消毒剂消毒效果及有效期验证方案共22页.docx
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消毒剂消毒效果及有效期验证方案共22页
2.验证(yànzhèng)范围(fànwéi)
3.验证(yànzhèng)目的
4.验证参考文件
5.验证小组名单
6.验证小组职责
7.验证内容
8.结论与评价
9.再验证周期
1.概述(ɡàishù)
1.1.本公司(ɡōnɡsī)的洁净区分为A级、B级、C级和D级,拟定用于洁净区表面(biǎomiàn)消毒的有三种消毒剂:
75%乙醇(yǐchún)、0.1%新洁尔灭溶液、2%甲酚皂溶液。
本次验证方案将选用以上3种消毒剂分别进行验证试验。
1.2.消毒剂的种类、消毒对象、消毒方法和有效期见下表:
序号
名称
消毒对象
消毒方法
有效期
1
75%乙醇
用于设备表面、器具和手消毒。
采用擦拭或喷洒方式
密闭保存7天
2
0.1%新洁尔灭溶液
用于地面、墙面、器具、清洁布、拖布和洁净鞋的消毒
采用擦拭或浸泡方式
密闭保存7天
3
2%甲酚皂
用于水池和地漏、地面的消毒
用于液封
密闭保存7天
备注
以上消毒剂浓度均为体积分数比。
1.3.作用对象一样的消毒剂每月轮换使用,避免表面微生物产生耐药菌株。
在利用消毒剂进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10分钟,利用消毒剂进行浸泡消毒的不少于5分钟。
1.4.为了确认消毒剂的消毒效力,通过实验室考察部分和现场考察部分分别进行验证。
实验室考察部分,定量悬浮试验法适用于浸泡或液封方式的消毒方法;表面实验法适用于擦拭或喷洒方式的消毒方法。
洁净区设施表面材质有不锈钢、镀锌板及玻璃三种,故表面试验法选用不锈钢载片、镀锌板及玻璃载片模拟洁净区设施表面进行验证试验。
现场考察试验部分选择冻干车间的配液间(C级洁净区)、灌装间(A/B级洁净区)、灌装间操作人员手部消毒前和消毒后分别进行取样,测定其微生物数量。
1.5.A/B级洁净区使用的消毒剂需经0.22μm除菌过滤。
2.验证范围
本验证方案适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手(手套)的消毒等。
3.验证目的
通过消毒剂消毒效果及有效期的确认,科学制订消毒程序,以保证各洁净级别的操作间及设备外表面、人员手部按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒防止污染的效果。
4.验证参考文件
《药品生产(shēngchǎn)验证指南》(2003版);《医疗机构消毒(xiāodú)技术规范》(2012年版);《中国(zhōnɡɡuó)药典》(2010年版);《药品(yàopǐn)GMP指南-无菌药品》、《现代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术》。
5.验证小组名单
组长
姓名
职务/职称
部门
***
经理
质量部
成员
***
车间主任
生产部
***
QC主管
质量部
***
QC
质量部
***
QA主管
质量部
6.验证小组职责
7.验证内容
7.1.验证前参与实施验证的人员必须已经接受本方案的培训且考核合格。
见附表1。
7.2.验证前准备
7.2.1.菌种
7.2.1.1.试验微生物以金黄色葡萄球菌作为细菌繁殖体中化脓性球菌的代表;大肠杆菌作为细菌繁殖体中肠道菌的代表;白色念珠菌作为致病性真菌的代表。
在上述规定的菌、毒株的基础上,根据消毒剂特定用途或试验特殊需要,还可增选其他菌、毒株。
7.2.1.2.75%乙醇、2%甲酚皂为中效消毒剂,0.1%新洁尔灭为低效消毒剂,均不具备杀灭细菌芽孢功能,根据上述内容,本次验证所用菌种见下表:
序号
名称
序列号
类别
1
金黄色葡萄球菌
CMCC(B)26003
细菌
2
大肠埃希菌
CMCC(B)44102
细菌
4
白色念珠菌
CMCC(F)98001
真菌
7.2.1.3.可接受标准:
标准菌种必须来源可靠、来源可溯、保存方法与条件合适。
使用(shǐyòng)的标准菌种不能超过第五代。
7.2.1.4.应确认菌种名称、来源(láiyuán)、代数,见附表2。
7.2.2.试剂(shìjì)及培养基
7.2.2.1.选用(xuǎnyòng)培养基见下表:
序号
名称
备注
1
营养琼脂培养基
121℃,15min灭菌备用
2
