高考生物一轮复习第九单元实验专题微生物的利用教案.docx

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高考生物一轮复习第九单元实验专题微生物的利用教案

第30讲　微生物的利用

考试标准

必考

加试

考试标准

必考

加试

1.大肠杆菌的培养和分离

√

2.分离以尿素为氮源的微生物

√

考点一　微生物的培养和分离

1．大肠杆菌

（1）特性：

大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧（代谢类型）的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但若进入人的泌尿系统，就会对人体产生危害。

（2）用途：

是基因工程技术中被广泛采用的工具。

2．细菌的培养和分离

（1）细菌的繁殖：

以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20min分裂一次。

（2）培养的方法：

需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环（工具）转移带菌的培养物。

（3）细菌分离的方法与特点

分离方法

特点

划线分离法

操作简单

涂布分离法

操作复杂，单菌落更易分开

3.大肠杆菌的培养和分离实验

（1）实验内容：

将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。

（2）实验步骤

培养基灭菌

倒平板

接种

划线分离

培养观察

50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌

将培养基分别倒至4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面

在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12h

用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿

培养皿倒置（盖在下面），放在37℃恒温培养箱中培养12～24h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落

（3）大肠杆菌分离的用途：

单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。

4．微生物两种常用的接种方法比较

比较

划线分离法

涂布分离法

工具

接种环

玻璃刮刀

原理

通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。

在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落

将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落

特点

方法简单，但不适宜计数

单菌落更易分开，但操作复杂些

目的

使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落

思考讨论

1．连线无菌技术的方法、类型及对象，并总结消毒与灭菌的区别。

消毒和灭菌的区别

项目

条件

结果

常用的方法

消毒

较为温和的物理或化学方法

仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）

煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法

灭菌

强烈的理化因素

杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌

2.观察甲、乙、丙、丁四幅图，熟悉倒平板的操作流程，请填空：

（1）请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：

丙→乙→甲→丁。

（2）甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。

（3）丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。

3．下图中甲为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果：

（1）每一次划线后都要将接种环灼烧（　√　）

（2）除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端（　×　）

提示　平板划线时除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端，而不是第一次划线的末端。

（3）说明乙图划线结束后，培养皿要倒置（盖在下面）在37℃恒温培养箱中培养的原因是什么？

提示　平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发；防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。

4．如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考：

（1）获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？

提示　获得效果A的接种方法为涂布分离法，获得效果B的接种方法为划线分离法。

（2）某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？

应当怎样操作才可避免此种现象？

提示　最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。

1．（2017·杭州一模）据报道，一些企业生产的速冻食品中检出金黄色葡萄球菌超标，加上熟卤制品的大肠杆菌超标，“细菌门”事件引起公众普遍关注。

金黄色葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。

请回答下列问题：

（1）某生物兴趣小组欲检测某果汁类食品中是否含有金黄色葡萄球菌以及该菌的含量。

①配制培养基：

称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后____________，分装到锥形瓶后利用________________进行灭菌，在无菌状态下加入卵黄液（100mL10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀）摇匀后立即倒平板。

②接种：

该小组采用涂布分离法检测果汁样品中的细菌含量。

在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；然后，将1mL果汁样品稀释10倍，在3个平板上用涂布分离法分别接入0.1mL稀释液。

③培养及结果：

将培养皿____________放入恒温培养箱中经适当培养，3个平板上的菌落数分别为19、18和17。

据此可得出每升果汁样品中的活菌数为__________个。

（2）示意图A和B中____________表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。

（3）下列有关常用涂布分离法的操作正确的是________。

A．在超净工作台中进行接种时应关闭紫外灯

B．接种前需先稀释，然后过滤除去杂菌

C．在每个固体培养基表面都可形成单菌落

D．玻璃刮刀浸泡在70%的酒精中灭菌，不用灼烧

（4）菌种保存：

在无菌条件下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在________上，在37℃下培养24h后，置于4℃冰箱中保存。

答案　

（1）①调节pH　高压蒸汽灭菌锅　②检测培养基平板灭菌是否合格　③倒置　1.8×106　

（2）B　（3）A　（4）斜面

解析　

（1）①培养基配制好后应调节酸碱度（pH），分装到锥形瓶后利用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。

