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细胞工程学答案

细胞工程学答案

【篇一：

细胞工程试题答案】

一、填空题

１、目前，体外受精成功的标志至少是看受精卵可以发育至囊胚期阶段。

2、动物细胞培养需要防止污染问题，显著污染的标志是ＰＨ显著改变，细胞外形模糊，甚至出现漂浮的集落。

3、超数排卵是向动物体内注射某些促性腺激素，对卵巢产生作用促进排卵。

4、动物细胞培养时，细胞主要以聚集体形式存在。

@

5、细胞融合实验最常用的生物促融剂是仙台病毒（ＨＶＪ）。

6、胚胎工程中最关键的技术是体外受精和胚胎移植。

7、克隆动物制备主要是通过不同来源的细胞核移植实现的。

8、动物细胞体外培养的培养基包括：

天然培养基、合成培养基和无血清培养基。

9、动物细胞培养一般经过：

原代培养、传代培养和衰退期三个阶段。

消化法传代是实验室动物细胞培养的传代方法。

10、干细胞从来源上可分为胚胎干细胞和成体干细胞两种。

从功能上可分为单能干细胞、多能干细胞和全能干细胞。

11、hat选择培养基中有三种关键成分：

次黄嘌呤（h）、氨基蝶呤（a）、胸腺嘧啶（t）。

12、影响超数排卵效果的因素包括供体年龄、供体品种差异、激素剂量、卵巢状况等。

—

13、动物多倍体培育常用的物理方法包括：

温度激变（温度休克法）、水静压法、机械损伤、辐射高盐碱法等。

14、女性细胞在间期出现的三角形或半月状的染色体，称为barr’s小体。

15、哺乳动物的y染色体上有一个性别遗传控制因子，称为睾丸决定因子。

16、大量产生单克隆抗体的方法主要有杂交瘤细胞体内接种法和体外培养法。

17、卵母细胞成熟的一些标志包括：

发生泡破裂、染色体凝集、纺锤体形成、极体排出、透明带软化、卵丘细胞扩散。

18、灭菌方法有高压蒸汽灭菌、干热灭菌、燃烧灭菌、射线灭菌。

19、细胞超低温储贮存分快速冷冻法和逐步冷冻法。

20、组织培养细胞一代生长过程潜伏期、指数增长期、停止期三阶段。

（

二、名词解释

1、细胞工程：

应用细胞生物学和分子生物需的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或特种细胞产品的综合性科学技术。

2、细胞融合：

将不同来源的原生质体相融合并使之分化再生、形成新物种或

新品种的技术。

3、接触抑制：

当两个细胞由于移动而相互靠近发生接触时，细胞不再运动，这种由细胞接触而抑制细胞运动的现象称接触抑制，是某些贴附型细胞生长特征之一。

4、传代培养：

将原代培养的细胞继续转接培养的过程。

细胞的体外大量增殖以及细胞系的建立是通过传代培养实现的。

5、固定化培养：

将动物细胞与非水溶性载体结合起来，在生物反应器中进行大规模培养的方法。

6、贴附型细胞：

必须依赖于贴壁或锚定于其他物体的表面才能生长的细胞。

）

7、分批式培养：

指先将细胞和培养液一次性装入反应器内进行培养，细胞不断生长，同时产物也不断形成，经过一段时间的培养后终止培养，一次性收获细胞和产物。

8、细胞融合：

两个或两个以上来源相同或不同的细胞合并成一个细胞的过程。

9、胚胎工程：

对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎体外培养等，以加速繁育经济动物，培育优良品种，挽救濒危动物。

10、精子获能：

精子在雌性动物生殖道内发生生理变化后，获得穿透卵子的透明带能力的过程。

11、超排：

以各种外源性促性腺激素诱发动物卵巢使其有更多的卵泡，并排出更多的具有受精能力的卵子。

12、核移植技术：

利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。

13、发育阻滞：

体外受精的早期胚胎在体外发育中往往会停止在某一阶段不再发育的现象。

14、生长因子：

一类通过与特异的高亲和的细胞膜受体结合，调节细胞生长与其他细胞功能等多效应的多肽类物质。

#

15、体细胞克隆：

将动物体细胞经过抑制培养使其处于休眠状态，利用细胞核移植技术将核导入去核卵细胞，培育成早期胚胎移植至受体，妊娠产仔培育出与核供体一样的成体动物的一种细胞工程技术。

