抗肿瘤药效学指导原则.docx
- 文档编号:735696
- 上传时间:2022-10-12
- 格式:DOCX
- 页数:11
- 大小:163.91KB
抗肿瘤药效学指导原则.docx
《抗肿瘤药效学指导原则.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《抗肿瘤药效学指导原则.docx(11页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
抗肿瘤药效学指导原则
抗肿瘤药效学指导原则
抗肿瘤药物药效学指导原则
(讨论稿)
1基本原则
抗肿瘤药物可分为:
(1)细胞毒类药物(cytotoxicagent):
包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等;
(2)生物反应调节剂(biologicalresponsemodifier);(3)肿瘤耐药逆转剂(resistancereversalagent);(4)肿瘤治疗增敏剂(oncotherapysensitizer);(5)肿瘤血管生成抑制剂(tumorangiogenesisinhibitor);(6)分化诱导剂(differentiationinducingagent);(7)生长因子抑制剂(growthfactorinhibitor);(8)反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide)等。
抗肿瘤药物的药效学包括体内外抗肿瘤试验,评价药物的抗癌活性时,以体内试验结果为主,同时参考体外试验结果以做出正确的结论。
类抗肿瘤新药应进行药物作用机制的初步研究。
2体外抗肿瘤活性试验
2.1试验目的
(1)对候选化合物进行初步筛选;
(2)了解候选化合物的抗瘤谱;(3)为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考,如剂量范围、肿瘤类别等。
2.2试验方法选用10-15株人癌细胞株,根据试验目的和所选用的方法选择相应的细胞系及适量的细胞接种浓度,按常规细胞培养法进行培养;推荐使用四氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide,MTT]还原法、XTT{2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulphonyl)-5-[carboxanilide]-2H-tetrazoliumhydroxide}还原法、磺酰罗丹明B(sulforhodamineB,SRB)染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。
药物与细胞共培养的时间一般为48-72小时,贴壁细胞需先贴壁24小时后再给药。
试验应设阳性及阴性对照组,阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药,阴性对照为溶媒对照。
2.3评价标准以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线,然后采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值或EC50值)。
体外试验至少重复一次。
3体内抗肿瘤试验
体内抗肿瘤试验结果是评价候选抗肿瘤化合物有效性的最重要指标。
体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型,其中至少一种为人癌裸小鼠移植瘤模型或其它人癌小鼠模型。
试验结果三种模型均为有效,再重复一次也为有效,评定该化合物对这些实验性肿瘤具有治疗作用。
鼓励使用人癌裸小鼠移植瘤模
T/C%=────×100%
CMST
TMST:
治疗组MST;CMST:
阴性对照组MST。
评价的标准则以125%为界,当T/C%≥125%时,视为有效,反之则无效。
报告格式见表1。
表1XXX对腹水瘤XXX的实验治疗作用。
组别剂量给药动物数开始体重(克)中位生存时间T/C
方式(只)(x±SD)(天)(%)
阴性对照
阳性对照
治疗组
高剂量
中剂量
低剂量
3.4.2裸小鼠移植瘤模型
推荐使用测量瘤径的方法,动态观察被试物抗肿瘤的效应。
肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长情况而定,一般为每周2-3次,每次测量同时还需称鼠重。
肿瘤体积(tumorvolume,TV)的计算公式为:
V=1/2×a×b2或π/6×a×b×c
其中a、b、c分别表示长宽高。
由于此两公式的相关性极好,可采用任一公式。
根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume,RTV),计算公式为:
RTV=Vt/V0。
其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积,Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(%),计算公式如下:
TRTV
T/C%=────×100%
CRTV
TRTV:
治疗组RTV;CRTV:
阴性对照组RTV。
疗效评价标准:
T/C%>60%为无效;T/C%≤60%,并经统计学处理P<0.05为有效。
报告格式见图1和表2;并应提供相应照片。
表2XXX对人癌裸小鼠移植瘤XXX的实验治疗作用。
组别剂量给药动物数平均体重(克)TV(x±SD)RTVT/CP值
方式d0dnd0dnd0dn(x±SD)(%)
阴性对照
阳性对照
治疗组
高剂量
中剂量
低剂量
d0:
分笼给药时间;dn:
实际治疗疗效最佳的时间。
注:
图中为示意曲线。
图1XXX对人癌裸小鼠移植瘤XXX的生长抑制作用。
3.4.3小鼠肿瘤模型
生长较慢的小鼠肿瘤采用与裸小鼠移植瘤同样的量瘤径的评价方法。
生长较快的小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价。
试验结束后处死动物,称体重,解剖剥离瘤块,称瘤重。
阴性对照组肿瘤平均瘤重小于1克,或20%肿瘤重量小于400毫克,表示肿瘤生长不良,试验作废。