②涂布接种前，将制好的空白平板先培养一段时间，目的是检测培养基平板灭菌是否合格；③接种后，培养皿需要倒置培养，防止皿盖上凝集的水滴滴落造成污染；0.1mL稀释液（稀释10倍）含细菌数约为18个，得出每升果汁含有活菌数1.8×106个。

（2）图中A为划线分离得到的结果，B为涂布分离得到的结果。

（3）在超净工作台进行接种操作时应关闭紫外灯，A正确；涂布分离前需稀释，但不能过滤除菌，B错误；稀释度较大的溶液涂布分离不一定出现菌落，C错误；玻璃刮刀浸泡后需要灼烧，D错误。

（4）纯化的菌种保存在斜面上。

2．下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题：

―→

―→C.扩大培养（液体培养基）―→

D.划线分离和培养（固体培养基）―→

（1）A过程配制的是通用细菌培养基，称为____________培养基。

配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的__________________。

对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的________（填“前面”或“后面”）。

（2）D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是____________，E过程所需的温度是_______。

（3）D过程后，一个菌体便会形成一个______________，这种分离方法是____________的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。

（4）植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较多时，可促进________________________________________________________________________。

（5）植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是（　　）

A．接种环和镊子

B．三角瓶和广口瓶

C．发芽培养基和生根培养基

D．用于培养的幼茎和幼芽

答案　

（1）LB液体　渗透压　前面　

（2）琼脂　4℃　（3）（单）菌落　消除污染杂菌（或纯化菌种）　（4）生根　（5）D

解析　

（1）LB液体培养基是通用的细菌培养基，LB固体平面培养基则用于划线分离形成单菌落。

氯化钠的作用是维持培养基的渗透压。

调节好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行酸碱度调节，又会产生新的污染。

（2）在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂可形成固体培养基。

菌种应置于4°C冰箱中保存。

（3）通过划线分离后，一个菌体就会繁殖出一个菌落。

（4）植物组织培养中生长素相对较多时，有利于生根，而细胞分裂素相对较多时，则有利于生芽。

（5）高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何灭菌操作，否则会导致细胞死亡。

3．（2017·嘉兴期末）下列是有关大肠杆菌的培养实验，请回答问题：

（1）配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和__________作为营养物质，为维持一定的渗透压，常需加入一定量的________________。

（2）大肠杆菌培养和分离的实验中，在____________中进行扩大培养，培养液经________后，在LB固体培养基上进行________，并将培养皿____________放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果。

为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及________________，应同时将未接种的培养基放入相同条件的恒温培养箱培养。

（3）通常对获得的纯菌种可以依据________的形状、大小等特征进行初步的鉴定。

（4）下列关于“大肠杆菌培养和分离”的操作中，叙述正确的是（　　）

A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C．为了防止污染，接种工具经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

答案　

（1）酵母提取物　NaCl　

（2）LB液体培养基　稀释　分离　倒置　无菌操作是否规范　（3）菌落　（4）D

解析　

（1）配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和酵母提取物作为营养物质，为维持一定的渗透压，常需加入一定量的NaCl。

（2）大肠杆菌培养和分离的实验中，在LB液体培养基中进行扩大培养，培养液经稀释后，在LB固体培养基上进行分离，并将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养；为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及无菌操作是否规范，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。

（3）通常对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小等特征进行初步的鉴定。

（4）高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能直接打开放气阀使压力表指针回到零，A错误；倒平板过程中不能打开培养皿的皿盖，以防止杂菌污染，B错误；接种环在火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。

培养基的成分和类型

（1）培养基成分：

一般都含有水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

（2）培养基的类型及其应用

划分标准

培养基种类

特点

用途

物理性质

液体培养基

不加凝固剂

工业生产

半固体培养基

加凝固剂，如琼脂

观察微生物的运动及微生物的分类、鉴定

固体培养基

加凝固剂，如琼脂

微生物的分离、鉴定及活菌计数

目的用途

选择培养基

培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长、促进所需要的微生物的生长

特定微生物的培养、分离

鉴别培养基

根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品

不同种类的微生物的鉴别

考点二　分离以尿素为氮源的微生物

1．菌种特点

含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。

2．培养基

用以尿素为唯一氮源的培养基培养，以LB全营养培养基为对照。

3．实验原理

（1）筛选以尿素为氮源的微生物，可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。

（2）细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。

4．实验步骤

5．反应的鉴定

在配制培养基时，加入指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解并产生碱性的氨，使培养基上菌落周围出现红色的环带。

