API 20 E.docx
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API 20 E.docx
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API20E
API20E只供体外诊断用
肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统
API20E是肠杆菌科和其它非苛养G-杆菌的标准鉴定系统,包括2个标准化微型生化测试和鉴定资料库。
可鉴定菌谱名录,请参考鉴定表。
原理
API20E试验条是由20个含干燥底物的小管所组成。
这些测定管用细菌悬浮液接种。
培养一定时间後,通过代谢作用产生颜色的变化,或是加入试剂後变色而观察其结果。
根据说明表判读反应,参照分析图索引和APILABPlus软件得到鉴定结果。
试剂
一个ref.20100(25测试)试剂盒包括:
- 25条API20E试验条;
- 25个培养盒;
- 25张报告单
- 1个封口夹
- 1份API20E操作说明书
一个ref.20160(100测试)试剂盒包括:
- 100条API20E试验条
- 100个培养盒
- 100张报告单
- 1个封口来
- 1份API20E说明书
附加试剂(不包括在试剂盒内):
- NaCl0.85%悬浮液,5ml(Ref.20230)或SuspensionMedium县浮液,5ml(Ref.20150)
- API20E试剂盒(Ref.20120)
(TDA,JAMES,VP1,VP2,NIT1,NIT2)或单一附加试剂:
TDA(Ref.70400)
JAMES(Ref.70542)
VP1+VP2(Ref.70422)
NIT1+NIT2(Ref.70442)
OXIDASE试剂(Ref.55635)
- Zn试剂(Ref.70380)
- 石腊油(Ref.70100)
- API专用一次性加样管(Ref.70250)
- APILABPLUS鉴定结果分析软件
- 附加试剂安瓿架(Ref.70200)
必要时,需要以下附加试剂:
- APIOFMedium(Ref.50110)
测定其发酵型或氧化型代谢作用;
- APIMMedium(Ref.51020)
测定兼性厌氧细菌的运动性。
实验室必备设备
- 培养箱(35~37℃)
- 冰箱
- 本生煤气喷灯或酒精灯
- 记号笔
培养基和试剂成份
NaCl0.85%
培养基
5ml
或
悬浮基物
5ml
NaCl8.5g
无离子水1000ml
无离子水
TDA试剂
5ml
Fecl33.4g
H2O加至100ml
JAMES试剂
5ml
J2183化合物(保密)0.5g
HCl1N加至100ml
S24/25:
避免接触皮肤和眼.如与眼接触,必须立即用水冲洗至少10分钟。
如与皮肤接触,用肥皂洗和用水冲洗。
VP1试剂
5ml
KOH40g
H2O100ml
有毒性
R35:
引起严重伤害.
S2:
避免儿童接触.
S26:
如接触眼睛,立即冲洗,做医疗处置.
S27:
立即拿走沾染的衣物
S37/39:
戴手套,保护眼/脸
VP2试剂
5ml
-奈酚6g
乙醇100ml
高度易燃
S7:
严密容器存放
S16:
远离火源,不能吸烟.
NIT1试剂
5ml
对氨基苯磺酸0.4g
乙酸30g
H2O70ml
具腐蚀性
R34:
引起灼伤
S2:
避免儿童接触
S23:
避免吸入蒸气
S26:
若与眼接触,即用水冲洗,并治疗处置.
NIT2试剂
5ml
N,N-二甲基-奈酶胺0.6g
乙酸30g
H2O70ml
具腐蚀性
R34:
引起灼伤
S2:
避免儿童接触
S23:
不能吸入蒸气
S26:
若与眼接触,即用水冲,并治疗处理.
Zn试剂
10g
锌粉
易燃
R15:
若接触水可产生依然气体
R17:
在空气中可自燃
S7/8:
保存干燥密封的容器
S43:
若引起火,使用粉末灭火器'不得使用水.
