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血液学基础
血液学基础
一.总论
A.血液的成分
血 清
血 浆 蛋白质
凝固因子
血 液 血小板 血 饼
血 球 白细胞
红细胞
B.血液的功能
1.搬运氧气至全身;
2.进行人体免疫功能;
3.阻止血液外流;
二.各论
A. 红细胞(RBC)
1。
红细胞的形态及功能
红细胞模型图
形 态:
扁平板状,中央凹陷,平均直径7-8m
内 含:
血红蛋白(HGB),富含铁份,容易氧化,携带氧气至全身。
功 能:
搬运氧气
特 点:
细胞内无核,柔软,可进入比本身直径更小的毛细血管。
正常值:
400-600万/L
2.红细胞的成熟:
红细胞由骨髓中生成,有细胞核,细胞核在分裂过程中密度越来越大,体积越来越小.此时
的红细胞为幼稚细胞,分布于骨髓中.在静脉血中只留有网状红细胞及成熟红细胞,网状红细胞
含量不超过1%.网状红细胞内有RNA留下.检测中,用一般试剂可区分幼稚细胞与成熟细胞,
用特殊试剂可区分网状红细胞与成熟细胞.
3.异常举例:
缺铁性贫血:
由于血红蛋白内铁份不足所致,红细胞呈小型。
溶血性贫血:
红细胞于内部膨化,导致细胞膜破裂,红细胞呈大型。
恶性贫血 :
由于细胞内缺乏维生素B12导致细胞核不能成熟,细胞呈大型
有核红细胞。
再生不良性贫血:
由于遗传原因,骨髓造血量少,导致红细胞、血小板、白细
胞等数量少。
B.白细胞(WBC)
1.白细胞的分类、形态及成份
分 类:
淋巴球
二分类
其他白细胞
淋巴球
三分类 嗜中性球
其他白细胞
淋巴球
单核球
五分类 嗜中性球
颗粒球 嗜酸性球
嗜碱性球
五分类中各种白细胞百分比含量:
淋巴球 :
20%- 40%
单核球 :
2%- 10%
嗜中性球:
40%- 60%
嗜酸性球:
7%以下
嗜碱性球:
1%以下
形态:
(普通染色)
淋巴球单核球嗜中性球嗜酸性球嗜碱性球
直径7-17m15-20m12-15m13-1m810-15m
核近似球形凹陷倾向杆状分节不整形
细胞质淡青色青灰色淡橙色淡青色淡褐色
颗粒赤紫色赤紫色橙褐色赤橙色暗紫色
粗大微细微细粗大大小都有
少数多数多数充满核上也有
形态
2.白细胞的功能
产生人体免疫机能,直接攻击外来细菌或产生抗体抗源反应。
正常值:
4000──9000/L
3。
异常举例:
艾滋病:
患者体内无淋巴球。
白血病:
患者体内白细胞数量增加但功能不正常(恶性增殖)。
异常 :
正常情况下,静脉血中幼稚细胞量极少,当异常时,幼稚细胞量增加,当
大于1%时,应马上检查。
C. 血小板(PLT)
1。
作 用:
阻止出血
特 征:
容易凝结(不稳定性)
正常值:
15万──40万/L
止血过程:
血小板在血管内壁附着;
相宜凝结
止血后产生血塞,以后慢慢溶解
2.异常举例:
再生不良性贫血:
血小板数量少,或者血小板附着力差.可进行成份输血.
血球计数器基本原理
一·血球计数器主要检测项目
进行CBC分析:
WBC,RBC,HCT,HGB,PLT
MCV,MCH,MCHC
二·基本原理:
A.粒子检出原理:
1。
Ohms法则(DC检出法、电气抵抗变化检出):
E(电压)=I(电流)*R(电阻)
由于血液内各种细胞及颗粒的大小不同,加压后电阻大小也不同,然后转换成脉
冲信号输出,即可得知数量、大小等数据。
适用:
白细胞、红细胞、血小板的数量、形态及分类
装置:
2.激光散乱光荧光检出方式(Flowcytemetry):
装置:
优点:
适宜于各种细胞的分析,应用广泛,例如白细胞五分类(需用特殊试剂).
缺点:
激光如果用半导体产生,则输出强度较低;如果用GasLaser产生,则使用寿
命较短,更换后调整麻烦.以上两种情况将导致成本上升.
3.交流(电阻)检出方式:
装置:
以交流电作为输入信号.
