生物实验常用溶液的配制.docx
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生物实验常用溶液的配制.docx
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生物实验常用溶液的配制
常用溶液的配制
v贮存液配方
solution
Ingredients
MW
Dose
Note
10M/LNaOH
NaOH
40.00
4g
搅拌溶解
T·H2O
10ml
1M/LTris·Cl
Tris(HOCH2)3CNH2
121.14
12.11g
微波炉加热溶解,冷却后浓盐酸调pH至8.0,加三蒸水定容至100ml
浓盐酸
约5ml
T·H2O
80ml
0.1M/LEDTA
EDTA(C10H6N2O8)
292.25
2.92g
微波炉加热溶解,冷却后10M/LNaOH调pH至8.0,加三蒸水定容至100ml
T·H2O
80ml
RNA酶A母液10mg/ml
RNA酶A
100℃加热15分钟,使混有的DNA酶失活。
冷却后用1.5mleppendorf管分装成小份保存于-20℃
10mmol/LTris·Cl(pH7.5),
15mmol/LNaCl
v工作液配方
solution
Ingredients
materials
Dose
Note
溶液Ⅰ
50mmol/LGlucose
Glucose(C6H12O6•H2O)198.17
0.99g
搅拌溶解后定容至100ml,高压灭菌4℃保存
25mmol/LTris·Cl
1M/LTris·Cl
2.5ml
10mmol/LEDTA
0.1M/LEDTA
10ml
T·H2O
50ml
溶液Ⅱ
1%SDS
SDS
1g
分开常温保存,用时临配。
1ml溶液Ⅱ:
1%SDS980μl+10mol/LNaOH20μl
T·H2O
100ml
0.2mol/LNaOH
溶液Ⅲ
5mol/LKAc
CH3COOKMW:
98.14
60ml
定容至100ml,并高压灭菌。
溶液终浓度:
K+3mol/L,Acˉ5mol/L。
冰醋酸
11.5ml
T·H2O
28.5ml
LB液体培养基(Luria-Bertani)
蛋白胨(Tryptone)
10g
溶于800ml去离子水中NaOH调pH至7.5,加去离子水至总体积1升,高压下蒸气灭菌20分钟
酵母提取物(Yeastextract)
5g
NaCl
10g
LB固体培养基
LB液体培养基
100ml
高压灭菌后成凝胶状,用时微波炉加热至100℃以上溶解,加入5mg/mlAmpcillin1ml(终浓度为50ug/ml),摇匀后倒入培养皿中,冷却凝固即可涂板
琼脂粉
1.2g
氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)工作液
Ampcillin(规格0.48g,80万U)
1支
5mg/ml贮存液(终浓度为50ug/ml),-20℃保存备用
三蒸水
100ml
溶菌酶溶液(10mg/ml)
溶菌酶溶液
0.1g
分装成1ml/小份,保存于-20℃,每一小份一经使用后便予丢弃
10mmol/LTris·Cl(pH8.0)
10ml
3mol/lNaAc(pH5.2)
NaAc·3H2O
40.81g
冰醋酸调pH至5.2,加水定容至100ml,分装后高压灭菌,储存于4℃冰箱
三蒸水
50ml
TE缓冲液
10mmo/LTris·Cl,
1M/LTris·Cl(pH8.0)
0.5ml
加水定容至50ml,高压灭菌后EP管分装备用
1mmol/LEDTA
0.1M/LEDTA(pH8.0)
0.5ml
T·H2O
49ml
TBE缓冲液(5×)
Tris
54g
定容至1000ml
硼酸
27.5g,
0.5M/LEDTA(pH8.0)
20ml
上样缓冲液(6×)
0.25%溴酚蓝
溴酚蓝
0.25g
定容至100ml
40%(w/v)
蔗糖水溶液
蔗糖
40g
三蒸水
80ml
0.7%琼脂糖凝胶
琼脂糖粉
0.14g
微波炉加热溶解。
温度降至50℃左右加入2μlEB(溴化乙锭)后制胶
1×TBE
20ml
50xTAE,pH~8.5(40mMTris碱,40mM醋酸,1mMEDTA)
Tris-碱
242g
Tris加300ml去离子水加热搅拌溶解后,加入0.5M的EDTA(pH8.0)100ml,再加冰醋酸,去离子水调整体积到1升
冰醋酸
57.1g(ml)
Na2EDTA·2H2O
(0.5MEDTApH8.0)
18.61g
(100ml)
10xTBE(89mMTris碱,89mM硼酸,2mMEDTA)
Tris-碱108g
硼酸55g
Na2EDTA·2H2O7.44g
加去离子水调整体积到1升
生物化学实验常用缓冲液的配制方法
1、0.2mol/L磷酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L(pH6.0)*配制量1L
*配置方法1.称取磷酸氢二钠.12水8.82g。
2.称取磷酸二氢钠.2水27.34g。
3.用去离子水溶解并定容至1L。
室温保存。
注意:
此为母液,使用时稀释40倍使用。
2、洗脱液*组份浓度0.15mol/L(含0.15mol/L氯化钠的0.005mol/LpH6.0的磷酸缓冲液)
*配制量10L
*配置方法1.称取氯化钠87.66g。
2.用0.2mol/LpH6.0的磷酸缓冲液250mL溶解。
3.用去离子水稀释至10L。
室温保存。
3、0.3mol/L磷酸缓冲液*组份浓度0.3mol/L(pH7.8)*配制量0.5L
*配置方法1.准确称取磷酸氢二钠.12水49.150g。
2.磷酸二氢钠.2水2.000g。
3.用去离子水溶解并定容至0.5L。
室温保存。
注意:
此为母液,使用时稀释10倍使用。
4、0.2mol/L乙酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L(pH4.6)
*配制量2L
*配置方法1.准确称取乙酸钠.3水54.44g。
2.加入23mL冰乙酸,溶解。
3.用去离子水溶解并定容至2L。
4℃保存。
5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸缓冲液(pH2.6、4.6、6.6)*组份浓度0.2mol/L
*配制量各1L
*配置方法1.母液A(0.2mol/L的Na2HPO4溶液):
称取Na2HPO4.12水143.256g,用去离子水定容至2L。
2.母液B(0.1mol/L的柠檬酸溶液):
称取柠檬酸.1水42.028g用去离子水溶解定容至2L。
3.pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制:
pH值A(mL)B(mL)
2.6109.0891.0
4.6467.5532.5
6.6727.5272.5
4.按上表混匀后,4℃保存。
6、20×SSC缓冲液*配制量1L(pH7.0)