警告及留意事项:
&<59; 只供体外诊断用。
&<59; 合格检验科工作人员应采用无菌操作方法并防范带传染性物质。
&<59; 不应用口吸取标本或试剂。
&<59; 不应使用过期试剂。
&<59; 由冰箱取出後,所有试剂需达室温(20-30℃)方能使用。
&<59; 小心开启安瓿瓶:
- 用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖向上)
- 尽量将瓶盖压下
- 用大拇指顶住瓶盖上斜面部份
- 向外施加压力直至瓶盖内瓶尖断裂
*无滴头安瓿:
小心移开瓶盖
*附滴头安瓿:
垂直倒置安瓿瓶,挤压瓶盖将所有试剂加入滴瓶
- 所有加样後产品应视之带有污染性,需小心处理。
- 所有病人标本和细菌培养均可能带有污染性,应跟据国际标准处理(NCCLSM29-72:
CDCManualBiosafetyinMicrobiological&BiomedicalLaboraties,1993)
注意:
在放置滴瓶回复垂直位置前轻压瓶身,将剩余在瓶口的试剂吸回滴瓶,以防止试剂污染人体或瓶盖。
&<59; 在完成检测、判读後,所有标本,污染物及试条必须高温高压消毒,烧成灰或在丢弃前浸於消毒水内杀菌。
&<59; 最後鉴定的结果需由合格微生物学家肯定,同时需考虑病史、标本来源、菌落及显微镜下生长形态、其他测试结果,例如药敏结果。
试验条的贮存
试验条采用铝袋包装并附有干燥剂。
在开启铝袋後,请使用封口夹(试剂盒已含有)封口,以保证试条的干燥。
开启铝袋後,在2-8℃环境下,试验条可享有10个月的有效期(或包装盒上的有效期,以较短时间为准)。
(*)建议开封的方法:
在封口下方剪开铝箔装,为防止意外损坏干燥剂,开封时应保持铝箔袋垂直。
附加试剂的贮存
附加试剂应储於黑暗2-8℃环境下(除TDA,VP1及NIT1可储於2-30℃及Zn可储於8-30℃)直至有效期。
当安瓿瓶打开後,所有试剂只有一个月有效期(或包装盒上的有效期,以较短时间为准)。
请小心记录开启安瓿的时间。
JAMES试剂对光非常敏感:
请用箔纸包裹里,只在使用时才从冰箱中取出,同时应避免长时间放至放室温中。
附加试剂的使用
在使用前,所有附加试剂需达到室温(20-30℃)
1.API20E试剂盒:
&<59; 压下安瓿瓶盖直至和安瓿瓶尖接触。
&<59; 垂直握住安瓿,用大拇指施加压力於瓶盖斜面以推断安瓿尖。
&<59; 将安瓿瓶倒置,并保持垂直。
&<59; 小心拧松瓶盖以滴出试剂。
2.TDA,VP1,VP2,NIT1,NIT2附加试剂(附有滴头的安瓿)
&<59; 根据"警告和注意事项"一栏所列方法打开一安瓿试剂。
&<59; 滴出一滴试剂後小心盖上安瓿。
&<59; 根据"试剂的贮存"一栏,贮存试剂。
3.JAMES附加试剂(不附有滴头的安瓿)
&<59; 根据“警告和注意事项”(不带滴头安瓶)一栏所列方法开启与JAMES试剂有关溶剂的安瓿。
&<59; 使用沏底干燥的吸管取出安瓿内的溶剂转入滴瓶(包括干燥的活性成分)。
&<59; 滴瓶按上滴头。
&<59; 小心密闭瓶。
&<59; 震荡
&<59; 等待5-10分钟,直至活性成分完全溶解。
&<59; 使用如此重新组成的试剂后,根据“附加试剂的贮存”所示方法,小心密闭瓶子和贮存。
4.Zn附加试剂
&<59; 打开小瓶
&<59; 取大约2-3mgZn粉未,使用小刮铲将粉未加入反应小管.
&<59; 使用试剂後,拧紧瓶盖,根据"试剂的贮存"一栏,贮存试剂。
5.OXIDASE试剂:
&<59; 根据生产商建议进行试验。
&<59; 在记录纸上纪录结果
注意:
必须进行氧化酶试验,该试验是反应谱的一部份(第十一个试验)
使用说明:
标本试验前准备
临床或其他标本不应直接接种於API20E。
需要进行鉴定的非苛养革兰氏阴性杆菌必须首先根据标准微生物处理技术於培养琼脂(例如,麦康凯)上培养分离。
试验条的准备
&<59; 准备一个培养盒(盘和盖子),倒入约3ml蒸馏水(不含其它杂质或Cl2、CO2挥发性气体的水亦可)倒入盘的蜂窝凹中,造成湿室。
&<59; 记录菌株资料于盘的边沿部分(不记在盖上,以免错放)。
&<59; 从包装中取出试验条置于盘中。
注:
API20E只能用于不苛养的G-杆菌。
苛养菌主要指对营养需求有特殊需要的菌(例布鲁氏菌属Brucella和法朗西丝菌属Francisella),这些菌没有包括在API20E数据库中。
必须采用有效方法,排除这些菌的存在
接种物的制备:
-根据"警告及注意事项"一栏所列方法打开一安瓿NaCl0.85%(5ml)或SuspensionMedium(5ml)或使用无杂质无菌5ml盐水/蒸馏水。
-以接种针从分离物的平板上挑取已分纯单个菌落至悬浮基物中。
-仔细研匀以达到均一的细菌悬液
注意:
大多数弧菌均嗜盐,如怀疑菌株为弧菌,请使用NaCl0.85%(5ml)medium悬浮液。
试验条的接种
● 用吸管将细菌悬液充满檬酸CIT、VP各GEL管;
● 其它管仅充满管部(不是杯部);
● ADH、LDC、URE、ODC和H2S,则用矿物油覆盖;
● 盖上盖子,孵育於35~37℃18~24小时。
● 於周未孵育:
API20E的生化反应需於孵育18-24小时後判读,如无法进行试条需於温箱取出并置於2-8℃直至可以进行判读。
