AB液质操作规程.docx
- 文档编号:7445538
- 上传时间:2023-01-24
- 格式:DOCX
- 页数:6
- 大小:21.72KB
AB液质操作规程.docx
《AB液质操作规程.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《AB液质操作规程.docx(6页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
AB液质操作规程
第一部分开关机
AA、开机
1.打开UPS电源,打开氮气发生器(气瓶),确认Curtaingas的输入压力为0.4MPa,
gas1/2为0.7MPa,exhuast为0.4MPa。
2.打开机械泵电源开关(5500系列直接打开质谱主机电源,仪器自动启动机械泵)
3.等机械泵工作至少30min
5.打开质谱主机电源开关
6.过夜抽真空
BB、关机
1.停止输液:
关停针泵或液相泵,或断开输液管线(一般质谱主机Standby后液相系
统也自动待机,输液泵自动关停,但建议操作人员再次确认,必须保证没有任何液体
再泵入质谱)
2.使仪器待机,并灭活配置
2.关闭质谱仪主机电源开关(5500系列只需按下电源开关旁的VENT按键排放真空)
3.机械泵继续工作至少30min
4.关闭机械泵上的电源开关(5500系列会自动关停机械泵,待机械泵停止后即可关闭
5500系列主机上的电源开关)
5.关闭气体发生器或气瓶
第二部分调谐
1、PPG就是正离子校正液,PPG3000负离子调谐液,本台仪器只用两瓶校正液,正离子一瓶,负离子一瓶。
洗液一瓶50%的甲醇水。
调谐前先用洗液洗针两次。
吸校正液的时候慢慢吸,避免吸入气泡,吸好以后将针泵卡住。
再将高度调到5,将管路重新连接。
不再连接六通阀,由质谱直接进样,且将针泵的速度调到10μL/ml。
2、调谐液弄好后在仪器面板工具栏上:
TOOl→项目→创建项目。
此项目为一个文件夹,文件夹里面包括所有此次采集的信息,方法、序列等,且所有采集的项目都固定在一个文件夹下面:
D:
/AnalystData/Project。
新建项目的时候,弹出窗口中有个AddAll,可以创建文件夹。
3、联机:
软件打开后在左上方硬件配置(单机选中,双击打开)→只需选中仪器MS→activeprofile。
图标变为绿色,表示联机成功。
调谐只需要选中质谱。
仪器的实时状态可以点击右下方的图标,质谱和液相都是单独观察,质谱要注意真空度,为0.5.
4、调谐→手动调谐→项目(文件夹)选中下拉菜单中的Installation20161102(为系统默认的调谐文件夹),先Q1→startsyringpump(打开针泵)→start(质谱),开始采集以后观察基线是否平衡,若等两分钟还未平衡好,则手动将针泵往上抬。
5、平衡好后(基线平稳则为平衡好),重新进样,重新点击startsyringpump。
Resolution(分辨率)→advanced(高级选项)(看到结果后调节质量轴和分辨率做准备,只能先打开这个,再打开谱图)→实时质谱图右键→openfile→随便点一个框→软件上方的从谱图校正→PPG.POS(正离子)→start→出现三行:
(1、质量轴。
2、分辨率。
3、两次调谐的差异)→若质量轴有差异→右上角→yes→若分辨率飞离出虚线→offset(偏大调大,偏小调小)输入校正的数值,再重新进样,如此反复,直到点落在虚线以,实线代表最合适。
6、校正好后仪器会自动保存,直接关掉窗口即可。
负离子调谐和正离子调谐步骤一样,只是在选择方法的时候要注意选择负离子模式。
还有看结果时要选择PPG3000.此为负离子调谐液。
调谐因针泵流速很小,10μL/ml,所以不需要设定离子源温度及辅助气,直接设定喷雾器流速为50,就可以将样品雾化,气帘气也不需要设置,因为没有多余的溶剂需要吹走。
第三部分:
方法优化
1.在Analyst软件Tools菜单中选择Project→CreateProject。
在Projectname项下输入新建的Project名称。
注意,不要点选窗口中的其他按钮!
