颤
短暂的
间歇性的
持续性的
痉挛
无
间歇性的(每次10min以下)
持续性的(若每次超过10min以上,则建议安乐死)
沉睡、卧倒
无
短暂的(1h以下)
持续超过1h以上(若每次超过3h以上,则建议安乐死)
无刺激时一般行为
社会化行为
与群体有对等的互动
与群体互动较少
没有任何的互动
对刺激的反应
受刺激时行为反应
变化不大
受刺激时会有较少的反应(如:
被人捉抓)
对刺激或外部行为无任何的反应
止痛措施
继续观察,至逐渐恢复正常
给予止痛剂
无法解除疼痛,采取安乐死
●疼痛是一种精神紧张因子,如果不能缓解,就会导致动物无法承受的精神紧张和痛苦。
对研究用的动物适当使用麻醉剂和镇痛剂,在伦理学和科学方面都是必不可少的。
4.2麻醉
●浅(不完全)麻醉:
应用麻醉药物使动物入睡,反射活动降低或部分消失,肌肉微松弛;
深(完全)麻醉:
应用麻醉药物使动物呈深睡状态,反射消失及肌肉松驰。
后者多用于身体状况良好,手术实验复杂的情况。
●全身麻醉前准备
在实施全身麻醉时,以下几个问题不容忽视:
✧动物禁食10~12小时。
不能少于8小时。
✧麻醉前不能使用泻剂。
因为泻剂可导致降低血液的碱储,从而增加血流和组织的酸度,在麻醉和失血情况下,易发生酸中毒并能降低损伤组织的抗感染能力。
✧麻醉后的动物必须保持气道的通畅和组织(眼球、舌、肠等器官)的营养。
所以依具体情况准备滴眼液、湿毛巾、温的生理盐水等。
✧若犬做长时间,实验前1小时应灌肠排除积粪。
✧检查麻醉剂质量、数量是否满足要求,麻醉保定器具是否有破损(漏气或堵塞),有关麻醉中毒急救品和器材是否准备齐妥,以应急需。
●麻醉的分期
第一期:
无痛期动物开始失去知觉
第二期:
兴奋期呼吸急促、狂乱或吼叫、对刺激非常敏感。
第三期:
手术麻醉期分四节,一、二节最适合手术。
第四期:
休克死亡期呼吸、心跳几乎停止,1~5分钟内可能死亡。
第三期的第三、四节是动物接近死亡的高危险期,此时必须暂停手术进行急救,否则动物一旦进入四期休克就可能死亡。
●麻醉各期的生理变化:
麻醉期
呼吸
瞳孔
眼球转移
反射
肌肉张力
脉搏血压
第一期
规则
正常
随意
存在
正常
升高
第二期
不规则
扩张
不随意
存在
激动紧张
升高
第三期
第一节
(轻度)
深度、
速度增加
收缩
不随意或
固定不动
眼结膜、
咽喉
轻微松弛
正常
第二节
(中度)
正常
正常
固定不动
咽喉
中度松弛
正常
第三节
(深度)
深度、
速度降低
轻微扩张
固定不动
无
轻微松弛
脉搏不振、血压下降
第四节
(过量)
腹式呼吸
中度扩张
固定不动
无
固定不动
脉搏、血压下降
休克死亡期
腹式呼吸
轻度扩张
固定不动
无
固定不动
脉搏、血压为零
●动物麻醉的方法有全身麻醉、局部麻醉、针刺麻醉、复合麻醉、低温麻醉等。
一般实验室所采用的大部分是全身麻醉(吸入麻醉和非吸入麻醉)。
●吸入麻醉:
常用的吸入麻醉剂有乙醚、氟脘、甲氧氟脘、氯仿等。
乙氟烷的吸入麻醉:
✧乙氟脘无色透明,极易挥发,特殊气味,易燃易爆,须保存于暗色容器中置阴凉处。
✧操作:
连接蒸发器,气体流量计和呼吸环形管,将连接好的该套装置放在通风良好处进行操作。
灌注麻醉剂:
●确定蒸发器上的控制刻度盘保持在“OFF”位置,逆时针旋开填充盖,并确保排出的栓子处于关闭状态。
●缓慢倒入异氟烷麻醉剂,通过安装在侧面的玻璃视镜观察麻醉剂的量。
●顺时针旋上填充盖,确保旋紧已防泄漏。
启动蒸发器
●推下控制刻度盘旁边的锁定杠杆。
●逆时针方向旋动控制刻度盘,调至理想浓度。
●打开异氟烷麻醉剂的排出栓子,蒸气流量开始在刻度盘上越过“0”刻度做轻微的移动。
设置气体流量计
●打开氧气钢瓶上的控制阀门,确保氧气流入气体环管内。
●弹出流量计上的阀门,顺时针旋动,调至理想压力。