判读试验条
&<59; 在35~37℃培养18~24小时後,参考说明表判读其结果;
&<59; 记录由自发代谢作用而产生的结果於报告单上;
&<59; 如果葡萄糖是阳性并且/或3个以上测定是阳性的话:
加试剂观察结果;
- TDA测定:
加一滴TDA试剂,深褐色为阳性反应,记录於报告单上。
- IDN测定:
加一滴James试剂。
反应立即发生:
粉红色出现在整个反应应管者为阳性,记录於报告单上。
或加一滴吲哚试剂,等2分钟,出现红色环表明为阳性反应。
- VP测定:
各加1滴VP1和VP2试剂,至少等待10分钟,浅粉或红色表明阳性结果,记录於报告单。
如浅粉红色在10至12分钟内出现,判断结果为阴性。
- NO2测定:
各加一滴Nit1和Nit2试剂於葡萄糖管内,待2~3分钟後,红色表示阳性,阴性反应(黄色)可能由於还原至N2(有时还有气泡):
加2-3mg锌粉到葡萄糖管,5分钟後,如果管保持黄色表示N2阳性记录於报告单。
如果测定变粉红,这明是阴性;硝酸盐仍留管内,被锌粉还原。
此测试能有效帮助对革兰氏阴性,氧化酶阳性杆菌的鉴定。
注意:
Nitrate还原及Indole测试需在最後进行,因为以上反应会产生氧体,影响其他反应判读。
在加入有关试剂後,请小心勿调换培养盒。
&<59; 如果萄萄糖是阴性,并且阳性测定的数目少於3个或等於3个,先不加试剂:
- 接种2个APIOF培养基证葡萄糖的代谢类型;
- 划一个MacConkey平板;
- 接种1个APIM培养基测定运动性或用显微镜直接观察;
- 重新培养24小时;
- 如上述那样加入试剂;
- 记录试验条和补充试验的结果於告单,参考说明表。
鉴定
● -用分析图形检索或APILABPlus软件:
所得反应的类型必须以数字化形式记录在报告单,每3个测定为一组,每个以1、2和4标明,在每组中,阳性反应以相应的数字相加,由API20E的20个测定可得一个7位数。
氧化酶反应构其第21个反应,如阳性则为4。
● 有时,7位数检索编码还不足以区分菌株,需要进行一些补充试验:
- NO3盐还原到亚硝酸盐(NO2);
- 亚硝酸盐还原到氮(N2);
- 运动性(MOB);
- 在MacConkey(McC)培养基上的生长;
- 葡萄糖氧化型(OF-O);
- 葡萄糖发酵型(OF-F)。
根据相同的原理,将相应的反应编码,则得到一个9个位数的编码。
举例:
5315173-57日勾维肠杆菌
质量控制
培养基、试验条和试剂在生产的不同阶段都已进行严格的系统性质量控制。
对进行质控实验室,推荐以下标准菌株,预期结果如下:
ONPG
ADH
LDC
ODC
H2S
URE
TDA
IND
GLU
MAN
INO
SOR
RHA
SAC
MEL
AMY
ARA
NO3*
1.
+
–
V
–
V
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–
–
–
–
+
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–
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2.
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–
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–
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+
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+
+
+
+
3.
–
–
–
+
V
+
+
+
–
–
V
+
–
–
–
–
V
–
–
–
+
4.
+
–
+
–
+
–
V
–
–
V
–
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
5.
+
–
+
+
–
–
–
–
+
–
–
+
+
–
+
+
–
+
–
+
+
1.Stenotrophomonasmaltophilia(嗜麦芽糖寡养单胞菌)ATCC51331
2.Enterobactercloacae(阴沟肠杆菌)ATCC13047
3.Proteusmirabilis(奇异变形杆菌)ATCC35659
4.Klebsiellapneumoniaessppneumoniae(肺炎克雷伯菌)ATCC35657
5.Escherichiacoli(大肠埃希氏菌)ATCC25922
ATCC:
AmericanTypeCultureCollection,12301ParklawnDrive,Rockville,Maryland20852,USA.
&<59; ATCC51331於胰大豆血琼脂培养24-48小时后,取得反应应谱。
&<59; 其他菌株於胰大豆血琼脂培养18-24小时,取得反应谱。
&<59; 使用NaCl0.85%培养基制备菌悬液。
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