食品毒理学实验讲义.docx
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食品毒理学实验讲义.docx
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食品毒理学实验讲义
实验一毒物损害的形态表现
一、实验目的
1.通过本实验,掌握毒物的形态损害作用;
2.学会毒物形态损害的表现及如何记录相关实验现象。
二、实验原理
有关重金属铜、锌、铬、镉对鱼类的急性毒性研究国内已有许多报道,鱼类早期发育是整个生活史中对各种污染物最为敏感的阶段,用以作为急性毒性试验具有快速、敏感、经济有效等特点,是生物测试保护天然水体的重要方法。
鲫鱼是我国重要的经济鱼类,其分布面广而数量大,个体生长快,性成熟时间短,繁殖季节长,在人工控制饲养条件下可常年繁殖,选择鲫鱼进行重金属离子毒性实验,具有一定代表性。
本实验以鲫鱼为研究对象,向其生长环境中加入重金属硫酸铜,观察其形态损伤,希望在形态方面,有利于水体污染的观察。
三、实验试剂、仪器及动物
1.实验动物
鲫鱼幼鱼,购自鱼市场。
实验鱼在水族箱中驯养7d以上,暂养期间活动正常,无病,死亡率低于5%;实验前1d停止投饵,选择身体健康,反应灵敏,大小基本一致的幼鱼随机分组。
2.实验试剂
CuSO4,先配制成质量浓度为3000mg/L的母液,再根据需要稀释成各质量浓度。
3.实验仪器
聚乙烯塑料水族箱,小型鱼类充氧机。
四、实验方法与步骤
1.实验动物的驯养
实验鱼在水族箱中驯养7d以上,暂养期间活动正常,无病,死亡率低于5%;实验前1d停止投饵。
2.实验动物的分组
采用随机实验进行分组,将21只鲫鱼随机分成7组,其中一组为空白对照组,另外六组为实验组。
3.实验动物的染毒
采用静水法生物测试,实验期间不更换实验液,全天充气。
为防止饵料影响,实验期间不喂食。
为确定质量浓度的大致范围,先作预实验,估计CuSO4的7个质量浓度值,在每一个质量浓度的水族箱内放入3尾鲫鱼,分别观察24h、48h、96h,找出各金属的100%致死质量浓度和最大耐受质量浓度。
再根据预实验结果设6个质量浓度组及1个对照组,每一质量浓度放鱼5尾,在曝露的过程中观察它们的形态损伤。
五、中毒症状观察
染毒后认真观察中毒发生、发展过程,中毒特点和毒作用靶器官,记录各组幼鱼24、48、96h的形态损伤。
中毒症状的观察现象填入附录中的表格中。
六、注意事项
1.防止操作者中毒。
2.剩余受试化学物应在教师指导下销毁
实验一附录:
预实验实验结果:
(在实验报告上所有的图表自己手写)
CuSO4浓度
(mg/L)
24h形态损伤
48h形态损伤
96h形态损伤
游动是
否活跃
皮肤是否
出现溃烂
是否死亡
及死亡个数
游动是
否活跃
皮肤是否
出现溃烂
是否死亡
及死亡个数
游动是
否活跃
皮肤是否出现溃烂
是否死亡
及死亡个数
6.3
是(0)
是
(1)
是
(1)
14.4
是(0)
是
(1)
是
(1)
23.4
是
(1)
是
(1)
是
(2)
32.4
是
(1)
是
(1)
是
(2)
43.2
是
(2)
是
(2)
是(3)
54.0
是
(2)
是(3)
是(3)
0(对照)
无(0)
无(0)
无(0)
正式实验实验结果:
CuSO4浓度
(mg/L)
24h形态损伤
48h形态损伤
96h形态损伤
游动是
否活跃
皮肤是否
出现溃烂
是否死亡
及死亡个数
游动是
否活跃
皮肤是否
出现溃烂
是否死亡
及死亡个数
游动是
否活跃
皮肤是否出现溃烂
是否死亡
及死亡个数
浓度1
浓度2
浓度3
浓度4
浓度5
浓度6
0(对照)
经上述实验可得,重金属铜对鲫鱼的形态损伤表现为:
实验二毒物的急性毒性试验
一、实验目的
1.掌握急性毒性试验的基本步骤及如何设计染毒的剂量与分组;
2.掌握LD50的测定方法及计算方法。
二、实验原理
急性毒性是机体一次接触或24h内多次接触大剂量外源化学物后所引起的快速剧烈的中毒效应。
硫酸铜是常见的一种化学毒物,鱼类早期发育是整个生活史中对各种污染物最为敏感的阶段,用以作为急性毒性试验具有快速、敏感、经济有效等特点,是生物测试保护天然水体的重要方法。