玫瑰红钠琼脂培养基
121℃,15min灭菌备用
3
胰酪胨大豆琼脂培养基
121℃,15min灭菌备用
7.2.2.2.稀释液、冲洗液:
0.9%无菌氯化钠溶液、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。
7.2.2.3.可接受标准:
所有试剂、培养基的规格、数量和保存条件满足要求,且在有效期内;脱水培养基呈流动粉末状,无结块,无潮解,且在有效期内。
7.2.2.4.试剂/培养基检查确认记录见附表3。
7.3.消毒剂配制:
按《清洁剂、消毒剂的配制与使用标准操作程序》进行消毒剂配制。
7.4.定量悬浮试验
7.4.1.目的:
0.1%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液、2%甲酚皂溶液消毒效力的确认(定量悬浮试验法)。
7.4.2.菌液制备:
取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌接种于营养肉汤培养基中,于30~35℃培养18~24h即得,培养后微生物浓度应不少于105cfu/ml。
取白色念珠菌接种于改良马丁液体培养基中,于23~28℃培养24~48h即得,培养后微生物浓度应不少于105cfu/ml。
7.4.3.将配制好的0.1%新洁尔灭溶液(或75%乙醇溶液或2%甲酚皂溶液)按9ml/支分注于27支无菌具塞试管中,按照“5分钟组”、“10分钟组”和“15分钟组”共3组每组9支,进行分组编号。
7.4.4.取供试菌液(105cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液,105cfu/ml的大肠埃希菌菌液,105cfu/ml的白色念珠菌菌液)1ml按照下表,分别接入到盛有9ml0.1%新洁尔灭溶液(或75%乙醇溶液或2%甲酚皂溶液)的试管中(已进行10倍稀释),轻轻摇动,混合均匀,并立即开始计时。
菌种名称
5分钟组
10分钟组
15分钟组
金黄色葡萄球菌
1ml/支,共3支
1ml/支,共3支
1ml/支,共3支
大肠埃希菌
1ml/支,共3支
1ml/支,共3支
1ml/支,共3支
白色念珠菌
1ml/支,共3支
1ml/支,共3支
1ml/支,共3支
7.4.5.试验(shìyàn)方法
分别(fēnbié)在5分钟、10分钟和15分钟取接种(jiēzhòng)细菌的消毒液,倾入过滤杯滤过,然后各用0.9%无菌生理盐水50ml清洗滤膜,滤过,重复用50ml0.9%无菌生理盐水的洗涤共3次。
取下滤膜,含细菌的膜放入营养琼脂平板内,含真菌的膜放入玫瑰红钠琼脂平板内,含菌膜面向上。
细菌于30-35℃的生化(shēnɡhuà)培养箱内培养3天,真菌于23-28℃的霉菌培养箱内培养5天。
培养后在明亮处,对平板上的菌落数进行计数,记录计数结果。
7.4.6.阳性对照
分别将105cfu/ml金黄色葡萄球菌菌液、105cfu/ml大肠埃希菌菌液、105cfu/ml的白色念珠菌菌液逐级稀释至浓度为10~100cfu/ml,取稀释菌液1ml于平皿中,倾注冷却至45℃营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基混匀,待凝固后于细菌于30-35℃的生化培养箱内培养3天,真菌于23-28℃的霉菌培养箱内培养5天。
培养结束后对平板上的菌落数进行计数,记录计数结果。
0.1%新洁尔灭溶液消毒效力确认记录见附表4
75%乙醇溶液消毒效力确认记录见附表5
2%甲酚皂溶液消毒效力确认记录见附表6
7.5.表面实验
7.5.1.目的:
由于75%乙醇溶液、0.1%新洁尔灭溶液要通过擦拭消毒,故选用不锈钢载片及玻璃载片进行表面试验法,确定其消毒效力是否符合要求。
7.5.2.工作菌液制备同7.4.2.项下菌液制备。
7.5.3.染菌不锈钢载片制备:
将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内,滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌含菌量为1×108~5×108CFU/ml的菌液0.1ml,并均匀涂布于整个载体表面。
滴染菌液后,载片置超净工作台晾干后备用。
每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片;染菌玻璃载片制备:
