实验七酵母RNA的提取及鉴定.docx
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实验七酵母RNA的提取及鉴定
实验七酵母RNA的提取及鉴定
姓名:
郭沈杰年级专业:
2012级生物科学同组者:
蔡萍萍
学号:
12050011012
实验七酵母RNA的提取及鉴定
一、实验目的
掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
三、实验仪器
1、离心机
2、水浴锅
3、电炉
离心10-15分钟(4000r.p.m)。
倒取上清液,加入2倍体积的95%乙醇,边加边搅,加毕,静置,待完全沉淀,过滤。
2、滤渣先用95%乙醇洗2次,每次约5毫升,再用无水乙醚洗2次,每次也约5ml。
3、洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。
乙醚滤干后,滤渣即为粗RNA,可鉴定和测定含量用。
(二)鉴定:
1、取上述RNA约0.5g,加10%硫酸5ml,加热至沸1~2分钟,将RNA水解。
2、水解液2ml,加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml,观察是否产生絮状嘌呤银化合物。
注意事项:
1、离心管回收
2、离心的时候,要两两对称放置,且离心管中溶液的量基本一样。
否则会遭成离心机转子的损坏。
六、实验结果
(一)RNA的提取:
加入乙酸使溶液呈酸性,溶液呈土黄色。
进行离心后,沉淀沉于离心管的下部,上半部分上清液呈土黄色。
取上清液,加入2倍体积的95%乙醇后,溶液呈现白色浑浊状
完全浑浊后,上清液呈白色,沉淀为白色。
过滤洗涤后,得RNA粗品。
(二)鉴定:
(1)水解后,溶液呈无色透明状。
加入氨水后,溶液仍澄清,溶液中似有油状物质产生。
加入硝酸银后,仍似有油状物质产生。
一段时间后,产生白色絮状沉淀。
(2)取水解液0.5ml,加苔黑酚—三氯化铁试剂1ml,加热至沸1min,观察颜色变化
七、实验分析
称取干酵母粉:
2.0096g
最后得到的RNA粗品:
0.034g
RNA提取率(%)=RNA质量(g)/干酵母粉质量(g)x100%
本实验中RNA提取率(%)=0.0346g/2.0096g=1.722%
(稀碱法提取的RNA为变性RNA)
本实验为定性实验,提取酵母中的RNA中,产生白色沉淀时可能因副反应产生的其他沉淀,即最终的沉淀中可能混有其他杂质,不适于进行定量测定。
依据:
酵母细胞富含核酸,且核酸主要是RNA,含量为干菌体的2.67%~10.0%,而DNA含量较少,仅为0.03%~0.516%。
为此提取RNA多以酵母为原料。
工业上制备RNA多选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法。
这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA,主要用作制备单核苷酸的原料,其工艺比较简单。
八、实验注意事项
1.过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来。
2.有时絮状沉淀出现较慢,可放十多分钟。
3.利用等电点控制RNA析出时,应严格控pH。
4.稀碱法提取的RNA为变性RNA,可用于RNA组分鉴定及单核苷酸制备,不能作为RNA生物活性实验材料。
九、思考题
•1、简述核酸分离纯化的一般原则。
保持核算一级结构的完整性;
尽量排除其他分子的污染,保持核酸纯度。
•2、RNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些?
过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来;
有时絮状沉淀出现较慢,可放十多分钟;
利用等电点控制RNA析出时,应严格控制pH;
稀碱法提取的rna为变性rna,可用于单核苷酸制备,不能作为rna生物活性材料。
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- 实验 酵母 RNA 提取 鉴定
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