疗效评价公式:
给药组平均瘤重-阴性对照组平均瘤重
肿瘤生长抑制率=─────────────────×100%
阴性对照组平均瘤重
评价标准:
肿瘤生长抑制率<40%为无效;肿瘤生长抑制率≥40%并经统计学处理P<0.05为有效。
报告格式见表3,并应提供相应照片。
表3XXX对动物移植瘤XXX的实验治疗作用。
动物数平均体重(克)
组别剂量给药──────────瘤重(克)抑瘤率P值
方式开始最后开始最后(x±SD)(%)
阴性对照
阳性对照
治疗组
高剂量
中剂量
低剂量
3.4.4原位接种模型
不同的原位接种模型可采用不同的评价方法,主要有瘤重和生存时间评价法。
如肝原位接种可用瘤重评价,颅内接种可用生存时间评价。
评价方法、标准和注意事项同腹水瘤模型和小鼠肿瘤模型。
4各种类型抗肿瘤药物的特殊要求
类抗肿瘤新药应进行药物作用机制的初步研究。
非细胞毒类药物除完成上述体内外抗肿瘤试验,还应进行以下试验以证明其特定的抗肿瘤作用。
4.1生物反应调节剂
药效学包括两个方面:
体内抗癌试验和免疫功能的研究。
4.1.1体内抗癌试验除参照本章“体内抗肿瘤试验”部分,尚应注意以下几点:
模型因裸小鼠是免疫缺陷动物,一般应用正常免疫小鼠肿瘤模型。
给药时间可按常规给药,也可在肿瘤接种前预先给药几天,肿瘤接种后继续给药或停药。
肿瘤细胞接种量用于观察BRM类药物的肿瘤细胞接种量可比细胞毒类药物低一个数量级,一般为(1-5)⨯105个瘤细胞/小鼠。
给药方法可单独给药,也可与其它抗肿瘤药物合并使用,观察增效或减毒作用。
4.1.2免疫功能试验方法具有抑瘤作用的生物反应调节剂,还需作免疫功能测定,以明确其抑瘤作用是否与免疫功能调控有关。
免疫功能测定至少应做三项以上(第二、第三和第五项必做),包括细胞免疫和体液免疫两方面。
检测方法详见本书“抗炎免疫药物药效学指导原则”中的“免疫调节药”部分。
巨噬细胞功能测定
天然杀伤细胞(naturalkillcell)测定
淋巴细胞转化试验
淋巴因子活化的杀伤细胞(lymphocyte-activatedkillercell)测定
各种细胞因子(cytokine)测定包括白介素(IL-2)、白介素(IL-6)、白介素(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等。
迟发型超敏反应检测
4.2肿瘤耐药逆转剂
4.2.1体外抗耐药活性试验选择2-3对肿瘤耐药/敏感细胞株,采用MTT法、XTT法或SRB法测定药物的细胞毒性。
一般在无毒剂量或相当于IC10的剂量下设三个剂量,并设立相应的阳性和阴性对照组。
评价逆转效果用逆转倍数(foldreversal,FR)表示:
FR=IC50(不加逆转剂)/IC50(加逆转剂)。
但必须注意以下方面:
(1)耐药株的耐药性耐药株因传代,尤其是撤药后耐药性可改变或消失;因此,试验前必须对试验耐药株进行耐药倍数(FR)的测定,以确保试验资料的可靠性;
(2)若非逆转多药耐药(MDR)而是逆转单药耐药,则实验的瘤株中需有针对该药的耐药细胞株;(3)阳性对照药建议采用10μM维拉帕米(verapamil,VPL)或3μM环孢菌素A(cyclosporinA,CsA)。
4.2.2体内抗肿瘤耐药活性试验使用小鼠敏感和对应的耐药肿瘤和人癌裸小鼠敏感和对应的耐药移植瘤观察药物的体内抗肿瘤耐药活性。
4.2.3耐药基因及其表达产物的测定在确定药物能逆转耐药的前提下,可测定肿瘤细胞内的药物浓度变化和耐药基因及其表达产物以初步明确其逆转耐药的机制,包括多药耐药基因及其编码蛋白(multidrugresistancegene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp)、多药耐药相关蛋白(multidrugresistance-relatedprotein,MRP)和肺耐药相关蛋白(lungresistance-relatedprotein,LRP)或其它与耐药相关的基因/蛋白及酶等。
4.3抗肿瘤转移药物
肿瘤转移是多步骤的、借助循环途径和跨器官的复杂过程。
肿瘤是否转移不仅依赖于肿瘤细胞本身具有的内在转移潜能,而且也取决于机体抗转移因素的消长。
所以,抗转移药物只有在动物体内模型上才能得出符合实际的结果。
其药效学试验可在完成本章第2-3部分试验后进行如下试验:
4.3.1体外试验测定候选化合物作用下肿瘤细胞对基底膜的侵袭、粘附和肿瘤细胞趋化性运动的能力。
4.3.2体内试验
模型小鼠B16黑色素瘤、小鼠Lewis肺癌等和人癌裸小鼠高转移移植瘤模型。
接种方法常用静脉注射方法,也可用皮下接种或爪垫接种等方法。
评价指标接种给药后,观察并记录动物死亡时间,计算生存天数。
试验结束后,称动物体重、肺重、移植瘤重,解剖显微镜下计数肺转移瘤灶、测瘤径(按本章测瘤径方法计算肺转移瘤体积)和病理组织学切片观察等;并计算转移率,公式为:
转移抑制率=1-(治疗组转移率/对照组转移率)×100%。
4.4肿瘤血管生成抑制剂
4.4.1体外试验体外试验模型主要有:
人血管内皮细胞模型包括人脐静脉血管内皮细胞和人微血管(肺、皮肤等)内皮细胞。
血管形成促进因子如血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)或碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)等刺激细胞DNA合成、增殖、迁移、血管形成(tubeformation)来观察药物的抗血管形成作用。
肿瘤细胞模型主要应用国内已建立的人实体癌细胞系,确定VEGF、FGF等高分泌的细胞株。
检测细胞增殖、转移能力及血管形成因子的基因表达状况来评价药物。
4.4.2体内试验
血管抑制试验寻找无血管区域或血管能明显与新生毛细血管相区别的区域进行肿瘤血管生成抑制剂筛选。
经典的血管形成评价方法有:
鸡绒毛膜尿囊和卵黄膜囊(CAM)、啮齿动物虹膜和角膜等。
也可应用如皮下移植塑料或多孔的polytetrafluoroethylene管、皮下移植无菌的海绵;一些自然的或化学修饰的物质如Matrigel和纤维凝胶等用于体内模型。
抗肿瘤试验通过观察新生血管生成
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 肿瘤 药效 指导 原则