不同产地黄柏药材中4种要紧生物碱类成份的含量测定.docx
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不同产地黄柏药材中4种要紧生物碱类成份的含量测定
不同产地黄柏药材中4种要紧生物碱类成份的含量测定
作者:
范积平,张贞良,廖晓玲
【摘要】目的成立不同产地黄柏药材中4种要紧生物碱类成份的含量测定方式。
方式采纳高效液相色谱法,色谱柱为DiamonsilC18(250mm×mm,5μm),流动相为乙腈%三乙胺(梯度洗脱),流速为mL·min-1,柱温为25℃,检测波长为284nm,同时测定黄柏药材中黄柏碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的含量。
结果4种成份均能达到基线分离,线性良好。
不同产地黄柏药材中4种要紧生物碱类成份的含量不同较大,产自四川泸州黄柏中的黄柏碱、甘肃武都黄柏中的药根碱、广西桂林黄柏中的巴马汀、四川雅安黄柏中的小檗碱含量别离为最高。
结论本方式操作简便、结果准确、重现性好,适用于黄柏药材中4种要紧生物碱类成份的含量测定。
【关键词】高效液相色谱法;黄柏;生物碱;黄柏碱;药根碱;巴马汀;小檗碱;含量测定
Abstract:
ObjectiveToestablishasimultaneousdeterminationmethodforfourmainalkaloidsinCortexPhellodendriChinensisfromdifferenthabitatsbyHPLC.MethodsHPLCwasperformedonDiamonsilC18column(250mm×mm,5μm)withacetonitrile%triethylamineasmobilephase(gradientelution)ataflowrateofmL·min-1.Thecolumntemperaturewasmaintainedat25℃andthedetectivewavelengthwassetat284nm.Thecontentsofphellodendrine,jatrorrhizine,palmatineandberberineweredeterminedAllthefouralkaloidsachievedbaselineseparationwithgoodlinearity.ThecontentsofthefourmainalkaloidsinCortexP.Chinensisfromdifferenthabitatsvariedsignificantly.Respectively,thecontentsofphellodendrineinCortexP.ChinensisfromLuzhouofSichuan,jatrorrhizineinthosefromWuduofGansu,palmatineinthosefromGuilinofGuangxi,andberberineinthosefromYaanofSichuanwereThismethodissimple,reliableandrepeatable,andissuitableforthedeterminationofmainalkaloidsinCortexP.Chinensis.
Keywords:
HPLC;CortexPhellodendriChinensis;alkaloids;phellodendrine;jatrorrhizine;palmatine;berberine;determination
黄柏为经常使用中药,具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮之功效,始载于《神农本草经》,原名“檗木”,列为上品,味苦,寒,无毒[1],其后历代本草均有记载。
《中国药典》1963~2000年版均有收载,其来源有两种,即:
关黄柏,芸香科植物黄檗(PhellodendronamurenseRupr.)的干燥树皮;川黄柏,芸香科植物黄皮树(PhellodendronchinenseSchneid.)的干燥树皮[2]。
《中国药典》2005年版将以上两种来源药材别离收载,列为两种药材,后者为通常所称的“黄柏”[3]。
黄柏临床应用十分普遍,现代药理学研究说明其具有抗病原微生物、抗溃疡、降压、抗心律失常等作用[4]。
