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无菌操作
篇一:
无菌技术操作规范
无菌技术操作规范
一、无菌技术操作原则
1.环境要清洁。
进行无菌技术操作前半小时,须停止清扫地面等工
作,避免不必要的人群流动,防止尘埃飞扬。
治疗室每日用紫外线照射消毒一次。
2.进行无菌操作时,衣帽穿戴要整洁。
帽子要把全部头发遮盖,口
罩须遮住口鼻,并修剪指甲,洗手。
3.无菌物品与非无菌物品应分别放置,无菌物品不可暴露在空气中,
必须存放于无菌包或无菌容器内,无菌物品一经使用后,必须再经无菌处理后方可使用,从无菌容器中取出的物品,虽未使用,也不可放回无菌容器内。
4.无菌包应注明无菌名称,消毒灭菌日期,并按日期先后顺序排放,
以便取用,放在固定的地方。
无菌包在未被污染的情况下,可保存7-14天,过期应重新灭菌。
5.无菌物品时,必须用无菌钳(镊)。
未经消毒的物品不可触及无
菌物或跨越无菌区。
6.进行无菌操作时如器械、用物疑有污染或已被污染,即不可使用,
应更换或重新灭菌。
7.一套无菌物品,只能供一个病员使用,以免发生交叉感染。
二、准备质量标准
1.工作人员着装整洁,洗手、戴口罩、修剪指甲。
2.备齐用物。
3.治疗盘,无菌持物钳或镊放于无菌罐内,无菌溶液、无菌包、无
菌容器及物品、无菌手套、弯盘、75%酒精、无菌棉签。
4.查对无菌物品、灭菌日期及手套号。
5.用物排放有序,符合无菌操作要求。
三、操作流程质量标准
1.选择清洁、干燥、宽阔的场所进行操作。
2.解开无菌包系带卷放在包布下边。
3.用拇指和食指先揭左右两角,最后揭开内角,注意手不可触及包
布的内面。
用无菌钳(镊)取出一块无菌巾放于治疗盘内,剩余部分按原折痕包起扎好,并注明开包时间。
4.铺无菌盘:
双手拇、食指捏住治疗巾两上角外面,轻轻抖开,双
折铺于治疗盘上,内面为无菌区,盖的半幅成扇形折到对面无菌盘上,开口边向外,放入无菌物品后,边缘对齐盖好。
将开口处向上翻折两次,两侧边缘向下翻一次,以保持无菌。
5.打开无菌容器盖,必须把盖的无菌面(内面)向上,放在稳妥处,
夹取所需物品放入无菌盘内后立即盖严。
6.倒无菌溶液,仔细检查核对溶液后,面对瓶签两手拇指将橡皮塞
向上翻转,将橡皮塞拉出,另一只手(或同一只手)握住瓶签倒出少许溶液冲净瓶口,再由原处倒出所需溶液于无菌容器中,套上瓶塞并消毒翻转部分与瓶颈(从非污染处到污染处)后立即盖好,并注明开瓶时间。
7.带无菌手套法,打开无菌手套包,核对灭菌日期和消毒指示胶带
及无菌手套袋上所注明的手套号码、然后将手套袋摊开,取出滑石粉包,将粉擦于手掌、手背和指间,以一手掀起手套内袋开口处,另一手捏住手套翻折部分(手套内面)取出手套,使手套的两拇指相对,一手伸入手套内戴好,再以戴好手套的手伸入另一手套的反折部分,依法戴好另一手套,将反折部分翻转套在工作服衣袖外面,揭开无菌盘进行无菌操作。
8.持无菌容器时应托住底部,不可触及容器内面及边缘。
9.开包递送无菌物品时,一手托起无菌包,另一手打开无菌包一角,
将带子卷起夹在托包的手指缝内,另一手依次打开其它三角并抓住递送或稳妥地将包内物品放入无菌容器中(无菌区域内)。
10.操作完毕,从手套口翻转向下脱去手套,整理用物。
四、终末质量标准
1.操作有序,方法正确,无菌概念清楚,无菌观念强。
2.能口述无菌操作的原则与注意事项。
五、注意事项
1.开包后的无菌包和开封后的无菌溶液有效期均为24小时,无菌盘
有效期限不超过4小时。
2.取无菌持物钳时,无菌持物钳不可触及容器口边缘。
使用时应保
持钳端向下,不可倒转向上,用后立即放入容器中。
如到远处夹取物品时,无菌持物钳应连同容器一并搬移,就地取出使用。