思考讨论

1．分析下表所示培养基的配方，回答下列问题。

成分

含量

成分

含量

KH2PO4

1.4g

葡萄糖

10.0g

Na2HPO4

2.1g

尿素

1.0g

MgSO4·7H2O

0.2g

琼脂糖

15.0g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

（1）在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的物质是葡萄糖，提供氮源的物质是尿素。

（2）该培养基是（填“是”或“否”）具有选择作用，因为只有能分解尿素的微生物才能生长。

（3）用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因是什么？

提示　琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。

如果用琼脂固体培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养基上产生大量以非尿素为氮源的细菌，所以用经纯化的琼脂糖做固化剂。

2．如图为分离以尿素为氮源的微生物的实验，思考回答下列问题：

（1）实验目的是使用含有尿素的培养基分离能产生脲酶的细菌，使用酚红作为指示剂。

（2）有脲酶的细菌菌落周围出现有色环带的原因是什么？

提示　细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解产生呈碱性的氨，遇培养基中的酚红指示剂产生颜色变化，形成红色环带。

（3）制备尿素固体培养基的过程中采用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法、G6玻璃砂漏斗过滤法。

（4）与全营养培养基相比，尿素培养基上只有少数菌落的原因是什么？

提示　土壤中能利用尿素的细菌占极少数。

因为人和其他哺乳动物产生的排泄物毕竟是少量的，此外尿素还可以在高温下自然分解，因此，以尿素为氮源的菌群较少。

（5）从上图所示实验过程中可判断出细菌悬液C的稀释度为10－4，用涂布分离法分离细菌。

3．判断下列叙述的正误

（1）土样应从有哺乳动物排泄物的地方取（　√　）

提示　有哺乳动物排泄物的地方含脲酶的细菌较多。

（2）取10－4、10－5的土壤稀释液各0.1mL，分别涂布于全营养LB固体培养基、尿素固体培养基上（　√　）

（3）将实验组和对照组平板倒置，37°C恒温培养24～48h（　√　）

（4）在尿素固体培养基上生长的细菌都是以尿素为氮源的细菌（　×　）

4．海洋发生石油泄漏事件后，可用一些微生物有效分解石油，如何配制选择培养基将这类微生物选择出来？

提示　配制的选择培养基中，石油作为唯一的碳源，然后用这种培养基培养多种微生物，凡是能在该种培养基上生存的就是能分解石油的微生物。

1．（2017·绍兴市鲁迅高级中学期中质检）回答下列问题：

尿素是一种高浓度氮肥，且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌的分解作用，才能被植物吸收利用。

某同学要分离出土壤中能分解尿素的细菌，并尝试进行计数，培养基配方如下：

K2HPO4

NaCl

H2O

葡萄糖

尿素

酚红

琼脂

0.12g

0.12g

15mL

0.025g

2.0g

0.25mg

0.5g

（1）上述培养基配制完成后，应选择________________法灭菌，根据培养基的成分推断，该同学能否分离出土壤中只分解尿素的细菌？

________（填“能”或“否”），推断理由是________________________________________________________________________。

（2）分离得到分解尿素的细菌后，则应选择____________培养基进行扩大培养。

培养一段时间后，要借助显微镜对微生物细胞进行计数。

计数过程中，下列哪种行为会影响计数的准确性____________。

A．计数时直接从静置培养的试管底部取培养液进行计数

B．如果方格内微生物细胞数量多于300个，应将培养液先稀释后再计数

C．如果微生物细胞有粘连，要数出团块中的每一个细胞

D．压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数

（3）为了提高尿素肥效，可以将分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。

为了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用________________技术。

答案　

（1）高压蒸汽灭菌　否　琼脂是未纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物，导致尿素不是唯一的氮源

（2）液体　A　（3）固定化酶

解析　

（1）高压蒸汽灭菌适合于耐高温的物品，如培养基、金属器械、玻璃等，题述培养基配制完成后，应选择高压蒸汽灭菌；该同学不能分离出土壤中只分解尿素的细菌，因为琼脂是未纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物，导致尿素不是唯一的氮源。