优点:
可得到细胞内核的信息,颗粒上的情报(信息),维修率低,不需精密的(光线)调整。
缺点:
制造困难,要求波的信号稳定;不易得到细胞的外部大小信息.
B.HCT体积测定原理:
手工检测HCT红血球容积—毛细管法
用血球计数器检测HCT:
Hct值=(红血球总体积/血液总体积)*100%=A*Σhk
将标本5万倍稀释后,通过检测器孔时,产生信号波,将信号波的大小加总,乘以一常
数,即得Hct的值
C.HGB浓度的测定原理:
比色分析法:
装置:
Hgb多少影响Hgb浓度,影响光透过的强度,最后通过光电变换即可测定Hgb浓度.
①空白结果(Blank);
②标本结果(Sample);
③实际结果(Real)=(Sample-Blank);
D.定量方法:
浮球式定量器(东亚专利):
(绝对定量)
优点:
检出器小孔有微量堵塞不影响结果;
缺点:
定量不可改变
水式定量器:
(绝对定量)
优点:
成本低,检出器小孔有微量堵塞不影响结果。
缺点:
内壁水位下降时,可能遗留水滴,易导致稀释倍率、传感器失误,结果不如浮球式准确.
吸引量=流速*时间:
(相对定量)
优点:
成本很低
缺点:
由于流速不能保证,因此极易影响吸引量的准确性.
注射式定量器:
(绝对定量)
优点:
马达转速控制简单,流速、定量都可改变.多用于高档仪器微量定量.
缺点:
成本高,密封引起的磨损问题不易解决,需要定期维修保养。
E.血液定量方法
1.旋转阀SRV(SampleRotorValve):
优点:
故障率低.血液吸引管内的一点点堵塞不影响定量,由于取的是中段血,血液定量很稳定.
缺点:
血液样品有浪费,需要血液量较多,制作成本高.
2.注射式:
优点:
马达转速控制简单,流速、定量都可改变,用于微量血液定量,需要血液量较少,成本低.
缺点:
密封问题较难解决,2-3年需更换密封装置.
3.薄膜泵(DP方式):
优点:
耐用,稳定,4-5年也不需更换;
缺点:
不容易控制容积,需正、负压,成本较高.
F.红细胞的主要公式:
MCV(平均红细胞容积)
MCV(fl)=Hct(%)×10
Rbc(×106/L)
MCH(平均红细胞血红蛋白浓度)
MCH(pg)=Hgb(g/dL)×10
Rbc(×106/L)
MCHC(平均红细胞中血红蛋白容积浓度)
MCHC(g/dl)=Hgb(g/dL)×1000
Hct(%)
三项指标标准数值范围:
MCV:
80-100fL
MCH:
28-32pg
MCHC:
32-36g/dL
5.异常举例:
①MCV高,MCHC低
可能Hct高
②MCV正常,MCHC高
可能Hgb高
可能稀释倍率太大,导致Hct及Rbc都降低.
其他指标列举:
W-SCR(白细胞小型细胞率),W-LCR(白细胞大型细胞率),W-MCR(白细胞中型细胞率),
W-SCC(白细胞小型细胞数),W-LCC(白细胞大型细胞数),W-MCC(白细胞中型细胞数),,
P-LCR(血小板小型细胞率),MPV(平均血小板容积),RDW(红细胞分布曲线宽度),PDW(血小板分布曲线宽度)
G.小结
1.RBC,WBC,PLT,HGB,MCV,MCH,MCHC的主要机能、正常值范围及计算公式:
项目主要机能正常值 计算公式
RBC搬运氧气400-600万/l───
WBC免疫4000-9000/l ───
PLT阻止出血15-40万/l───
Hgb吸收氧气及铁分11-18g/dl───
MCV------80-100fl Hct/Rbc
MCH------28-32pg Hgb/Rbc
MCHC------32-36g/dl Hgb/Hct
RBC,WBC,PLT,HGB的检测方式、使用试剂及稀释倍率:
项目检测方式使用试剂稀释倍率
RBCDC(电阻)检测方式稀释液25000-50000
WBCDC(电阻)检测方式稀释液、溶血剂250-500
PLTDC(电阻)检测方式稀释液25000-50000
HGB比色方式稀释液、溶血剂250-500
半自动简单的血球计数器只是一种试剂(WBC、HGB兼用)
WBC三分类以上的机器大部分WBC与HGB所用溶血剂不同
(白细胞使用溶血剂,是为了三分类或五分类时,使一部分白细胞内细胞质缩小,改变原来形态;另外的白细胞不改变原来形态;而血红蛋白使用溶血剂,将彻底破坏白细胞及红细胞)
定量方法小结:
使用场所 方式
浮球式定量器
标本计数 水式定量器
注射式定量器
流量=流速X时间
自动试剂分注 DP方式
(稀释液、溶血剂) 注射式
血液定量 注射式
SRV旋转阀
H.粒度分布曲线分析
1·红细胞粒度分布曲线分析:
血小板粒度分布曲线分析:
白细胞粒度分布曲线
血液分析仪
A.血液分析仪的异常发现限度
机器
手工
异常报告
正常报告
异常
真正异常(TP)
假伪正常(FN)
正常
假伪异常(FP)
真正正常(TN)
T:
True(真) F:
False(伪)
P:
Positive(异常,阳性) N:
Negative(正常,阴性)
注:
1.手工指由专家确认的手工检测结果;
2.要尽量减少假伪正常与假伪异常的检测结果;
3.假伪正常与假伪异常都应该尽量低但两者调整方法有矛盾.