因培养皿的材质为玻璃,故用培养皿代替玻璃载片进行染菌试验。
进行菌液滴染前,用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积(50mm×50mm),标注清晰。
菌液滴染操作同染菌不锈钢载片制备。
7.5.4.取样(qǔyàng)
7.5.4.1.试验组:
将消毒剂擦拭(cāshì)在制备好的染菌载片上,消毒剂作用时间分别为5min、10min、15min,不锈钢载片、镀锌载片及玻璃载片每个作用时间分别制备2个。
作用结束后,用接触碟取样(接触碟规格:
φ55mm,取样(qǔyàng)面积为25cm2)。
取金黄色葡萄球菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟;取大肠(dàcháng)埃希菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟;取样白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟。
接触碟取样方法:
打开接触碟盖,使无菌培养基表面与取样面直接接触,均匀按压接触碟底板,确保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触10秒左右,盖上碟盖。
7.5.4.2.对照组:
对照组的活菌浓度同工作菌液的制备。
阴性对照:
用接触碟在已灭菌的载片上(未染菌片的载片)按压取样,操作同上。
每种载片及每种接触碟平行制备两份。
7.5.5.培养:
将取样金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的接触碟倒置于30~35℃培养3天计数;取样白色念珠菌的接触碟倒置于23~28℃培养5天计数计数。
7.5.6.结果计算:
计算试验组和对照组的活菌浓度 (CFU/ml),并换算为对数值(N),并按下式计算杀灭对数值:
杀灭对数值 (KL)=对照组平均活菌浓度的对数值(NO)-试验组活菌浓度对数值(NX)
7.5.7.可接受标准:
杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位。
75%乙醇溶液、0.1%新洁尔灭溶液消毒效力确认(表面实验)见附表7。
7.6.消毒效力现场考察试验
7.6.1.目的:
确认消毒剂对相应设施的实际消毒效力。
7.6.2.操作:
生产车间岗位操作人员按照《洁净区操作间清洁标准操作程序》、《洁净区水池、地漏清洁标准操作程序》、《洁净区人员手部卫生清洁标准操作程序》、《洁净区清洁用具清洁标准操作程序》、《洁净区工作服清洁标准操作程序》进行清洁消毒。
分别选取如下试验现场:
7.6.2.1.冻干车间的配液间(C级洁净区)顶棚、墙面、地面、工作台面,地漏、水池;
7.6.2.2.冻干(dònɡɡàn)车间的灌装间(A/B级洁净(jiéjìng)区)顶棚(dǐngpéng)、墙面(qiánɡmiàn)、地面、工作台面、设备表面;
7.6.2.3.冻干车间灌装间(A/B级洁净区)操作人员手部;
7.6.2.4.冻干车间B级洁净区的工作鞋、清洁布、拖布。
7.6.3.取样检测
7.6.3.1.消毒15分钟后,由QC人员到试验现场,按照《冻干C线洁净区(室)表面微生物监测标准操作程序》进行洁净区表面微生物的取样检测;
7.6.3.2.用浸泡或液封方式(地漏、水池、工作鞋、洁净布、拖布)的采用无菌吸管取浸泡液或液封液1ml,于胰酪胨大豆琼脂培养基平板培养;
7.6.3.3.灌装间(A/B级洁净区)操作人员,采用75%乙醇进行手部消毒。
将配制好并经过0.22μm除菌过滤的75%乙醇盛装于喷壶中,灌装间操作人员在生产开始时进行手消毒,间隔5分钟、10分钟、15分钟、20分钟分别进行手指菌取样。
7.6.3.4.连续逐日测定,共测定3次。
记录测定结果。
7.6.4.可接受标准:
所监测的洁净区的微生物均符合各自的洁净级别要求。
洁净度级别
表面微生物
接触碟cfu/碟(设备、设施、工作服)
5指手套cfu/手套
A级
<1
<1
B级
5
5
C级
25
——
D级
50
——
75%乙醇溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表8
0.1%新洁尔灭溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表9