*配置方法1.准确称取175.2g氯化钠。
2.准确称取88.2g柠檬酸钠.2水。
3.溶解于800mL去离子水中。
4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
5.加去离子水定容至1L。
注意:
按实验需要可分装后高压灭菌。
10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。
7、0.15mol/L氯化钠-乙二胺四乙酸二钠缓冲液(pH8.0)*组份浓度0.15mol/L
*配制量1L
*配置方法1.准确称取氯化钠8.77g。
2.称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。
3.溶于800mL去离子水中。
4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。
5.加去离子水定容至1L。
8、1/15mol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.6)*组份浓度0.15mol/L
*配制量1L
*配置方法1.溶液甲(1/15mol/L的KH2PO4溶液):
称取KH2PO49.078g,用去离子水溶解定容至1L。
2.溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):
称取Na2HPO4.2水11.876g(或磷酸氢二钠.12水23.894g)用去离子水溶解定容至1L。
3.pH7.6磷酸盐缓冲液:
将①和②按1.4:
8.6比例混合即可。
9、5×TrisGlycineBuffer(SDSPAGE电泳缓冲液)
*组份浓度0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%(w/v)SDS
*配制量1L
*配置方法1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。
Tris15.1g
Glycine94g
SDS5.0g
2.加入约800mL的去离子水,搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至1L后,室温保存。
10、5×SDSPAGELoadingBuffer
*组份浓度250mMTrisHCl(pH6.8)
10%(W/V)SDS
0.5%(W/V)BPB
50%(V/V)甘油
5%(W/V)β巯基乙醇
*配制量5mL
*配置方法1.量取下列试剂,置于10mL塑料离心管中。
1MTrisHCl1.25mL
SDS0.5g
BPB25mg
甘油2.5mL
2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
3.小份(500μl/份)分装后,于室温保存。
4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
5.加入2M-E的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右
1、1MTrisHCl*组份浓度1MTrisHCl(pH7.4,7.6,8.0)*配制量1L
*配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl
7.4约70mL
7.6约60mL
8.0约42mL
4.将溶解定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度
的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5MTrisHCl*组份浓度1.5MTrisHCl(pH8.8)*配制量1L
*配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随
温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TEBuffer*组份浓度100mMTrisHCl,10mMEDTA(pH7.4,7.6,8.0)
*配制量1L
*配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTrisHClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL
500mMEDTA(pH8.0)20mL
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
3.将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
4.室温保存。
4、3M醋酸钠*组份浓度3M醋酸钠(pH5.2)*配制量100mL
*配置方法1.称取40.8gNaOAc.3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3.加入去离子水将溶液定容至100mL。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
5、PBSBuffer
*组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4
*配制量1L
*配置方法1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。
NaCl8g
KCl0.2g
Na2HPO41.42g
KH2PO40.27g
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:
上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6、10M醋酸铵*组份浓度10M醋酸铵*配制量100mL
*配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100~200mL烧杯中,加入约30mL
的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶口于室温保存。
注意:
醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。
7、TrisHCl平衡苯酚*配置方法
1.使用原料:
大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。
但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。
同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。
因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2.操作注意:
苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。
所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
3.苯酚平衡:
因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
①液化苯酚应贮存于20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。
从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
②加入羟基喹啉(8Quinolinol)至终浓度0.1%。
该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。
有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1MTrisHCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1MTrisHCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇*配置方法
1.说明:
从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇(25:
24:
1)。
氯仿可使蛋白(25:
24:
1)质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配置方法:
将TrisHCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:
1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
9、10%(W/V)SDS*组份浓度10%(W/V)SDS*配制量100mL
*配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解。
2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
3.将溶液定容至100mL后,室温保存。
10、2NNaOH*组份浓度2NNaOH*配制量100mL
*配置方法1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程
中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
3.待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL。
4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。
11、2.5NHCl*组份浓度2.5NHCl*配制量100mL
*配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸(11.6N),均匀混合。
2.室温保存。
12、5MNaCl*组份浓度5MNaCl*配制量1L
*配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
13、20%(W/V)Glucose*组份浓度20%(W/V)Glucose*配制量100mL
*配置方法1.称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的
去离子水后,搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.高温高压灭菌后,4℃保存。
14、SolutionI*组份浓度25mMTrisHCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose(质粒提取用)*配制量1L
*配置方法1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1MTrisHCl(pH8.0)25mL
0.5MEDTA(pH8.0)20mL
20%Glucose(1.11M)45mL
dH2O910mL
2.高温高压灭菌后,4℃保存。
3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)。
15、SolutionII*组份浓度250mMNaOH,1%(W/V)SDS(质粒提取用)*配制量500mL
*配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10%SDS50mL
2NNaOH50mL
2.加灭菌水定容至500mL,充分混匀。
3.室温保存。
此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意:
SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
16、SolutionIII*组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH(质粒提取用)*配制量500mL
*配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc147g
CH3COOH57.5mL
2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至500mL。
4.高温高压灭菌后,4℃保存。
17、0.5MEDTA*组份浓度0.5MEDTA(pH8.0)*配制量1L
*配置方法1.称取186.1gNa2EDTA.2H2O,置于1L烧杯中。
2.加入约800mL的去离子水,充分搅拌。
3.用NaOH调节pH值值8.0(约20gNaOH)。
注意:
pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1L。
5.适量分成小份后,高温高压灭菌。
6.室温保存。
18、1MDTT*组份浓度1MDTT*配制量20mL
*配置方法1.称取3.09gDTT,加入到50mL塑料离心管内。
2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3.适量分成小份后,20℃保存。
19、10mMATP*组份浓度10mMATP*配制量20mL
*配置方法1.称取121mgNa2ATP.3H2O,加入到50mL塑料离心管内。
2.加20mL的25mMTrisHCl(pH8.0),搅拌溶解。
3.适量分成小份,20℃保存。
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