黄柏中的要紧活性部位为生物碱类化合物,包括小檗碱、巴马汀、药根碱和黄柏碱等要紧成份[5],其中小檗碱、巴马汀、药根碱为抗病原微生物的有效成份,药根碱有抗心律失常作用,而降压作用那么与黄柏碱有关[4]。
有报导采纳高效液相色谱法测定黄柏中上述部份生物碱的含量[6~8],但未见同时测定之报导。
本文采纳HPLC法同时检测此4类生物碱成份的含量,测定并比较了12个不同产地的黄柏药材中的生物碱含量,为更好地操纵黄柏药材及其制剂的质量提供了参考依据。
1仪器与试药
1100型高效液相色谱仪,包括VWD检测器等(美国Agilent公司);250B型超声波清洗仪(江苏昆山市超声仪器有限公司);PHS3C型PH计(上海雷磁仪器厂);CP225D型电子天平(德国Sartorius公司)。
盐酸小檗碱(批号7139906)、盐酸巴马汀(批号7329604)、盐酸药根碱(批号7339203)购自中国药品生物制品检定所,盐酸黄柏碱(经面积归一化法计算,含量为%,可作为含量测定用)购自天津马克生物技术有限公司。
黄柏药材在四川、广西、重庆等地搜集,搜集时刻为9~10月,经第二军医大学郑汉臣教授鉴定为芸香科植物黄皮树PhellodendronchinenseSchneid.的干燥树皮。
乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。
2方式与结果
色谱条件
色谱柱为DiamonsilC18柱mm×250mm,5μm,Dikma);流动相:
乙腈(A)、%三乙胺(磷酸调pH至(B),梯度洗脱(0~10min,15%A~28%A;10~18min,28%A;18~20min,28%A~15%A);流速:
mL·min-1;运行时刻:
20min;柱温:
25℃;检测波长:
284nm;进样量:
20μL。
溶液的制备
对照品贮备液的制备周密称取盐酸黄柏碱对照品mg、盐酸药根碱对照品mg、盐酸巴马汀对照品mg、盐酸小檗碱对照品mg,别离置4个10mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释到刻度,作为对照品贮备液。
混合对照品溶液的制备取以上4种对照品贮备液适量,混合后别离取适量置6个容量瓶中,别离加入乙腈pH为的磷酸(体积比1∶1)稀释成不同浓度的一系列混合对照品溶液,使所含黄柏碱的质量浓度别离为、、、、、μg·mL-1;药根碱的质量浓度别离为、、、、、μg·mL-1;巴马汀的质量浓度别离为、、、、、g·mL-1;小檗碱的质量浓度别离为、、、、、g·mL-1。
供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约g,周密称定,置50mL容量瓶中,加乙腈pH为的磷酸(体积比1∶1)40mL,超声处置60min,放冷,用乙腈pH为的磷酸(体积比1∶1)稀释至刻度,摇匀,滤过。
取续滤液过μm微孔滤膜,即得。
系统适应性实验
周密吸取“项下混合对照品溶液(含黄柏碱g·mL-一、药根碱g·mL-一、巴马汀g·mL-一、小檗碱g·mL-1)20μL,按“”项下色谱条件进行测定,记录色谱图。
黄柏碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的保留时刻别离为、、、min。
见图1。
线性关系考察
取“项下混合对照品溶液,按“”项下色谱条件测定,记录色谱图。
以峰面积积分值(Y)对进样量(X)进行线性回归,计算得回归方程。
4种生物碱类成份的线性关系考察结果见表1。
表14种生物碱类成份的线性关系考察结果
Table1Linearrelationsof4alkaloids(phellodendrine,jatrorrhizine,palmatineandberberine)
生物碱类成份回归方程相关系数(r)线性范围/ng黄柏碱Y=~1051药根碱Y=~巴马汀Y=+~小檗碱Y=~10375
周密度实验
取“项下混合对照品溶液(黄柏碱g·mL-一、药根碱g·mL-一、巴马汀g·mL-一、小檗碱g·mL-1),重复进样6次,记录色谱图。
结果黄柏碱、药根碱、巴马汀和小檗碱峰面积的RSD别离为%、%、%、%,说明仪器周密度良好。
重复性实验
周密称取同一批样品,按“项下方式制备供试品溶液,平行操作6份,别离测定,记录色谱图。
结果,黄柏碱、药根碱、巴马汀和小檗碱峰面积的RSD别离为%、%、%、%,说明本方式重复性良好。
稳固性实验