将动物的头部放在呼吸环管口进行麻醉,当动物角膜反射迟钝、肌紧张降低,将动物移走,进行相应的实验操作。
若动物逐渐开始恢复肌紧张(重新挣扎)则重复麻醉一次,待平静后即可进行验。
实验完成后,关闭氧气钢瓶的控制阀门,将流量计上的阀门及蒸发器上的控制刻度盘归零,并关闭异氟烷麻醉剂的排出栓子。
CO2混合气体(VCO2/VO2=3/2)的吸入麻醉:
✧少量动物使用透明的小PC盒或透明小箱子进行麻醉,大量动物则使用大PC盒进行。
如果需要麻醉的动物数量众多,则需将动物分批进行麻醉,不可使动物堆叠于PC盒内进行。
✧操作:
将动物放入PC盒内,打开压力阀,以0.02-0.04KPa的压力差灌注混合气体1-2min,至动物自行倒下。
当动物角膜反射迟钝、肌紧张降低,即可关闭阀门,取出动物。
若动物逐渐开始恢复肌紧张(重新挣扎)则重复麻醉一次,待平静后即可进行实验。
●非吸入麻醉
非吸入麻醉的给药常用注射方法,如静脉注射、肌肉内注射、皮下注射、腹腔内注射等。
常用的麻醉剂如下:
✧巴比妥类:
巴比妥钠是最常用的一种动物麻醉剂,麻醉潜伏期短,维持时间较长。
既可腹腔内注射,又可以静脉注射,一般用生理盐水配制。
操作:
用该药麻醉时,中型动物多为静脉给药,也可腹腔给药,小型动物多为腹腔给药。
先一次推入总量的2/3,待观察动物的行为,若已达到所需的麻醉深度,则不一定全部给完所有药量。
动物的健康状况、体质、年龄、性别也影响给药剂量和麻醉效果,因此实际麻醉动物时应视具体情况对麻醉剂量进行调整。
✧氯胺酮:
国家管制药。
该麻醉剂注射后很快使动物进入浅睡眠状态,但不引起中枢神经系统深度抑制,所以一些保护性反射仍然存在,麻醉的安全性相对高,是一种镇痛麻醉剂。
一般多用于犬、猫等动物的基础麻醉。
本品能迅速通过胎盘屏障,影响胎儿,所以用于怀孕动物时需慎重。
虽然高剂量注射时,也可使动物死亡,但由于死亡前动物常呈现疼痛及抽搐现象,因此只用于动物的一般性保定、镇定、止痛及麻醉,不能作为动物安乐死用药剂。
●实验麻醉并发症的预防和急救
实验过程中因麻醉深度或其它因素影响,可导致一些可见的临床表现,实验人员应及时加以处理。
✧呼吸停止
呼吸停止常因舌回缩、呼吸被抑制、机体机能衰竭或用药过量等因素造成呼吸困难,甚至呼吸停止。
呼吸停止的表现是胸廓呼吸运动停止、粘膜发钳、角膜反射消失或极低、瞳孔散大等。
呼吸停止的初期,可见呼吸浅表、频数不整而且间歇。
此时必须停止供给麻醉剂,先张开动物口腔,拉出舌尖到口角外,输氧同时,应用心脏和呼吸兴奋药,如0.1%肾上腺素、可拉明、科第阿明等。
✧心跳停止
心搏停止多因机体机能衰竭、药物过敏或麻醉药过量等因素引发。
解救药有安钠咖、肾上腺素(兴奋心搏)、地塞米松(抗过敏)和麻醉药的拮抗剂。
吸入氯仿、乙醚时,有时于麻醉初期出现反射性心跳停止,通常是由于剂量过大的原因。
还有一种情况,就是手术后麻醉剂所致的心脏急性变性,心功能急剧衰竭而停跳。
心跳停止的到来可能无预兆。
呼吸和脉博突然消失,粘膜发钳。
心跳停止应迅速采用心脏按摩,即用掌心(小动物可用指心)在心脏区有节奏地敲击胸壁,其频率相当于该动物正常心脏收缩次数。
同时,心室注射强心剂0.1%肾上腺素。
5.0培训要求
要求所有的实验人员和IACUC成员都必须进行该管理政策的培训。
6.0附件
7.0修订记录
修订内容
修订人及修订日期
审核人及审核日期
批准人及批准日期
增加文献、更改格式
贾敏,2009-06-12
杨伟敏、JoeZhang
2009-06-24
DanyiWen
2009-08-06
备注:
改由实验动物设施总兽医—贾敏进行统一存档。
2009-06-09
- 配套讲稿:
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- GUIDEVET04 实验 动物 疼痛 痛苦 识别 缓解 制度