九种载体的多克隆位点及质粒图谱.docx
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九种载体的多克隆位点及质粒图谱
九种载体的多克隆位点及质粒图谱
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九种载体的多克隆位点及质粒图谱
(pLLP-OmpA、pLLP-STII、pMBP-P、pMBP-C、pTrc-CKS、pET-GST、pET-Trx、pET-His、pET-DsbA)
这九种载体的多克隆位点均为
GGA TCCGCAGAATTC AGC GCT AGC CAC(TAA)CATCAT
BamHI EcoRI NheI His HisHis
CATCAT CATTAA GCTT
HisHis HisHindIII
我们建议您扩增基因5'端选BamHI或BglII,3'端选NheI或XbaI或SpeI,同时3'端不要带终止密码子,注意与GGATCC(GlySer)表达框架正确,载体用NheI—BamHI双酶切。
BamHI和BglII为同裂酶,NheI、XbaI和SpeI为同裂酶。
如您目的基因无法满足上述要求,如同时含有BamHI和BglII,5'端可选择EcoRI,但须注意与表达框架GAATTC(GluPhe)对齐。
如您目的基因同时含有XbaI、NheI和SpeI,3'端可选择EcoRI。
如果您的目的基因已带有终止密码子,同样可以进行克隆表达,只是注意有些表达载体是在C端带6个His。
PCR引物设计时BamHI和EcoRI位点的5'端保护碱基有2至3个GC即可,而XbaI、NheI和SpeI位点5'端保护碱基须在5个左右才容易被酶切割。
(一)pLLp-OmpA
Size:
7.5Kb
多克隆位点:
Plpp lac operator RBS
CGAGGCGCAAAAA ATGAAA AAGACAGCTATCGCG
MetLys LysThr AlaIle Ala
OmpAsignal
ATTGCAGTGGCACTGGCAGGT TTCGCTACCGTC GCT CAGGCTGGA TCCGCA
Ile AlaVal AlaLeu Ala Gly PheAlaThrVal Ala GlnAlaBamHI
GAATTC AGCGCTAGC CAC CATCATCATCATCATTAAGCTT
EcoRI NheI6His-tag HindIII
BamHIEcoRINheI6His-stopHindIII
Plpp lacoperator RBS—ATG—OmpAsignal—MCS—
基因克隆表达功能区序列如下,经DNA双向测序验证ctcactttatctaagatgaatccgatggaagcatcctgttttctctcaatttttttatctaaaacccagcgttcgatgcttctttgagcgaacgatcaaaaataagtgccttcccatcaaaaaaatattctcaacataaaaaactttgtgtaatacttgtaacgctacatggagattaactcaatctagctagagaggctttacactttatgcttccggctcgtataatgtgtggaattgtgagcggataacaatttcacacaggaaacagctatgaccatgattacggattcactggaactctagataacgaggcgcaaaaaatgaaaaagacagctatcgcgattgcagtggcactggcaggtttcgctaccgtcgctcaggctggatccgcagaattcagcgctagccaccatcatcatcatcattaagcttagatccggctgagcaacgacgtgaacgcaatgcgttccgacgttcaggctgctaaagatgacgcagctcgtgctaaccagcgtctggacaacatggctactaaataccgcaagtaatagtacctgtgaagtgaaaaatggcgcacattgtgcgacattttttttgtctgccgtttaccgctactgcgtcacgcgtaacatattcccttgctctggttcaccattctgcgctgactctactgaaggcgcattgctggctgcgggagttgctccactgctcaccgaaaccggataccctgcccgacgatacaacgctttatcgacta
载体其它部分序列见Genebank LocusASAK3121 (plasmid pIN-III-ompA1)
(二)pLLp-STII
Size:
7.5kb
多克隆住点:
Plpp lacoperator RBS
GAAGGAGATATACATATGAAAAAGAAC ATCGCATTCCTC
MetLysLys AsnIle Ala PheLeu
STIIsignal
CTGGCATCTATGTTTGTTTTCTCTATCGCTACC AACGCTTAC GCTGGATCC
LeuAlaSerMet PheValPheSerIleAlaThrAsn AlaTyr AlaBammHI
GCAGAATTCAGCGCTAGCCAC CATCATCAT CATCAT TAAGCTT