（2）应选择液体培养基进行扩大培养；由于重力作用，试管底部培养液中细菌种群密度较大，应将培养液摇匀后进行计数。

（3）为了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用固定化酶技术，使酶与尿素分开，可重复利用。

2．（2016·浙江10月选考）请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：

（1）LB固体培养基：

取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加___________，灭菌备用。

（2）尿素固体培养基：

先将适宜浓度的尿素溶液用____________________灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗________________________，故用于过滤除菌。

然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。

（3）取适量含产脲酶细菌的10－4、10－5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是____________。

（A.10－5稀释液＋尿素固体培养基　B．10－5稀释液＋LB固体培养基　C．10－4稀释液＋尿素固体培养基　D．10－4稀释液＋LB固体培养基）。

在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现________，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生________所致。

（4）制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。

再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是________________________________________________________________________。

答案　

（1）琼脂　

（2）高压蒸汽　孔径小，细菌不能滤过

（3）A　红色环带　氨（或NH3）　（4）除去游离的脲酶

解析　

（1）固体培养基中需添加琼脂起到凝固的作用。

（2）因为G6玻璃砂漏斗中存在杂菌，所以在其过滤除菌之前需进行高压蒸汽灭菌；G6玻璃砂漏斗能过滤除菌的原理是其孔径较小，细菌不能通过。

（3）土壤中的微生物在LB全营养培养基中都能生长，在尿素固体培养基中只有能利用尿素的微生物能生长，10－4土壤稀释液中微生物数量较多，所以推测固体培养基上生长的菌落数最少的是10－5＋尿素固体培养基；在尿素固体培养基上产脲酶的细菌菌落周围会出现红色环带，这是因为细菌产生的脲酶催化尿素分解产生了氨（NH3），导致培养基呈碱性，培养基中的酚红遇碱性条件会变红。

（4）并不是所有的脲酶都吸附在石英砂上，所以装柱后需用蒸馏水洗涤固定化酶柱，以洗去多余的未吸附的脲酶。

3．如图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。

（1）图中选择培养基应以__________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加__________作为指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。

（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

该过程采取的接种方法是____________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较________。

答案　

（1）尿素　酚红　红　

（2）涂布分离法　1.75　少

解析　

（1）脲酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯一氮源。

由于尿素被分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，使酚红指示剂变红色。

（2）用于计数细菌菌落数的接种方法是涂布分离法，统计的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数，每克土壤样品中的细菌数量为（156＋178＋191）/3÷0.1×105＝1.75×108个。

由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏少。

1．培养基中观测指标的分析

（1）培养基中的酚红指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。

红色环状区域的大小代表脲酶活性的强弱和含量的多少。

红色区域越大，表明菌株利用尿素的能力越强。

（2）与全营养培养基上的菌落数比较，尿素培养基上只有少数菌落，这一现象表明能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少部分。

2．微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用

对照组

作用

现象

结论

未接种培养基

有无杂菌污染的判断

未接种的培养皿中无菌落生长

未被杂菌污染

接种的LB全营养培养基

选择培养基筛选作用的确认

LB全营养培养基上的菌落数大于选择培养基上的数目

选择培养基具有筛选作用

3.样品稀释的原因和标准

（1）稀释原因：

样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数。

在适当的稀释度下，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数的关键。

（2）稀释标准：

选用一定范围的样品稀释液进行培养，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板计数。

模拟演练

1．下图是微生物平板划线示意图。

划线的顺序为1、2、3、4、5。

下列操作方法正确的是（　　）

A．操作前要将接种环放在火焰旁灭菌

B．划线操作须在火焰上进行

C．在5区域中才有可能得到所需菌落

D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环进行灭菌

答案　D

解析　操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌，A项错误；划线操作须在火焰旁进行，B项错误；在5区域中最有可能得到所需菌落，C项错误；在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环进行灭菌，D项正确。

2．下列关于大肠杆菌的培养的叙述，不正确的是（　　）

A．在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑pH、温度和渗透压等条件

B．若对大肠杆菌活菌进行计数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品的稀释度合适

C．在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行消毒

D．使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃

答案　C

解析　微生物培养条件有营养条件、pH、温度、渗透压等，A正确；为计数活菌数，要多次实验求平均值、操作要严格，还要保证样品的稀释度合适，便于检测，B正确；为防止杂菌污染，对培养基和培养皿要进行灭菌，C错误；为防止对环