16、单克隆抗体：

经过免疫的哺乳类动物单一的Ｂ淋巴细胞可以分泌单一性抗体，这种具有特异性的、同质性的抗体为单克隆抗体。

17、胞质体：

除去细胞核后由膜包裹的无核细胞。

18、细胞系：

经过在培养后而形成的具有增殖能力、特性专一、类型均匀的培养细胞。

19、细胞株：

将所得到的纯净细胞群以一定的密度接种在１ｍｍ厚的薄层固体培养基上，进行平板培养形成的细胞团。

20、永久细胞系：

大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下发育成永久细胞系或连续细胞系。

三、选择题

1、下列关于动物细胞培养的有关叙述中正确的是（d）

—

a.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中

b.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等

c.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白

d.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理

2、下列不属于动物细胞工程应用的是（c

）

a.大规模生产干扰素，用于抵抗病毒引起的感染

b.为大面积烧伤的病人提供移植的皮肤细胞

…

c.大规模生产食品添加剂，香料等

d.利用胚胎移植技术，加快优良种畜的繁殖

3、“生物导弹”是指（d）

a．单克隆抗体

b．杂交瘤细胞

c．产生特定抗体的Ｂ淋巴细胞

d．在单抗上连接抗癌药物

4、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（d）

：

a.容易产生各种变异b.具有更强的全能性

c.取材十分方便d.分裂增殖的能力强

5、用动物细胞培养技术使细胞传到50代以后仍能传下的传代细胞称（c）

a.原代细胞b.传代细胞

c.细胞系d.细胞株

6、能提高良种家畜繁殖能力的细胞工程技术是（c）

a.组织培养b.细胞融合

c.胚胎移植d.细胞核移植

7、下列有关动物细胞培养和胚胎工程的叙述中，错误的是（b）

a.选择胚胎干细胞作为核供体进行核移植可提高动物克隆的成功率

b.在人胚胎发育过程中只有受精卵具有全能性

c.胚胎分割时用胰蛋白酶将卵裂球中的细胞分散开

d.连续细胞系大多数具有异倍体核形

8、下列说法正确的是（a）

a.细胞培养过程中需要定期更换培养液

b.体外细胞培养只需加入抗生素，无需无菌培养

*

细胞贴壁培养便可保持未分化状态

d.成体干细胞的分化能力比胚胎干细胞的分化能力强

9、细胞株的特点是（a）

a.遗传物质发生改变，具有癌变特点，可以无限传代

b.遗传物质没有改变，可以无限传代

c.遗传物质没有改变，不可无限传代

d.遗传物质发生改变，不可无限传代

10、利用动物细胞融合技术可获得杂交瘤细胞，下列说法不正确的是（b）

《

a.需经筛选过程方可获得

b.可分泌多种特异性抗体

c.具有双亲细胞的遗传物质

d.体外培养条件下可大量繁殖

11、下列不属于单克隆抗体在实践上应用的实例是（d）

a.利用同位素标记的单克隆抗体定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病

b.利用免疫病毒清除异体骨髓移植中的供体骨髓t细胞

c.制成“生物导弹”将药物定向地带到癌细胞所在部位

！

d.将抗药菌的某基因引入小鼠细胞内

12、下列关于细胞工程的叙述，错误的是（c）

a.植物细胞融合必须先制备原生质体

b.试管婴儿技术包括人工受精和胚胎移植两方面

c.经细胞核移植培育出新个体只有一个亲本的遗传性状

d.用于培养的植物器官属于外植体

13、下列不属于细胞重组的方式（c）

a.胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种

~

b.微细胞与完整细胞重组形成微细胞异核体

c.核体与完整细胞重组形成重组细胞

d.胞质体与核体重新组合形成重组细胞

14、动物细胞的超低温保存技术不包括（c）

a.冷冻保护法b.常规冷冻法

c.冰冻法d.玻璃化冻存法

15、在影响体细胞胚发生的激素因素中，应用最广泛的是（b）

a.ibab.2,4-dc.iaad.ba

（

16、只能使动物细胞融合的常见诱导方法是（a）

a.灭活的病毒b.pegc.电刺激d.离心

17、下列关于哺乳动物胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是（d）

a.卵裂期胚胎中细胞数目和有机物总量在不断增加

b.胚胎干细胞具有细胞核大、核仁小和蛋白质合成旺盛等特点

c.胚胎分割时需将原肠胚的内细胞质均等分裂

d.胚胎干细胞是一类未分化细胞，可以从早期胚胎中分离出来

18、制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括（a）

"

