实验室常用培养基的配制方法.docx
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实验室常用培养基的配制方法
五、实验室常用培养基的配制方法
Ampicillin(氨卡青霉素)(100mg/ml)
组份浓度100mg/mlAmpicillin
配制量50ml
配制方法1.称量5gAmpicillin置于50ml离心管中。
2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50ml
3.用0.22m过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1ml/份)后,-20T保存。
IPTG(异丙基-B-D-硫代半乳糖苷)(24mg/ml)
组份浓度24mg/mLIPTG
配制量50mL
配制方法1.称1.2gIPTG置于50ml离心管中。
2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50ml
3.用022m过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1ml,份)后,-20E保存。
X-Gal(20mg/ml)
组份浓度20mg/mlX-Gal
配制量50ml
配制方法1.称量IgX-Gal置于50ml离心管中。
2.加入40mlDMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50ml
3.小份分装(1ml/份)后,-20C避光保存。
ID拉差甘
LB培养基
组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨),0.5%(W/V)YeastExtract(酵母提取物),
1%(W/V)NaCI
配制量1L
配制方法1.称取下列试剂,置于lL烧杯中。
Tryptone
10g
YeastExtract
5g
NaCl
10g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH(约0.2m1),调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1Lo
5咼温咼压火菌后,4。
C保存。
LB/Amp培养基
组份浓度
0.5%(W/V)
YeastExtract
1%(W/V)
NaCl
0.1mg/ml
Ampicillin
配制量1L
配制方法1•称取下列试剂,置于IL烧杯中
Tryptone
10g
YeastExtract
5g
NaCl
10g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH(约0.2mL)。
调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定谷至1Lo
5.咼温咼压火菌后,冷却至室温。
6.加入1mlAmpicillin(100mg/ml)后均匀混合。
7.4°C保存。
TO拉差甘
IB培养基
1.2%(W/V)
Tryptone
2.4%(W/V)
YeastExtract
0.4%(V/V)
Glycerol
17mM
KH2PO4
72mM
K2HPOa
配制量1.L
配制方法1.配制磷酸盐缓;中液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100ml。
溶解2.31gKH2PC4和l2.54gK2HPO4于90ml的去离子水中,搅
拌溶解后,加去离子水定容至100ml,咼温咼压火菌2.称取下列试剂,置于lL烧杯中。
Tryptone
12g
YeastExtract
24g
Glycerol
4m
3.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
4.加去离子水将培养基定容至1L后,咼温咼压火菌。
5.待溶液冷却至60C以下时,;加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6.4C保存。
TB/Amp培养基
组份浓度
1.2%(W/V)
Tryptone
2.4%(W/V)
YeastExtract
0.4%(V/V)
Glycerol
17mM
KH2PO4
72mM
K2HPO4
0.1mg/ml
Ampicillin
配制量
配制方法
SOB培养基
组份浓度
配制量
配制方法
压灭菌。
SOC培养基
组份浓度
1L
1•配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100ml。
溶解2.31gKH2PO4,和12.54gK2HPO4于90ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100ml,咼温咼压火菌。
2.称取下列试剂,置于IL烧杯中。
Tryptone
12g
YeastExtract
24g
Glycerol
4ml
3.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
4.加去离子水将培养基定容至IL后,咼温咼压火菌。
5.待溶液冷却至60C以下时,加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6.均匀混合后4C保存。
在90ml的去离子水中溶解1.86gKCl后,定容至100ml。
2.配制2MMgCl2溶液。
在90ml去离子水中溶解19gMgCl2后,定容至100ml,高温高
4.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
5.量取10m1250mMKCl溶液,加入到烧杯中。
6.滴加5NNaOH溶液(约0.2m1),调节pH值至7.0。
7.加入去离子水将培养基定容至lL0
8.高温高压灭菌后,4C保存。
9.使用前加入5ml灭菌的2MMgCl2溶液。
2%(W/V)
Tryptone
0.5%(W/V)
YeastExtract
0.05%(W/V)
NaCl
2.5mM
KCl
10mM
MgCl2
20mM
Glucose
