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跑台训练增强大鼠的学习记忆及其海马BDNF基因表达
徐波1,2,黄涛2,季浏1, 2
(1.“青少年健康评价与运动干预”教育部重点实验室;
2.华东师范大学体育与健康学院,上海,200241)
摘要目的:
探讨8周跑台训练对大鼠学习记忆能力及其海马内脑源性神经营养因子(BDNF)基因表达的影响。
方法:
将24只雄性SD大鼠分为对照组(C组,n=8)和训练组(T组,n=16),T组进行8周的跑台训练。
通过Y迷宫实验,所有大鼠在第7周进行学习能力测试,在第8周进行记忆能力测试。
第8周最后一次训练后,随机将T组分为T1组(n=8)和T2组(n=8)。
T1组训练后即刻与C组同时断头处死,两组交叉进行,T2组在训练后24时断头处死,采用RT-PCR法检测各组大鼠海马内BDNF的基因表达水平。
结果:
Y迷宫测试表明T组大鼠的学习记忆优于C组;与C组相比,T1组和T2组大鼠海马中BDNF的基因表达水平均显著升高(p<0.01)。
结论:
8周跑台训练可增强大鼠的学习记忆能力,这与海马内BDNF基因表达的增加有关。
关键词:
跑台训练;大鼠;学习记忆;海马;脑源性神经营养因子
Treadmilltrainingenhancedlearning-memoryandBDNFmRNAexpressioninhippocampusofrats
XUBo1,2,HUANGTao 2,JILiu1,2
(1.KeyLaboratory of Adolescent HealthAssessment and Exercise Intervention, MinistryofEducation;
2.College ofPhysicalEducation andHealth, EastChina NormalUniversity, shanghai,200241)
AbstractObjective:
Thepurposeofthisstudy is to exploretheeffectsoftreadmilltraining onlearning-memory and BDNFmRNA expression inhippocampusofrats.Method:
24 maleSDratswereassignedintotwogroups:
controlgroup (C,n=8), traininggroup(T,n=16).The Tgroupratstookpartintreadmilltraining for8weeks.In7thweek,alloftheratswereparticipated thelearningtestbyYmaze,andin8thweek,alloftheratswereparticipatedthememorytest byYmaze. Afterthelasttreadmilltraining in 8thweek,Tgroupswereassignedrandomlyinto two groups:
T1group(n=8)and T2group(n=8).Theratsofthe T1 groupweredecollatedimmediatelyafterthelast running alternatelywiththe ratsin controlgroup,andthe ratsofT2groupwere decollatedafter24hours ofthelastrunning.Theexpressionof BDNF mRNAwereinspectedbyRT-PCR.Results:
Ymazetestshowedthat the ability oflearningandmemoryfor T grouprats were betterthan the Cgroup rats.ComparingwithCgroup,theexpressionof BDNFmRNAincreasedsignificantly inT1andT2group(p<0.01).Conclusion:
8weekstreadmilltrainingcan facilitythelearning processandimprove the memoryof rats,whichmayhavecloserelationwiththeincreaseon theexpression ofBDNF mRNA inhippocampus.
Key words:
Treadmilltraining;rat;learning andmemory; hippocampus;BDNF
本实验室的前期研究[1,2]表明,适宜的游泳训练可提高大鼠的学习记忆能力。
然而,运动训练影响学习记忆能力的机制尚不明确。
近年来的研究表明,脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)在中枢神经系统中具有广泛作用,BDNF与自主跑轮运动引起的学习记忆能力的提高有一定的相关性[3,4]。
目前,有关运动改善学习记忆能力的动物实验多采用自主跑轮运动(voluntary wheelrunning),其运动量不易控制。
有研究提示[5],只有当运动量(包括运动持续时间和强度等)达到一定的范围才能引起动物海马内BDNF的变化,而跑台训练(Treadmilltraining)比自主跑轮运动更能精确的控制运动量。