①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植

a.①②b.①③c.②③d.③④

19、下列关于动物细胞培养的叙述正确的是（b）

a.培养中的人效应t细胞产生单克隆抗体

b.培养中的人效应b细胞产生单克隆抗体

c.任何成熟红细胞经过培养能形成细胞株

d.用胰蛋白酶处理肝脏组织可获得整个肝脏

20、动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是（a）

~

a.动物细胞培养b.动物细胞融合

c.单克隆抗体d.胚胎核移植

四、判断题

3、传代培养或收获细胞均需使细胞脱落微载体，通常用酶消化法。

（√）

4、无限细胞系大多数已发生异倍化，具异倍体核型，有的可能已转为恶性细胞。

（√）

6、es细胞是一种含正常二倍体的具有发育全能性细胞。

（√）

7、根据x、y精子dna含量的微小差别，可通过流式细胞仪进行分离。

（√）

8、玻璃化冷冻法具有快捷简单、高效的特点，缺点是需要昂贵的冷冻仪器。

。

9、dmso属于渗透性冷冻保护剂。

（√）

10、大量生产单克隆抗体方法有两种：

体外使用培养管培养杂交瘤细胞，从下沉物中获取抗体和体内瘤细胞制备血清。

（√）

11、原代培养分为两种：

组织块培养和组织块消化培养。

（√）

14、兔的同期发情只用hcg就可以达到目的。

（√）

18、hanks液和earle液是两种常用的bss基础溶液。

（√）

20、微载体培养包括实心微载体，多孔微载体。

（√）

五、简答题

【篇二：

细胞工程试题及答案】

·

程、生物工程、多能干细胞、继代培养、人工种子、看护培养、固定化培养、细胞两相培养、不对称融合、雄核发育。

二填空

1生物工程的六大组成：

发酵工程、酶工程、蛋白质工程、基因工程、生物化学工程、细胞工程。

2基因工程（dna重组技术）的一般步骤：

（1）目的基因的获得，

（2）将目的基因与质粒重组，（3）将重组dna引入到宿主细胞，（4）筛选能表达的目的基因。

3细胞融合的方法，生物法：

hvj法；化学法：

高ca离子、高ph结合peg诱导融合，nano3诱导；物理法：

电融合法

4病毒在植物体内的传播途径：

通过维管系统和胞间连丝

5动物细胞培养的传统方法：

悬滴培养、灌注小室培养、转管培养、转瓶培养和培养板培养。

、

三简答题

1、杂种细胞筛选方法：

选择性培养基筛选法、遗传互补筛选法、抗性互补筛选法、利用物理特性筛选法、利用生长特性筛选法

2、有什么方法可以防止或缓解褐变

当外植体处于机械损伤等逆境时，细胞膜的结构遭到破坏，酚酶催化多酚类化合物，使其发生氧化形成棕褐色的醌类物质和水；醌类物质经过非酶促聚合，形成黑褐色物质（羟醌和黑色素等），引起褐变的发生。

解决途径：

（1）选择适宜的外植体

（2）选择适宜的培养条件（低盐、低ph、低温、弱光照）

（4）使用抑制剂和吸附剂（抗坏血酸、pvp、少量活性炭等）

（5）连续转移

:

3、胚状体同步发育方法及原理

（1）抑制剂法：

在细胞培养初期加入细胞分裂抑制剂，去除抑制剂后细胞可同步发育。

（2）低温法：

低温处理抑制细胞分裂，再恢复正常温度使细胞分裂同步化。

（3）渗透压法：

不同发育时期的胚状体对渗透压的要求不同，用一定的渗透压使胚状体停止在某一阶段，然后再使其同步发育。

（4）通气法：

细胞分裂旺盛时有大量气体（如乙烯）生成。

可以通过在培养基中通入乙烯或氮气控制细胞同步分裂。

（5）分离筛选法：

用不同孔径的筛网将不同发育时期的胚状体分离开来，也可以采用密度梯度离心法来选择不同发育时期的胚状体。

4、为什么用茎间做外植体能培养出脱毒苗

茎尖培养脱毒的原理：

病毒在感染植物上分布不一致，即在老叶片及成熟的组织和器官病毒含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织和器官病毒含量较低，生长点（~1mm区域）则几乎不含或很少。