无菌持物钳只能用于夹取无菌物品,不能用于换药和消毒皮肤。
无菌持物钳及无菌罐每4小时更换。
3.使用无菌瓶内的溶液时,不可将无菌敷料堵塞瓶口倾倒无菌溶液,
或直接伸入溶液瓶内蘸取,以免污染剩余的溶液。
4.无菌包内物品不慎污染或无菌包浸湿,外界微生物可渗入包内,
造成污染,需重新消毒。
5.戴手套时应注意未戴手套的手不可触及手套外面,而戴手套的手
则不可触及未戴手套的手或另一手套的里面。
戴手套后如发现破裂,应立即更换。
脱手套时,须将手套口翻转脱下,不可用力强拉手套边缘或手指部分,以免损坏。
篇二:
无菌操作技术规范
无菌操作技术规范
无菌技术是在医疗护理操作过程中,保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物侵入人体的一系列操作技术。
无菌技术作为预防医院感染的一项重要而基础的技术,医护人员必须正确熟练地掌握,在技术操作中严守操作规程,以确保病人安全,防止医源性感染的发生。
一、无菌技术的操作原则:
1、进行无菌操作的环境应清洁、宽敞。
操作前半小时须停止扫地、更换床单等工作,空气清新,无尘埃。
2、无菌操作前,操作人员要穿戴整洁,帽子须遮盖全部头发,口罩须盖住口鼻,并认真彻底洗手(七步洗手法)
洗手方法:
1)手掌对手掌;
2)手背对手掌;
←3)两手指缝相对互擦;
4)双手并扣互擦指背;↓
5)拇指在掌心旋转擦洗;↓
;
←6)指尖对手掌擦洗。
(7)摩擦手腕,然后彻底流水冲净。
认真揉搓双手至少15s,范围为双手、手腕及腕上10cm,注意指尖、指缝、拇指、指关节等处清洗干净。
3、实施无菌技术操作必须使用无菌物品。
一次性使用的无菌医疗器械、用品不得重复使用。
4、无菌物品与非无菌物品应分柜放置,并有明显标志。
无菌包需标明物品名称、灭菌日期,按失效期先后顺序摆放。
无菌包的有效期按7天计算,过期或受潮应重新灭菌。
无菌柜应定期整理、清洁。
5、在无菌技术操作时,必须明确无菌区和非无菌区。
6、使用无菌物品前必须认真检查无菌包包装完整性、标识有效性、即无菌包的名称、灭菌时间或失效期、签名等,检查包内外化学指示胶带变色情况等。
湿包或有明显水渍,密封容器的筛孔被打开,灭菌包掉落在地或误放
不洁之处,包装破损或发霉,外包装指示带或包内指示卡变色没有达到标准或有疑问等情况,应视为污染,不能再使用。
不得使用过期无菌物品。
7、进行无菌操作时,操作者应面向无
菌区域并与无菌区保持一定距离;手臂应
保持在腰部或操作台面以上,操作过程中
不可跨越无菌区,手不可触及无菌物。
操
作时不可面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。
8、无菌物品必须一人一用一灭菌。
取
用无菌物品时应用无菌持物钳/镊近距离夹取。
无菌持物镊/钳可用消毒液浸泡或干性保持。
湿式无菌持物钳、筒及筒内消毒液每周更换一次,干式无菌持物筒和钳每4h更换一次,一旦污染随时更换。
9、无菌物品取出后不可放回无菌容器内。
应用无菌巾包(盖)好,超过4h不得使用。
开启的无菌药液须注明时间。
开启的无菌溶液须在4h内使用,其他溶液不得>24h。
注射治疗时,应用无菌盘,抽出的药液不得>2h。
10、用于无菌技术操作的棉球、棉签、纱布。
根据一次用量的标准,独立包装。
用无菌容器盛放的无菌物品,一经打开,使用时间最长不得>24h。
11、消毒皮肤用的碘伏、酒清应密闭保存。
病区盛放消毒溶液的容器每周灭菌2次。
二、无菌技术的操作流程
医务人员在执行无菌技术操作前,首先戴好帽子,帽子要求遮盖全部头发,然后按七步洗手法洗手后戴口罩,环境要求宽敞、清洁。
(一)戴无菌手套