取上述供试品溶液,室温下放置,别离于0、一、二、4、八、1二、24h进样测定,记录色谱图。
结果黄柏碱、药根碱、巴马汀和小檗碱峰面积的RSD别离为%、%、%、%,说明供试品溶液在室温条件下放置24h稳固性良好。
加样回收率实验
周密称取已知含量的同一批黄柏药材粉末g,共6份,别离周密加入混合对照品溶液(黄柏碱g·mL-一、药根碱g·mL-一、巴马汀g·mL-一、小檗碱g·mL-1)适量,按“项下方式制备供试品溶液,按“”项下色谱条件进样,记录色谱图。
结果黄柏碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的平均加样回收率别离为%(RSD=%)、%(RSD=%)、%(RSD=%)、%(RSD=%)。
样品测定
取不同产地的黄柏药材样品,按“项下方式制备供试品溶液,按“”项下色谱条件进行测定,每一个产地平行3份,计算含量。
结果见表2。
表2样品中4种生物碱类成份的含量测定结果
3讨论
依照文献报导[5],生物碱类是黄柏药材的要紧活性成份,其中小檗碱含量最大,因此检测小檗碱的含量一直是黄柏药材及其制剂质量操纵的重要指标。
但是,关黄柏、黄连及其它非法定药材如三颗针(RadixBerberidis)、十大功劳(FoliumMahonicum)等,均富含小檗碱。
故仅以小檗碱含量评判黄柏药材及其制剂的质量,专属性有所欠缺。
而黄柏碱是黄柏的特点性成份,另黄柏碱、药根碱、巴马汀各自有其药理作用。
故在对黄柏药材及其制剂进行质量操纵时,除小檗碱外同时增加黄柏碱、药根碱、巴马汀的检测,是为有效补充。
同时对4者进行检测,也能更好地将黄柏与关黄柏加以区分。
在流动相的选择中,试探了不同的流动相体系的分离成效。
最终确信在水相中加入%的三乙胺,并将pH值调至,能将生物碱类成份在较短的时刻内进行有效分离,而且改善了峰形。
在前期测定波长考察进程中,以文献[6,7,9]道的345nm作为检测波长,发觉此波优势药根碱、巴马汀、小檗碱检测灵敏度高,但黄柏碱的吸收很弱;以220nm为检测波长时,黄柏碱有较强吸收,但前三者吸收变弱;而在284nm波优势4种成份的检测灵敏度均较高,应选用284nm为检测波长较为适宜。
本实验对来自不同产地黄柏药材中的4种要紧活性成份同时进行了测定。
结果,不同产地黄柏药材中4种要紧生物碱类成份的含量不同较大,产自四川泸州黄柏中的黄柏碱、甘肃武都黄柏中的药根碱、广西桂林黄柏中的巴马汀、四川雅安黄柏中的小檗碱含量别离为最高。
但不能仅以此结果简单地判定某地产的黄柏药材质量的好坏,因为黄柏药材中生物碱的含量与药材的采收期、原植物的生常年限等亦有关[10],其阻碍如何,有待进一步研究。
【参考文献】
[1]吴普,孙星衍.神农本草经[M].北京:
人民卫生出版社,1982:
43.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典:
2000年版一部[M].北京:
化学工业出版社,2000:
251-252.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典:
2005年版一部[M].北京:
化学工业出版社,2005:
214-215.
[4]肖培根.新编中药志(第3卷)[M].北京:
化学工业出版社,2002:
664-670.
[5]龚千锋.中药炮制学[M].北京:
中国中医药出版社,2003:
220-221.
[6]祝晨蔯,林朝展,莫建霞,等.HPLC法测定黄柏药材中小檗碱与黄柏碱的含量[J].中药新药与临床药理,2004,15(4):
262-264.
[7]马蓉蓉,唐意红,马春辉,等.HPLCUV同时测定不同产地黄柏中小檗碱和巴马汀的含量[J].黑龙江医药,2007,20(6):
560-562.
[8]夏荃,李灿明.HPLC测定黄柏生品与不同炮制品中3种生物碱的含量[J].中成药,2020,30(7):
1018-1021.
[9]吴杏卿,何瑞卿,李海燕,等.RPHPLC法测定固经丸中盐酸小檗碱的含量[J].广东药学院学报,2005,21(5):
530-531.
[10]徐敏,万德光.不同产地和生常年限川黄柏中小檗碱的含量测定[J].现代医药卫生,2007,23
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93.
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