4.假伪正常数量应尽量低(5%以下),可通过提高仪器灵敏度实现,但这时FP更高.
假伪异常可稍高(大约30%),通过降低仪器灵敏度实现,但这时FN更高;
假伪正常数值高,检测员忽视异常结果的可能性增加,导致误诊的可能性;
假伪异常数值高,将导致手工再检查数量增加,影响工作效率;
8.以上限度百分比根据普通检测员异常发现的能力限度制定.
B.Hgb水路图
这里的SV都比较简单,为Pinch阀.
SV3故障较多.(阀为小型阀,管子内径很小)
空白报警(Air Bubble):
正常范围:
3000-4000(F820,F800)
高限:
7000-8000(报警)(F820,F800)
低限:
50以下(报警)
1.Hgb检测水路Pinch阀开关顺序:
SV1
SV2
SV3
冲洗
ON
ON
ON
标本吸引
ON
OFF
OFF
2.Hgb检测步骤:
①用稀释液冲洗;
②稀释光电变换(空白调整);
③标本吸引;
④标本光电变换;
⑤R=S-B;
⑥用稀释液冲洗;
3.异常分析:
(1).空白光电变换数值很高的原因:
(除了光度调整的问题以外)
SV2管变形,有汽泡产生;
SV1故障,排水不畅,空白调整时有稀释液留下(Carry Over)
(2).标本是稀释液的话,空白正常;标本是血液的话,空白很高的报警.
*SV3漏液
(3).Hgb结果不稳定,有时正常,有时偏低.(除了灯泡光度不稳定因素以外)
SV3漏液,导致B值大,导致Hgb(=S-B)小,可以用
MCHC来检查Hgb值是否正常.
(4).标本吸引不能停止:
SV2故障.
(5).空白报警:
灯太暗;
灯上灰太多;
容器壁太脏,有气泡附着在内壁上;(用漂白剂清洗)
排水不畅,SV2堵塞;
灵敏度太高;
SV3漏液.
(6).标本不能吸引:
管子有堵塞;
SV3故障;
C.自动稀释装置(AD-270/260)
血液注射筒密封性很重要;
稀释倍率切换板(注射筒停止板)位置重要;
吸引管端部留有血液,影响稀释倍率,应该小心擦除端部血液;
吸引管吐出血液时可能产生气泡或杯子本身质量,(如有灰尘)
将影响血小板数量,故杯子应斜放.
D.F800/820配件
1.检测器
内径:
100μm左右(用于检测WBC)
80μm左右(用于检测RBC,PLT)
检测器灵敏度与孔内径成反比,内径越小,灵敏度越高.
小孔有一点点堵塞,导致灵敏度提高,导致Hct值高,影响MCV.MCHC;
2.Thermistor
目的:
*根据温度上升,电阻下降,以辅助电阻来自动调节Hct稳定;
如果温度低,溶血剂不易破坏RBC
仪器使用室温:
10度-30度
稀释液温度:
18度-30度
18度以下(温度低),仪器白细胞检测部有报警.
3.内部电极
材质:
白金
红细胞经溶血剂后,红细胞皮带负电,将附着到内部电极上,电极将越来越脏,应定期清洗.小心不要将电线搞断,注意戴手套.
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