1、查看无菌手套:
展开无菌手套包,一手掀起手套袋开口处查看袋中手套的摆放,将手套反褶部分移到近身处。
2、提取手套:
两手同时掀起手套开口处,分别捏住两只手套的反褶部分(手套内面)向前向上一次性取出两只手套。
3、戴手套:
一只手提取两只手套的反褶部分(手套内面),另一只手五指并拢,伸入至手套指根部,再张开五指对准手套五指戴上。
再用带好手套的手四指并拢插入另一手套的反褶内面(手套外面),
分别用食、小指支
撑手套反褶内面挠、尺两侧顶端,未戴手套的手对准手套的手指插入手套内;将手套的反折部翻上套在工作服袖口或手术衣袖口上。
(二)铺无菌治疗盘:
1、取无菌治疗巾
(1)用清洁小毛巾抹拭治疗盘
(2)按无菌技术操作原则第6条对无菌治疗巾包、无菌持物钳进行核实,备用。
(3)将无菌治疗巾包平放在清洁、干燥的操作台上,解开系带,卷放于包布下,按原折顺序由远到近逐层打开无菌包。
2、铺无菌治疗盘
(1)用双手分别捏无菌巾的一边左右两上角外面轻轻抖开,双折铺于治疗盘上,将上层折成扇形,边缘向外,治疗巾内面构成无菌面。
(2)按需夹取无菌物品有序摆放于无菌盘内,用两手捏着治疗巾的外面,拉开扇形折叠层遮盖于物品上。
(3)治疗巾上下边边缘向下折一次,保持无菌面相对密闭性。
(4)准备好的无菌盘若不马上使用,需注明铺盘的日期、时间、有效期4h。
(三)无菌持物钳使用
1、按无菌技术操作原则第6条的要求核对、检查无菌包。
2、解开系带,卷放于包布下,按原折顺序逐层打开无菌包,取出无菌持物钳筒,取出无菌持物钳放于无菌持物钳筒内备用,干燥保存有效期4h,用灭菌剂保存时有效期7天。
3、取物时打开筒盖,操作者用手持钳的上1/3以上处,闭合钳端取出持物钳,避免接触容器边缘而被污染,用2%戌二醛保存的无菌持物钳使用时钳端向下,防止浸泡液倒流而污染钳端。
4、到远外取物时,要连同无菌持钳筒一起移动持物钳。
5、取物后,把钳端闭合垂直放回无菌持物钳筒内,并盖好盖。
(四)取无菌溶液
1、首先清洁无菌溶液瓶外的灰尘。
2、核对无菌溶液名称、浓度、有效期、检查溶液有无沉淀、混浊、变色,检查瓶盖有无松动,瓶身有无裂缝。
3、用启瓶盖器开启瓶盖,然后用拇指与食指或双手拇指将瓶塞边缘向上翻起。
4、用一食指和拇指夹住瓶塞将其拉出。
5、用一手拿溶液瓶签朝向掌心,先倒出少许以冲洗瓶口,再由原处倒出溶液至无菌溶器中。
6、倒毕塞进瓶塞,消毒瓶塞、瓶盖,然后盖好,未用完者需注明开启日期、时间。
(五)无菌容器的使用
1、检查无菌容器名称、灭菌日期。
2、取物时,打开无菌容器盖,内面向下,用持物钳夹取无菌物品,若是在口杯类无菌容器内取物时,一手打开容器盖,一手用持物钳夹取无菌物品。
3、取物后,立即将盖盖严。
4、手持无菌容器时应托住容器底部,不能触及容器边缘及内面。
篇三:
无菌操作
浅谈实验室中的无菌操作的基本技术
摘要:
实验室无菌操作是实验成败的关键,对无菌操作的要求及原则进行初步探讨,消毒设备的使用的细节问题的分析,使无菌操作顺利进行,实验得以成功。
关键词:
无菌操作要求使用方法
1.关于实验室无菌操作
1.1无菌操作的定义
在各种生物实验中,为了防止微生物地生长和繁殖影响实验的进行,要在无菌的环境下进行,在实验过程中采取的防菌措施,就是无菌操作。
1.2无菌操作的重要性
在实验过程中,各个环节微生物都有可能进入,若其中的任何一个环节属非无菌操作,那么其它环节虽是无菌操作,也将完全失去意义。
微生物的进入会污染实验室的药品和器材,或者由实验人员带进实验室,微生物的旺盛生长,会影响目标实验物的存活或生长。
所以,实验室中的无菌操作是至关重要的。
2.无菌操作的要求