配制量100mL
配制方法1.配制IMGlucose溶液。
将18gGlucose溶于90ml去离子水中,充分溶解后定容至100ml。
用0.22何滤膜过滤除菌。
2.向I00mlSOB培养基中加入除菌的1MGlucose溶液2ml,均匀混合。
3.4C保存。
28T培养基
组份浓度1.6%(WV)Tryptone,1%(W/V)YeastExtract,0.5%(W/V)NaCI配制量1L
配制方法1.称取下列试剂,置于lL烧杯中。
Tryptone
16g
YeastExtract
10g
NaCl
5g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴力卩5NNaOH,调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1Lo
5.咼温咼压火菌后,4C保存。
①bxbroth
组份浓度2%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)YeastExtract,o
5%(W/V)MgSO47H2O
配制量1L
配制方法1.称取下列试剂,置于lL烧杯中。
Tryptone
20g
YeastExtract
5g
MgSO47H2O
5g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解
3.滴加1NKOH。
调节pH值至7.5o
4.加去离子水将培养基定容至1Lo
5.咼温咼压火菌后,4C保存。
NZCYM培养基
0.5%(WV)
YeastExtract
0.1%(WV)
CasaminoAcid(酪蛋白氨基酸)
1%(WV)
NZ胺
0.5%(WV)
NaCl
0.2%(WV)
MgSO47Ho
1L
1•称取下列试剂。
置于IL烧杯中
YeastExtract
5g
CasaminoAcid
1g
NZ胺
10g
NaCl
5g
MgSO47Ho
2g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH(约0.2ml),调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定谷至1Lo
5.咼温咼压火菌后,4C保存。
组份浓度
配制量
配制方法
NZYM培养基
组份浓度
0.5%(WV)
YeastExtract
1%(WV)
NZ胺
0.1%(WV)
NaCl
0.2%(WV)
MgSO47Ho
配制方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid外,其他成份与NZCYM培养基相同。
NZM培养基
组份浓度
1%(WV)
NZ胺
0.1%(WV)
NaCl
0.2%(WV)
MgSO47Ho
配制方法NZM培养基除不含YeastExtract酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。
一般固体培养基的配制
配制方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。
Agar(琼脂;铺制平板用)
15g/L
Agar(琼脂;配制顶层琼脂用)
7g/L
Agarose(琼脂糖;铺制平板用)
15g/L
Agarose(琼脂糖;配制顶层琼脂用)
7g/L
2.高温高压灭菌后,戴上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂
糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。
3.待培养基冷却至50~60°C时,加入热不稳定物质(如抗生素等),摇动容器充分混匀。
4.铺制平板(30~35ml培养基/90mm培养皿)。
LB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基组份浓度
1%(W/V)
Tryptone
0.5%(W/V)
YeastExtract
1%(W/V)
NaCl
0.1mg/ml
Ampicillin
0.024mg/ml
IPTG
0.04mg/ml
X-GaL
1.5%(W/V)
Agar
配制量1L
配制方法1•称取下列试剂,置于lL烧杯中
Tryptone
10g
YeastExtract
5g
NaCl
10g
2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加5NNaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。
5.高温高压灭菌后,冷却至60C左右。
6.加入1mlAmpicillin(100mg/ml)、1mlIPTG(24mg/ml)、2mlX-Gal(20mg/mL)后均匀混合。
7.铺制平板(30~35ml/90mm培养皿)。
8.4C避光保存。
TB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基组份浓度
1.2%(W/V)
Tryptone
2.4%(W/V)
YeastExtract
0.4%(V/V)
Glycerol
17mM
KH2PO4
72mM
K2HPO4
0.1mg/ml
Ampicillin
0.024mg/ml
IPTG
0.04mg/mL
X-GaL
1.5%(W/V)
Agar
配制量1L
配制方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4)100ml。
溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90ml的去离子水中,搅
拌溶解后,加去离子水定容至100ml,咼温咼压火菌
2.称取下列试剂,置于IL烧杯中。
Tryptone
12g
YeastExtract
24g
Glycerol
4ml
3.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解
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- 实验室 常用 培养基 配制 方法