点击OK,确认新建Project。
2.在Analyst软件界面下,双击导航栏HardwareConfiguration。
在弹出窗口中选择MassOnly,点击ActivateProfile,激活MassOnly(只联接质谱主机)。
3.在导航栏单击TuneandCalibrate,进入调谐模式。
点击上方工具条中的T钮。
此时,应注意到主机有“扑”声音,表明进入调谐状态。
此时右下角质谱状态显示绿色。
双击ManualTuning,进入质谱参数设置及运行窗口。
4.使用1mL玻璃进样针吸取适当标准溶液,置于进样针座上。
点击MSMethod下拉菜单,选择SyringePumpMethod,设定针泵流速FlowRate为10μL/min。
5.点击StartSyringePump按钮开针泵进样。
6.返回MSMethod,选择扫描模式ScanType为Q1MS,设定扫描速度ScanRate为10Da/s,设定扫描围Start——Stop设定为50——化合物分子量。
DP预输入60。
7.点击start开始采集数据。
运行稳定后,注意观察是否有预期的母离子出现,并控制其响应值在约E4以下。
点击stop,选择第一个峰(后面是同位素峰)的平稳段,双击,选中母离子。
点击右键,选择DeletePane。
8.设定Scantype为产物离子扫描ProductIon(Ms2),扫描速度200Da/s,选择扫描正/负离子,输入母离子(productof),设定扫描围start——stop为50——MW+20,覆盖可能的子离子质量围,点击compoud标签,设定(DP)60,(CE)5。
9.点击start,开始采集数据,注意观察是否有预期的母离子出现。
手动调节CE,以5eV为步长,逐渐增加。
每次增加后稍作等待,直至目标化合物的子离子清晰看见。
选择平稳的一段,双击,选择子离子。
10.选择ScanType为MRM。
设定参数表格中的Q1对应的母离子,Q3对应的子离子,time(ms)为50,ID值设为名称1(定量),名称2(定性)。
11.点击EditRamp,在Parameter下选择CollisionEnergy,点击OK。
点击start开始采集数据,记录每个MRM通道的最佳CE电压。
在MRM参数设定表中,右键点击。
选择CollisionEnergyCE,调出表格中的CE列,输入每个MRM通道的最佳CE电压值,精确到个位数。
重复以上步骤,在Parameter项下选择DeclusteringPotential,优化并保存DP。
完成后选择菜单File/Save保存采样方法,[文件名].dam。
第四部分:
方法建立
一、LCMS方法的建立:
1、连接仪器:
打开HPLC质谱电源,将HPLC系统接上柱子,将6号出口管线与离子源连好。
调离子源喷雾针位置到2mm处,双击HardwareConfigure,在硬件配置菜单下单击LCMS(液相与质谱联用),单击Activateprofile激活仪器,会听到笛的一声,说明仪器已经连接上。
2、确认液质同步:
选择项目(之前优化方法的时候已经建立的项目);双击Buildacquisitionmethod新建方法,弹出新建方法模板。
在模板左侧点击acquisitionmethod,模板右边显示对应的参数,确认synchronizationmode选择LCSync,表示液质同步。
3、设置MRM参数:
点击方法模板左侧的MRM,在模板右侧ScanType下选择MRM;在polarity下选择化合物极性:
Positive(正离子)、Negative(负离子);Duration为15min(与液相分离相同的时间);表格中Q1:
母离子分子量,Q3(Da):
子离子分子量,Time(msec):
50,ID栏:
化合物名称(离子对名称后空格加1为定量,空格加2为定性),在表格中右键分别单击DP、CE,点击工具栏的OPEN打开之前优化的方法参数,调出DP,CE值,选中整行,Ctrl+c(复制)参数,关闭窗口,再Ctrl+v(粘贴)参数);最后点击Editparameter设置离子源参数:
Source/Gas项用以下推荐值:
CUR35,IS:
5500(正离子)或-4500(负离子),TEM600,GS160,GS270,点击OK。
4、设置液相参数:
点击模板左边的shimadzuLCsystem,①在右边的pumps栏下,设置stoptime(运行时间)为15min,flow流速为1mL/min,A为水相设为95%,B为有机相设为5%(设置时改B,A自动),泵最大压力为50;点击timeprogram设置液相梯度:
例咪唑类梯度设置:
Time(min)
A
B
---
95%
5%
5
5%
95%
10
5%
95%
10.1
95%
5%
15
95%
5%
②接着在右边的Autosampler栏下,设置清洗时间,在Rinsemode下选择Beforeandafter(前后都洗),并设置清洗时间为5s,清洗液用50%甲醇水。
最后点击保存按钮,在保存窗口输入该方法的名称。
二、建立批处理:
1、双击Buildacquisitionbatch,在右边窗口set栏为批处理保存的文件夹命名以便识别,再点击addset,最后点击addsample,再选择之前建立的LC-MS方法,在弹出的窗口的number(进样样品数)处填入需要进样的样品个数,点击OK。