2.1操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭
无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10分钟后,才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。
2.2无菌操作的工作人员
(1)操作前应剪短指甲,脱去戒指、手镯等装饰物,指甲表面禁涂指甲油。
工作人员实用的工作服、帽子、口罩等,要经常保持干净,并定期进行消毒。
工作人员的头发、衣服、手指中都有许多杂菌,为此要穿上工作服,戴上帽子。
(2)洗手。
先用肥皂,在用0.01%新洁尔灭洗手,接种操作前再用70—75%酒精擦洗。
用肥皂搓洗手掌、手背、指间、手指及关节,然后用流动水将双手的皂液全部洗净,用清洁手巾擦干双手。
(3)消毒手。
双手清洁后,浸泡于配制好的金星消毒液或其它适宜的具有高效、速效、长效、广谱灭菌、无毒、无腐蚀、无刺激性异味的消毒剂中适时,用消毒手巾擦干双手。
(4)工作人员呼吸所产生的污染,主要是接种时谈话或咳嗽所引起,因此,接种时禁止谈话并应带上口罩。
2.3界面与外界隔离,避免微生物的侵入
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。
实验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。
小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在之开之容器正上方操作实验。
容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少ClassII)。
操作过程中,应避免引起aerosol之产生,小心毒性药品,例如DMSO及TPA等,并避免尖锐针头之伤害等。
3无菌操作的原则
3.1检验应在无菌室(指超净工作室,局部达到100级)内进行,无菌室应经常打扫,用2%~5%的来苏尔(煤酚皂溶液)擦洗桌面、台面及墙壁。
无菌室在使用前,用紫外线灯照射30min进行空气消毒。
进入无菌室前先洗手,在缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、鞋。
工作鞋只能在无菌室使用,禁止在无菌室外使用。
检验工作中样品及无菌物打开后,操作者在操作时应与样品及无菌物保持一定距离;未经消毒的物品及手绝对不可直接接触样品及无菌物品;样品及无菌物不可在空气中暴露过久,操作要正确;取样时必须用无菌工具(如镊子、勺子)等,手臂不可从样品及无菌物面上横过;从无菌容器中或样品中取出之物虽未被污染,也不可放回原处。
3.2无菌物品应分类放置固定地点,并定期检查(一般两个星期重新灭菌一次),不可与未灭菌的物品混放在一起。
瓶口、袋口开启前用75%酒精棉球反复擦拭至少二三遍(瓶口由中央到边沿,袋口由上至下擦拭)。
3.3定期作实验室沉降菌计数,以检查无菌实验室微生物生长繁殖动态。
4消毒灭菌设备的使用
4.1紫外消毒
(1)在使用过程中,应保持紫外线灯表面的清洁,防止灰尘影响紫外线的穿透,一般每2周用酒精棉球或纱布擦拭1次,特殊情况随时擦拭。
(2)消毒室内空气时,房间内应保持清洁干燥,减少尘埃和水雾,温度低于20℃或高于40℃,相对湿度大于60%时,应适当延长照射时间。
(3)用紫外线灯进行了杀菌消毒或对紫外线灯的有效性进行检测时,都要认真防护,勿让紫外线直接照射到皮肤和眼睛。
(4)紫外线灯随着使用时间的延长,紫外线的有效辐射会不断衰减,杀菌力会降低,应定期用紫外线照度计或化学测试卡检测紫外光的强度,当强度低于70LW?
