工具酶的发现和基因工程的诞生(课件).ppt
- 文档编号:697766
- 上传时间:2022-10-12
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工具酶的发现和基因工程的诞生(课件).ppt
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第一节工具酶的发现和基因工程的诞生,喷洒农药对棉铃虫种群密度影响的曲线图,普通棉花(无抗虫特性),苏云金芽孢杆菌,获得,抗虫基因,导入,棉花细胞,(目的基因),载体,与连接,(受体细胞),重组DNA分子,抗虫性状,表达,1、基因载体,作为运载工具,将外源基因(目的基因)送入受体细胞。
作用:
质粒(最常用)、噬菌体和某些动植物病毒,种类:
本质:
DNA分子,细菌、酵母菌、放线菌等最常用的是大肠杆菌的质粒,来源:
结构:
双链环状,特点:
自我复制,2、限制性核酸内切酶,能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶。
含义:
磷酸二酯键,切割部位:
产生相同的粘性未端,作用结果:
大肠杆菌中的一种限制性核酸内切酶(EcoRI)只能识别GAATTC序列,并只能在G和A之间切开,举例:
5,,5,,5,,5,,3,,3,,3,,3,,酶,酶,已知限制性内切酶的识别序列和切点是AAGCTT,限制性内切酶的识别序列和切点是GGATCC,请画出切割后的粘性末端(参看课本P2图1-1),DNA片段,DNA片段,3、DNA连接酶,磷酸二酯键,连接部位:
将具有末端碱基互补的两个DNA片段连接起来,作用:
活动:
模拟重组DNA的构建,活动说明:
4人为一组1.组长:
1人,由拿到工具的同学担任,负责活动任务的分配和总指挥2.切割:
1人,由组长分配,用剪刀切割质粒和目的基因3.连接:
1人,由组长分配,用订书机代表DNA连接酶,订书针代表磷酸二酯键连接DNA片段4.展示:
1人,由组长分配,负责展示小组活动成果并发言(得到了几种不同的结果,为什么能得到该结果),任务一:
已知EcoRI的识别序列和切点是-GAATTC-,现将多个目的基因1(红色)与多个质粒经酶切后混合并加入DNA连接酶,可能得到哪些不同的结果(最多考虑切割片段的两两结合)?
质粒与目的基因连接(正向、反向)、质粒与质粒连接、目的基因与目的基因连接、目的基因自身环化、质粒自身闭合,任务二:
已知EcoRI和Hind的识别序列和切点分别是-GAATTC-,-AAGCTT,现将多个目的基因2(绿色)与多个质粒经酶切后混合并加入DNA连接酶,可能得到哪些不同的结果(最多考虑切割片段的两两结合?
),质粒与目的基因连接(正向)、质粒与质粒连接、目的基因与目的基因连接,已知BamHI和Bgl的识别序列和切点分别是-GGATCC-和-AGATCT-,在质粒上有BamHI的一个切点,在目的基因的两侧各有1个Bgl的切点。
请问能否将目的基因与质粒连接在一起?
思维拓展,能。
因为由两种限制性切割后所形成的黏性末端是相同的。
思维拓展,下图表示四种限制性核酸内切酶BamH,EcoRI,Hind以及Bgl的识别序列和切割位点。
为防止酶切后含目的基因的DNA片段自身连接呈环状,下列不能同时切割的目的基因的两种酶是,A.EcoRI和HindB.EcoRI和BglC.BamH和HindD.BamH和Bgl,D,
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