2、在加入的样品列表依次填写samplename(样品名称)、viaposition(样品瓶的位置)、inj.volunme(进样体积:
一般5微升或10微升)。
3、在submit项下点击submit按钮以提交样品序列。
4、点击工具条上左上角的viewqueue按钮,可查看已提交的样品。
此时将仪器从校正状态退出,进入分析模式。
确认泵已打开,首次进样液相先排气,再平衡仪器:
先点击工具条上的equilibrate平衡按钮,在弹出的平衡窗口中输入平衡时间10min,点击ok。
右下角图标会变黄,待平衡结束后此处图标会变成绿色,此时即可点击startsample按钮采集样品信息,仪器会自动对已提交的全部样品进行采集。
第五部分数据处理
1.双击打开Multiquilt,选择项目,点击File下的荧光棒型图标,点击sample,选择需要的标准品和样品数据,点击next,createnewmethod,为方法命名,点击next,选择一个有代表性的样品(一般选择浓度较大的标品数据),设置分组(同一物质定量离子和定性离子设置为一组),并指定标,next,对每个物质进行积分。
2.设置积分参数:
a、CausianSmoth(平滑):
一般是0,如有毛刺可改成1或2;
b、ExpecetedTime(保留时间):
一般不动
c、Expectedtime围:
一般30s,表示在保留时间±15s围
d、最小峰宽
e、最小峰高
f、背景噪音扣除:
可调整目标峰基线以下被积分的面积,比例越高积分越往下,必要时调整。
g、分峰因子:
峰有分叉时设置,如有两个分叉,设置为2,峰分叉不能大于2
h、单位:
设置单位,勾选Applyunitstoall可将此单位用于所有化合物
点击next,点击finish。
在新跳出窗口将标准品选定,输入浓度。
查看各化合物积分是否正常,点击第三个图标查看标准曲线。
报告打印:
点击File,createreport,Reporttemplate(选择报告模板,一般用sample1和标线,标报告只能用sample1,2,3),命名,选择存储报告位置,点ok。
信噪比:
选择项目,双击opendatefile,点击sample,选择低浓度样品,点击ok,点击XIC,选择定量离子,点击ok,选中峰,按住shift,选峰附近的一段时间,点Script,点击S-To—N—Script,即可得到结果。
第六部分:
LC-MS离子阱原理及其应用
原理:
在进行多级质谱分析(MS-MS)时,首先限定目标质量的离子。
通过调整交变电压,将大于以及小于目标质量的离子射出,从而使得仅有一个质量的离子存在于离子阱中并将其富集。
目标质量的围被称为IsolationWidth。
之后通过向离子阱注入气体(通常为氦气或氮气),与离子发生碰撞使其被打成碎片。
操作方法:
首先在Analyst中打开一个成熟的MRM采样方法,然后右键单击AcquisitionMethod中的MRM,在弹出菜单中选择AddIDACriteriaLevel。
在新增的IDA-FirstLevelCriteria页面中设置相关逻辑选项(其中四项尤为重要)
1)Select“X”to“Y”mostintensepeaks,表示在多个组分色谱共流出时,指定触发最强的若干个母离子,“1to2”表示最强和次强的两个母离子,“1to3”表示最强和次强和第三位三个母离子,以此类推。
请注意,如果选择了“1to2”或“1to3”,则后续的EPI个数应调整为对应的两个或三个。
(一般选择两个以下)
2)AfterDynamicBackgroundSubtractionofSurveyScan,表示执行动态背景扣除,使得感兴趣的母离子都尽可能的获得触发EPI的机会。
该选项尤为重要,为必选项。
3)Excludeformertargetions。
在某些情况下,一次数据采集中,如果同一个MRM通道可能有几个不同保留时间的色谱法出现,那么应选择Never,表示所有色谱法都依次触发执行EPI。
4)Whichexceeds:
设定MRM信号强度阈值超过此阈值才会触发EPI。
通常为500或1000.
然后点选IncludeList激活强制触发的母离子。
Mass(Da)列输入需要的母离子质量数,RT(min)列输入该母离子的保留时间,Width(sec)列输入开放的保留时间窗口。
完成以上IDACriteria逻辑选项设定后,添加EPI方法。
首先,在IDACriteria上点击右键,在弹出菜单中选择Addexperiment。
软件会添加一个新的experiment,并自动与上一个MRM保持一致。
然后在ScanType处选择EnhancdeProductIon(EPI)。
设定离子阱扫描速度ScanRate为10000Da/s(根据自动调谐的参数设定)。
在右侧表设定二级质谱的扫描围(应包含母离子及子离子)。
点击EditParameters按钮,进入此EPI对应的离子源和化合物电参数的设定窗口(将CAD模式改为High,其余参数应与MRM保持一致)。
举例:
设定CE为35,CES为15,此处表示子离子扫描的碰撞能量为20、35、50三个值,即二级质谱为低中高三个碰撞能量所得的碎片离子混合图。
最后选择菜单File/Save保存现有采样方法。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- AB 操作规程