cm2时须更换灯管。
(5)紫外线照度计应按周期送法定的计量检定机构进行计量检定,以保证消毒的效果。
紫外线灭菌在接种室、超净台上或接种箱用紫外灯灭菌。
紫外线灭菌是利用辐射因子灭菌,细菌吸收紫外线后,蛋白质很核酸发生结构变化,引起细菌的染色体变异,造成死亡。
紫外线的波长为200-300nm,其中260nm的杀菌能力最强,但是由于紫外线的穿透能力很弱,所以只适于空气和物体表面的灭菌,而且要求距照射物以不超过1.2米为宜。
4.2高压锅灭菌
(1)在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加。
在0.1MPa的压力下,锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
(2)注意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底。
高压灭菌放气有几种不同的做法,但目的都是要排净空气,使锅内均匀升温,保证灭菌彻底。
常用方法是:
关闭放气阀,通电后,待压力上升到0.05MPa时,打开放气阀,放出空气,待压力表指针归零后,再关闭放气阀。
关阀再通电后,压力表上升达到0.1MPa时,开始计时,维持压力0.1-0.15MPa,20分钟。
(3)按容器大小不同,保压时间有所不同,见表。
该表所列数字是彻底灭菌很保险的数字,如果容器体积较大,但是放置的数量很少,也可以减少时间。
(4)到达保压时间后,即可切断电源,在压力到0.5MPa,可缓慢放出蒸汽,应注意不要使压力降低太快,以致引起激烈的减压沸腾,使容器中的液体四溢。
当压力降到零后,才能开盖,取出培养基,摆在平台上,以待冷凝。
不可久不放气,引起培养基成分变化,以至培养基无法摆斜面。
一旦放置过久,由于锅炉内有负压,盖子打不开,只要将放气阀打开,大气压入,
内外压力平衡,盖子便易打开了
4.3酒精棉球的制备及用法
(1)棉球的准备。
将大小适宜的棉球置于单层布袋中扎紧,用牛皮纸包扎后,121℃蒸汽灭菌30min,取出后置于恒温培养箱中烘干,待用。
(2)器具的准备。
常用盛放酒精棉球的器具为带盖紧,与棉球同法灭菌,烘干,待用。
(3)配制酒精棉球。
将已灭菌的棉球和瓷缸,剥去牛皮纸,瓷缸加盖,移入无菌间,瓷缸盖内面朝上放在工作台面,用无菌镊将棉球夹入缸内,一手持外瓶体已擦拭消毒的75%酒精瓶,一手开盖,先冲去少量酒精溶液,再将适量溶液倒入瓷缸内,溶液的多少以棉球全部浸透为宜。
(4)用法。
使用酒精棉球时,原则上应用无菌镊夹取,特殊情况用手夹取时,手指切忌污染其它棉球,已经取出的棉球虽未使用,也勿放回棉缸内。
瓷缸,将瓷缸洗净,晾干,开盖置于牛皮纸包中扎。
5小结
本文对实验室中无菌操作的定义及重要性进行简单介绍,重点分析了实验室中无菌操作的要求及原则,对科研人员从事实验有一定指导意义。
消毒灭菌设备使用的简单介绍,使无菌操作过程中,不会因设备的异常而影响无菌操作的进行。
应用无菌操作技术进行实验才能防止微生物污染,保证检验数据真实、可靠。
参考文献:
1中国药品生物制品检定所中国药品检验标准操作规范[M]北京:
中国医药科技出版社,201X.4.05
2郑钧镛,王光宝药品微生物学及检验技术[M]北京:
人民卫生出版社,1989.
1.10
3丰锋,陈建国植物组织培养无菌操作技术[M]中国花卉盆景201X.3.12
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