酶提取桑葚渣中花色苷的提取.docx
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酶提取桑葚渣中花色苷的提取
桑葚渣中花色苷的提取
摘要:
以提高花色苷的提取率为目的。
探索果胶酶提取桑葚渣中花色苷的工艺条件。
考察影响提取效果的主要因素:
酶用量,酶解时间,酶解温度,根据单因素实验结果,设计正交实验优化桑葚花色苷提取工艺。
材料与方法
1.1材料
酿桑葚酒后的桑葚渣
1.2主要仪器
紫外可见光光度计TU-1800PC
电热恒温振荡水槽DKZ-2
电子分析天平BS-210S
高速组织搅碎机DS-1
电子PH计PP-15
超滤装置
纳滤装置
1.3主要试剂
果胶酶30000U/g
柠檬酸分析纯
磷酸氢二钠分析纯
盐酸分析纯
无水乙醇分析纯
1.4试验设计
1.4.1提取液的配制
磷酸缓冲液的配制;配制0.1mol/L的柠檬酸溶液;配制0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液;0.1mol/L的柠檬酸溶液398ml,加入0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液102ml。
稀释1000ml。
2.桑葚中花色苷提取
2.1用果胶酶酶解桑葚渣
称取10g的桑葚渣于具塞的锥形瓶中,加入一定量的去氧水,加入酶进行酶解。
2.2粗提取花色苷
将上述各酶解后的溶液进行灭酶处理,
过滤提取上清液。
在提取液中加入聚合硫酸铁,并进行过滤,除去絮凝沉淀物,得初级滤液
用石油醚对初级滤液萃取3次除去脂类
最后再真空抽滤,保证提取液无颗粒杂质。
最终得到桑葚花苷素粗提取液。
2.3纯化花色苷
用大孔树脂对粗提取液进行吸附,然后采用45%的乙醇水溶液对已经吸附在大孔树脂上的花色苷有效成分进行洗脱,得洗脱液;
采用纳滤装置对
(1)所得洗脱液进行过滤处理,得到透过液和截留液,实现对
所需溶液和洗脱溶剂的分离;
将所需溶液旋转蒸发后装入培养皿中,冷藏于-80℃冰箱冷冻2h后放入冷冻干燥机冻成干粉。
所得干粉即为纯化后的花色苷
2.4称量干粉的重量
3.花色苷理论测定指标
花色苷含量:
采用消光系数法计算花色苷含量,用分光光度计,于1cm比色皿中,波长为530nm处测定吸光度。
消光系数法:
用9mL酸化乙醇(95%乙醇和1.5N盐酸,体积比85:
15)于1cm比色皿中,在波长为530处测定吸光值。
总花色苷含量计算公式如下:
总花色苷含量
式中:
E-530nm处直接测定的吸光度值()
V-萃取液测定时稀释的总体积数(mL)
M-样品重量(g)
98.2-1%de1花色苷1mol消光系数
4.桑葚渣中花色苷酶提取法单因素实验
4.1.1果胶酶用量对花色苷提取量的影响
称取10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中,加入9ml磷酸缓冲溶液,在温度50℃,PH3.0,酶解时间1h条件下,酶用量分别为0,3,6,9,12和15mg/g果渣酶解后,移取上清液1ml,测定花色苷含量。
果胶酶(mg/g)
0
3
6
9
12
15
花色苷提取率
画出折线图:
由图可知:
4.1.2果胶酶酶解PH对花色苷提取率的影响
称取10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中,加入9ml磷酸缓冲溶液,酶用量40mg/g果渣,酶解时间1.5h,温度50℃。
分别在PH为2,3,4,5,6,7的条件下进行酶解,移取上清液1ml,测定花色苷含量。
PH
2
3
4
5
6
7
花色苷提取率
画出折线图:
由图可知:
4.1.3果胶酶酶解温度对花色苷提取率的影响
称取10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中,加入9ml磷酸缓冲溶液,酶用量40mg/g果渣,酶解时间1.5h,PH3.0,分别在温度为20℃,30℃,40℃,50℃,60℃和70℃的条件下进行酶解后,移取上清液1ml,测定花色苷含量。
酶解温度/℃
20
30
40
50
60
70
花色苷提取率
画出折线图:
由图可知:
4.1.4果胶酶酶解时间对花色苷提取率的影响
称取10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中,加入9ml磷酸缓冲溶液,酶用量40mg/g果渣,在温度50℃,PH3.0,酶解0,0.5,1,1.5,2和2.5h后,移取上清液1ml,测定花色苷含量。
酶解时间/h
0
0.5
1
1.5
2.0
2.5
花色苷提取率
画出折线图:
由图可知:
4.2花色苷酶法提取的条件优化
根据单因素实验结果。
以酶用量,酶解时间,酶解温度为考察因素,按正交法对酶法提取工艺进行研究,优化花色苷酶法提取的最佳工艺条件。
4.2.1正交实验提取花色苷
选用4因素3水平正交设计法,见下表
水平因素
果胶酶用量
PH
提取温度/℃
提取时间/h
1
3
3
40
1
2
6
4
50
1.5
3
9
5
60
2
正交表
实验号
果胶酶用量
PH
提取温度
提取时间
收率
1
1
1
1
1
2
1
2
2
2
3
1
3
3
3
4
2
1
2
2
5
2
2
3
3
6
2
3
1
1
7
3
1
3
3
8
3
2
2
2
9
3
3
1
1
Σ1
Σ2
Σ3
K1
K2
K3
R
由图可知:
5.结论
- 配套讲稿:
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- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 提取 桑葚 花色