本实验以鲫鱼为研究对象,向其生长环境中加入重金属硫酸铜,观察硫酸铜急性毒性反应的特征。
三、实验试剂、仪器及动物
1.实验试剂
硫酸铜,先配制成质量浓度为3000mg/L的母液,再根据需要稀释成各质量浓度。
2.实验仪器
聚乙烯塑料水族箱,小型鱼类充氧机。
3.实验动物
鲫鱼幼鱼,购自鱼市场。
四、实验方法及步骤
1.实验动物驯养及分组
实验动物驯养及分组见实验一。
2.预试验
采用静水法生物测试,实验期间不更换实验液,全天充气。
为防止饵料影响,实验期间不喂食,估计硫酸铜的7个质量浓度值,求出受试化学物的大致致死范围(0-100%)。
3.正式试验
根据预备实验结果设6个质量浓度组及一个对照组,每一质量浓度放鱼5尾,在曝露的过程中观察它们死亡效应。
中毒后,多次刺激无反应判断为死亡个体,从水中随时捞出。
五、LD50的计算
记录各组幼鱼24、48、96h死亡数,计算死亡率,画出硫酸铜浓度与死亡率的曲线.找出各重金属的半数致死质量浓度(LD50)。
实验数据填写在附录中的表格中。
六、注意事项
1.不要一味将注意力集中在高剂量组的动物,因为这些动物往往死亡很快,反而不容易观察到中毒的发展过程。
2.观察记录应尽量完整、具体。
实验二附录:
CuSO4浓度
(mg/L)
24h死亡率
48h死亡率
96h死亡率
死亡个数
死亡率
死亡个数
死亡率
死亡个数
死亡率
浓度1
浓度2
浓度3
浓度4
浓度5
浓度6
对照
实验数据:
依据上述实验数据分别画出染毒24h、48h、72h及96h后的剂量-反应曲线,得染毒24h、48h、72h及96h后的LD50,各曲线如下所示:
(此区域画曲线)
由上述曲线可得,染毒24h、48h及96h后的LD50分别为:
实验三毒物的安全浓度实验
一、实验目的
1.掌握安全浓度的概念;
2.掌握安全浓度测定的基本步骤及计算方法。
二、实验原理
安全质量浓度即为某一毒物对动物体不造成损伤的质量浓度范围,通常由LC50×0.1计算出。
硫酸铜是常见的一种化学毒物,鱼类早期发育是整个生活史中对各种污染物最为敏感的阶段,用以作为急性毒性试验具有快速、敏感、经济有效等特点,是生物测试保护天然水体的重要方法。
本实验以鲫鱼为研究对象,向其生长环境中加入重金属硫酸铜,计算硫酸铜对鲫鱼的安全质量浓度。
三、实验动物、试剂及仪器
1.实验动物
鲫鱼幼鱼,购自鱼市场。
实验鱼在水族箱中驯养7d以上,暂养期间活动正常,无病,死亡率低于5%;实验前1d停止投饵,选择身体健康,反应灵敏,大小基本一致的幼鱼随机分组。
2.实验试剂
CuSO4,先配制成质量浓度为3000mg/L的母液,再根据需要稀释成各质量浓度。
3.实验仪器
聚乙烯塑料水族箱、小型鱼类充氧机。
四、实验步骤
1.实验动物驯养及分组
实验动物驯养及分组见实验一。
2.染毒步骤与方法
采用静水法生物测试,实验期间不更换实验液,全天充气。
为防止饵料影响,实验期间不喂食。
为确定质量浓度的大致范围,先作预备实验,估计CuSO4的7个质量浓度值,在每一个质量浓度的水族箱内放入3尾鲫鱼,分别观察24h、48h、96h,找出各金属的100%致死质量浓度和最大耐受质量浓度。
再根据预实验结果设6个质量浓度组及一个对照组,每一质量浓度放鱼5尾,在曝露的过程中观察它们的行为、中毒症状、死亡等效应。
中毒后,多次刺激无反应判断为死亡个体,从水中随时捞出。
五、安全质量浓度的计算
记录各组幼鱼24、48、96h死亡数,计算死亡率,画图求出各重金属的半数致死质量浓度(LC50),由公式LC50×0.1计算出安全质量浓度。
六、注意事项
1.防止操作者中毒。
2.观察记录应尽量完整、具体。
3.剩余受试化学物应在教师指导下销毁。
结果计算填以下内容:
由实验二得染毒24h、48h、及96h后的LD50,分别为,,,由下列公式:
安全质量浓度=LC50×0.1
得染毒24h、48h及96h的安全质量浓度分别为,,。
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