2%甲酚皂溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表10
75%乙醇用于手消毒效果实验记录见附表11
7.7.消毒剂储存有效期确认试验
7.7.1.目的:
通过该试验,确定消毒剂在有效期内是稳定的,并且消毒效力不会发生变化,符合要求。
7.7.2.程序(chéngxù):
7.7.2.1.在进行消毒剂有效期确认时,每天开启(kāiqǐ)装消毒剂的容器(具塞磨口玻璃瓶、手消毒器、消毒液喷壶(pēnhú))不少(bùshǎo)于3次,其每次开启时间在1~2分钟,以模拟实际操作的最差条件。
7.7.2.2.分别在消毒剂储存的第3天、第5天、第7天、第10天进行取样,进行消毒剂消毒效力的确认。
7.7.2.3.结果计算:
计算试验组和对照组的活菌浓度 (CFU/ml),并换算为对数值(N),并按下式计算杀灭对数值:
杀灭对数值 (KL)=对照组平均活菌浓度的对数值(NO)-试验组活菌浓度对数值(NX)
7.7.2.4.可接受标准:
在消毒液有效期末,杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位。
消毒剂储存有效期确认记录见附表12
8.结论与评价
得出最终结论,并对此验证进行总评价。
9.再验证周期
验证小组负责依据消毒剂消毒效果及存放时限验证的情况,拟订消毒剂消毒效果及存放时限再验证周期,报验证委员会审批。
当出现以下情况是需立即重新进行验证:
9.1.消毒液浓度发生改变时。
9.2.增加新的消毒液时。
9.3.环境检测中发现新的污染菌,不属于实验中的代表菌属时。
9.4.消毒时间发生变化时。
附表1人员培训记录(jìlù)
日期
时间
培训内容
《消毒剂消毒效果及存放时限验证方案》
《清洁剂、消毒剂的配制与使用标准操作程序》
参与人员
考核结果
记录人
日期
复核人
日期
附表2标准(biāozhǔn)菌种检查确认记录
菌种名称
菌种编号
来源
工作菌种代次
工作菌种保存条件
有效期至
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
可接受标准
1.标准菌种必须来源可靠、来源可溯、保存方法与条件合适。
2.使用的标准菌种不能超过第五代。
结论
检查人
日期
复核人
日期
附表3试剂/培养基检查确认(quèrèn)记录
名称
规格
供应商名称
试剂批号
失效日期
营养琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂
培养基
胰酪胨大豆
琼脂培养基
氯化钠
pH7.0氯化钠蛋白胨
缓冲液
95%乙醇
甲酚皂
新洁尔灭
可接受标准
所有试剂、培养基的规格、数量和保存条件满足要求,且在有效期内;脱水培养基呈流动粉末状,无结块,无潮解,且在有效期内。
结论
检查人
日期
复核人
日期
附表40.1%新洁尔灭溶液消毒(xiāodú)效力确认
与消毒剂作用时间
菌种名称
试验组菌落数(cfu/ml)
10-1
平均菌落数(cfu/ml)
杀菌率
1
2
3
5分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
10分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
15分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
阳性对照
稀释级
菌种名称
10-3
10-4
10-5
平均菌落数(cfu/ml)
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
确认结果评价:
操作人
日期
复核人
日期
附表575%乙醇(yǐchún)溶液消毒效力(xiàolì)确认
与消毒剂作用时间
菌种名称
试验组菌落数(cfu/ml)
10-1
平均菌落数(cfu/ml)
杀菌率
1
2
3
5分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
10分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
15分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
阳性对照
稀释级
菌种名称
10-3
10-4
10-5
平均菌落数(cfu/ml)