故本文将研究跑台训练对大鼠学习记忆能力的影响,并探讨BDNF在运动促进大鼠学习记忆过程中的作用。
1 材料与方法
1.1动物
从上海西普尔-必凯实验动物中心购入六周龄Sprague-dawley雄性大鼠24只,常规分笼饲养。
将大鼠分为对照组(C组,n=8)和训练组(T组,n=16),在第8周最后一次训练后,随机将T组分为T1(n=8)组和T2组(n=8),T1组运动后即刻与C组同时断头处死,两组交叉进行,T2组在运动后24时断头处死,取双侧海马,测定其BDNF的基因表达。
1.2 训练方案
按张林等[6]的训练方案对T组大鼠进行8周跑台训练,每周训练5次:
1-3周运动时间30min,速度13.3m/min,坡度0;第4周运动时间40min,速度13.3m/min,坡度5%;第5周运动时间45min,速度15m/min,坡度5%;第6周运动时间50min,速度15m/min,坡度5%;第7-8周运动时间60min,速度16m/min,坡度5%。
根据啮齿类动物的生活习性,所有运动训练和迷宫测试均安排在晚间6点之后的固定时间段进行。
1.3Y迷宫测试
按王跃春[7]的方案对大鼠进行Y迷宫实验,第7周对所有大鼠进行学习能力测试,第8周进行记忆能力测试。
学习能力测试采用随机不休息法[8],每天对大鼠进行20次测试,连续测试4天,每天从晚上8点钟开始,各组鼠交叉进行,记录大鼠每天的"正确反应"和"错误反应"次数,以计算大鼠的正确反应率。
大鼠受电击后从起步区直接逃到安全区为"正确反应",若逃到无灯光的任何另一臂,则记为"错误反应"。
测试时安全区以无规则的顺序变换,开始时,对大鼠所在的支臂和另一支臂通电,动物在电击下逃避至灯光区并持续10秒为一次测试,然后以动物所在支臂为下次测试的起点进行下一次测试。
记忆能力测试:
在学习能力测试结束后的第3天,从晚上8点钟开始,对所有大鼠进行记忆能力的测试,每个大鼠进行20次测试,各组大鼠交叉进行,记录其正确反应的次数,以判断大鼠学会后记忆的保持情况。
1.4海马BDNFmRNA的检测
采用RT-PCR法检测各组大鼠海马内BDNFmRNA的表达水平,按黄涛[8]等的方法进行,先提取总的RNA,再通过RT-PCR反应体系进行目的基因的扩增,观察凝胶成像系统的电泳结果并计算标本基因条带与内参基因条带的净面积参数之比(即基因表达的结果)。
所用的引物序列为:
上游5’--TGAAAGAAGCAAACGTCCACG--3’;下游5’--TGTTTGCGGCATCCAGGTA--3’。
1.5统计方法
使用SPSS15.0统计软件对原始数据进行单因素方差分析,以检验运动组与对照组大鼠之间各指标是否具有显著性差异。
2结果
2.1跑台训练对大鼠学习能力的影响
在第7周对所有大鼠进行连续4天的Y迷宫学习能力测试,结果发现,T组大鼠的正确反应率均高于C组,而且在第二天,T组大鼠的正确反应率(0.784±0.150)显著高于C组(0.619±0.153)(p<0.05);同样在第四天,T组大鼠的正确反应率(0.803±0.092)显著高于C组(0.706±0.135)(p<0.05)。
如图1所示。
(C组n=8,T组n=16)
(*表示:
T组vsC组,p<0.05)
图1大鼠学习测试过程中每天的正确反应率
Fig.1 Therightrateoflearning process inY mazetest
2.2跑台训练对大鼠记忆能力的影响
在第8周的记忆能力测试中,每个大鼠进行20次Y迷宫测试,记录其正确反应的次数。
从表1可见,T组大鼠的正确反应次数显著高于C组(p<0.01)。
表1大鼠记忆测试过程中正确反应次数
Table1ThemeanvalueofrighttrailsinYmazetest
组别 n 正确反应次数(次)
T组 16 17.50±1.26**
C组 8 13.88±1.89
(**表示:
T组vsC组,p<0.01)
2.3 跑台训练对大鼠海马BDNFmRNA表达的影响
如图2所示,8周跑台训练之后,T1组和T2组大鼠海马BDNFmRNA表达的平均值(0.82±0.08,0.61±0.09)都显著高于C组(0.49±0.05)(p<0.01),T1组平均上调69.5%,T2组平均上调24.7%。
BDNFmRNA的表达水平在运动后24小时开始呈下降趋势,但仍然显著高于C组。
(C组n=8,T1组n=8,T2组n=8)
(**表示:
T1组、T2组vsC组,p<0.01)
图2大鼠海马BDNF mRNA相对表达量
Fig.2Themean valueofexpressionlevel of BDNFmRNA
3讨论
3.1跑台训练对大鼠学习记忆的影响
学习是指人和动物依赖于经验来改变自身行为以适应环境的神经活动过程。
记忆则是学习到的信息的贮存和提取(再现)的神经活动过程,两者密切相关。
在运动训练进行到第7周时,我们对所有大鼠进行了Y迷宫学习能力测试,结果显示,T组大鼠在第二天和第四天的正确反应率显著高于C组(p<0.05)。
此结果表明,T组大鼠较C组大鼠具有更强的学习能力。
实验中第3天两组之间无显著性差异,其原因目前无法解释,作者将在今后的实验中进一步的研究。
在第8周的记忆保持测试中,T组大鼠的正确反应次数显著高于C组(p<0.01)。
此结果表明,T组大鼠较C组大鼠具有更好的记忆保持能力。
总之,我们的实验结果表明,8周跑台训练
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