NheI 6His-tag HindIII
BamHI EcoRINheI 6His- stopHindIII
Plpplacoperator ATG—STIIsignalpeptide—MCS—
ﻩ
基因克隆表达功能区序列如下,经DNA双向测序验证
ctcactttatctaagatgaatccgatggaagcatcctgttttctctcaatttttttatctaaaacccagcgttcgatgcttctttgagcgaacgatcaaaaataagtgccttcccatcaaaaaaatattctcaacataaaaaactttgtgtaatacttgtaacgctacatggagattaactcaatctagctagagaggctttacactttatgcttccggctcgtataatgtgtggaattgtgagcggataacaatttcacacaggaaacagctatgaccatgattacggattcactggaactctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacatatgaaaaagaacatcgcattcctcctggcatctatgtttgttttctctatcgctaccaacgcttacgctggatccgcagaattcagcgctagccaccatcatcatcatcattaagcttagatccggctgagcaacgacgtgaacgcaatgcgttccgacgttcaggctgctaaagatgacgcagctcgtgctaaccagcgtctggacaacatggctactaaataccgcaagtaatagtacctgtgaagtgaaaaatggcgcacattgtgcgacattttttttgtctgccgtttaccgctactgcgtcacgcgtaacatattcccttgctctggttcaccattctgcgctgactctactgaaggcgcattgctggctgcgggagttgctccactgctcaccgaaaccggataccctgcccgacgatacaacgctttatcgacta
载体其它部分序列见Genebank LocusASAK3121 (plasmid pIN-III-ompA1)
STIIsignal peptide见Genebank Locus HSTI_ECOLI(p22542)
(三)pMBP-p
Vectorsize:
6.7kb
Ptac lacoperator
分泌型maltose bindingproteinAACAACAAC AAC AAC AACAACAAT
Thrombincut site
AACAACCTGGGT ATCGATACTACT GAGAACTATCCG CGTGGATCCGCAGAA
Asn TyrProArgBamHI EcoRI
TTCAGCGCT AGCCACCAT CATCAT CATCATTAAGCTT
NheI 6His-tag HindIII
BamHI EcoRINheI6His-stop HindIII
Ptaclacoperator分泌型MBP—thrombincutsiteMCS
基因克隆表达功能区序列如下,经DNA双向测序验证
Gccaccatggaaaacgcccagaaaggtgaaatcatgccgaacatcccgcagatgtccgctttctggtatgccgtgcgtactgcggtgatcaacgccgccagcggtcgtcagactgtcgatgaagccctgaaagacgcgcagactaattcgagctcgaacaacaacaacaataacaataacaacaacctgggtatcgatactactgagaactatccgcgtggatccgcagaattcagcgctagccaccatcatcatcatcattaagctt
HindIII
载体其它部分序列见pMal-p2
Maltose bindingprotein(E.coli)编码氨基酸序列见Genebank
MBPMW=42KD
(四)pMBP-c
Vectorsize:
6.6kb
Ptac lacoperator
胞内maltosebindingproteinAACAACAACAACAACAAC AACAAT
Thrombincutsite
AACAAC CTG GGTATC GATACTACTGAGAACTATCCG CGTGGATCCGCAGAA
Asn TyrProArgBamHI EcoRI
TTCAGCGCTAGC CAC CATCATCATCATCATTAAGCTT
NheI 6His-tag HindIII
BamHI EcoRINheI6His-stopHindIII
Ptac lacoperator 胞内MBPthrombincutsite—MCS
基因克隆表达功能区序列如下,经DNA双向测序验证
Gccaccatggaaaacgcccagaaaggtgaaatcatgccgaacatcccgcagatgtccgctttctggtatgccgtgcgtactg
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- 载体 克隆 质粒 图谱