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
确认结果评价:
操作人
日期
复核人
日期
附表62%甲酚(jiǎfēn)皂溶液消毒(xiāodú)效力确认
与消毒剂作用时间
菌种名称
试验组菌落数(cfu/ml)
10-1
平均菌落数(cfu/ml)
杀菌率
1
2
3
5分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
10分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
15分钟
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
阳性对照
稀释级
菌种名称
10-3
10-4
10-5
平均菌落数(cfu/ml)
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
确认结果评价:
操作人
日期
复核人
日期
附表775%乙醇溶液(róngyè)、0.1%新洁尔灭溶液
消毒(xiāodú)效力确认(quèrèn)(表面(biǎomiàn)实验)
序号
消毒剂
名称
工作菌液
杀灭对数平均值(KL)
不锈钢载(min)
玻璃载片(min)
镀锌载片(min)
5
10
15
5
10
15
5
10
15
1
75%乙醇
金黄色
葡萄球菌
大肠
埃希菌
白色
念珠菌
2
0.1%新洁尔灭溶液
金黄色
葡萄球菌
大肠
埃希菌
白色
念珠菌
可接受标准
阴性对照无菌生长;
杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位。
确认结果评价:
操作人
日期
复核人
日期
附表875%乙醇溶液消毒(xiāodú)后试验(shìyàn)现场
表面(biǎomiàn)微生物检测(jiǎncè)记录
监测区域
洁净
级别
平均菌落数
可接受标准
是否合格
第一次
第二次
第三次
配液间顶棚
C级
25CFU/接触碟.(Ø55mm)
口是口否
配液间墙面
口是口否
配液间地面
口是口否
配液间工作台面
口是口否
灌装间顶棚
A/B级
A级:
<1CFU/接触碟.
B级:
5CFU/接触碟.(Ø55mm)
口是口否
灌装间墙面
口是口否
灌装间地面
口是口否
灌装间设备表面
口是口否
灌装间工作台面
口是口否
工作鞋
B级
5CFU/接触碟.(Ø55mm)
口是口否
清洁布
口是口否
拖布
口是口否
确认结果评价:
操作人
日期
复核人
日期
附表90.1%新洁尔灭溶液(róngyè)消毒(xiāodú)后试验(shìyàn)现场
表面(biǎomiàn)微生物检测记录
监测区域
洁净
级别
平均菌落数
可接受标准
是否合格
第一次
第二次
第三次
配液间顶棚
C级
25CFU/接触碟.(Ø55mm)
口是口否
配液间墙面
口是口否
配液间地面
口是口否
配液间工作台面
口是口否
灌装间顶棚
A/B级
A级:
<1CFU/接触碟.
B级:
5CFU/接触碟.(Ø55mm)
口是口否
灌装间墙面
口是口否
灌装间地面
口是口否
灌装间设备表面
口是口否
灌装间工作台面
口是口否
工作鞋
B级
5CFU/接触碟.(Ø55mm)
口是口否
清洁布
口是口否
拖布
口是口否
确认结果评价:
操作人
日期
复核人
日期
附表102%甲酚(jiǎfēn)皂溶液(róngyè)消毒(xiāodú)后试验(shìyàn)现场
表面微生物检测记录
监测区域
洁净
级别
平均菌落数
可接受标准
是否合格
第一次
第二次
第三次
配液间水池
C级
25CFU/碟.(Ø55mm)
口是口否
配液间地漏
口是口否
确认结果评价:
操作人
日期
复核人
日期
附表1175%乙醇用于手消毒(xiāodú)效果实验(shíyàn)记录(jìlù)
消毒液名称
75%乙醇
配制批号
培养基名称
培养基批号
培养温度
实验日期
培养时间
手指菌测试结果
(cfu/手套)
实验人员
手指菌测试时间
0min
5min
10min
15min
20min
结论
检查人
日期
复核人
日期
附表12消毒剂储存(chǔcún)有效期确认记录(jìlù)
序号
方法
消毒剂名称
工
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- 关 键 词:
- 消毒剂 消毒 效果 有效期 验证 方案 22