】

茎尖（分生组织）无病毒可能存在的原因：

（1）在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但分生组织中不存在维管束系统。

（2）病毒在细胞间移动的另一个途径是胞间连丝，然而，它的速度很慢，难以追上活跃生长的茎间。

分生组织分化速度大于病毒传播速度。

（3）在茎尖中存在高水平的内源生长素，可抑制病毒的增殖。

5、生物反应器存在的问题

植物细胞培养在放大培养时往往产量会比实验室摇瓶培养或小型反应器培养下降许多，次级

代谢产物合成能力也会下降许多，可能是由于以下因素引起的：

（1）通气和搅拌引起的流体压力易造成细胞损伤、有益气体的散失、大量泡沫的生成等，这些均会对细胞生长和产物积累产生影响。

:

（2）高密度引起培养液粘度增加，造成营养吸收、气体传递的抑制。

（3）反应器结构缺陷（如死角等）导致细胞黏附，引起细胞死亡、腐败以及营养和气体吸收限制等。

（4）对产物生物合成机制、途径等不了解，因此，很难维持最佳培养条件。

6、动物细胞体外培养有哪些类型

（一）贴附型细胞

（1）成纤维型细胞细胞大致呈梭形，多数细胞间排列松散，有较大的细胞间隙，起源于胚肺细胞。

（2）上皮型细胞细胞扁平状，形态较为规则，排列紧密，呈“铺路石状”，起源于内胚层与外胚层的细胞。

（3）游走型细胞外形不规则且不断变化，生长位置不固定。

如具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞。

（4）多形型细胞形态不规则，一般分胞体和胞突两部分，如神经元和神经胶质细胞。

（二）非贴附型细胞（悬浮细胞）

细胞体外生长不必贴壁，密度较高，胞体始终为球形。

如血液白细胞、淋巴组织细胞等。

四论述题

1、细胞工程在林木培育中的应用与意义

（1）脱毒苗与快速繁殖：

保持优良品种的遗传特性，高效快速地实现种苗的大量繁殖，从植物体上取材少，培养周期短，繁殖率高，便于自动化管理。

（2）植物特殊倍性创造：

创造多倍体或单倍体诱导纯合正常植株，如无籽西瓜就是三倍体。

（3）体细胞杂交：

把两亲本的优良性状组合在同一后代中，克服远缘杂交不亲和。

（4）次生产物生产：

用于生物制药等，如人参皂甙、工业化生产紫杉醇等。

（5）基础研究：

用于研究植物的生长特性和性状等。

（6）培育植物新品种：

转基因植物的培育，如抗虫、抗病棉花。

2、细胞工程在给人们带来利益的同时也带来了不利（题目记不得了，大概是这个意思。

从克隆方面讲）

3、什么叫组织培养以烟草为例说明植物组织培养的步骤。

（1）准备工作：

准备好培养基试剂以及要取材的烟草。

（2）培养基制备：

按照培养基配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中→在搪瓷杯中加入所需水量，加热溶解→加琼脂溶化→用1nnaoh或1nhcl调至培养基规定的ph值→分装加塞→培养基灭菌→培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长→保存备用

（3）外植体制备：

烟草外植体取材（烟草根、茎、叶均可）→自来水冲洗→70%酒精表面消毒20~60s→无菌水冲洗→消毒剂处理3~5次→无菌水充分冲洗3~5次→备用

~

（4）接种：

消毒后，对外植体进行修剪、剪切，并接入培养基中。

并标上日期。

（6）定期检查：

定期检查烟草的培养情况，及时记录和处理污染的材料。

（7）移栽、炼苗：

培养一段时间后的烟草需要经炼苗后才能正常种植。

【篇三：

细胞工程复习题及答案】

名词解释

1.细胞工程：

以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状,生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。

2.外植体：

指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料

）

3.植物组织培养：

将植物的器官、组织或细胞，在无菌条件下接种于人工配置的培养基上，使其细胞分裂、增值、分化、发育，甚至形成完整植株的方法。

4.愈伤组织：

在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。

5．离体无性繁殖:

简称离体繁殖，是指利用组织培养方法进行植物离体培养，在短期内获得大量遗传性一致个体的方法。

6．继代培养：

更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织.芽等）。

7.体细胞杂交：

（原生质体融合）指在人工控制条件下不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。

8细胞分化：

即由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变，或发育方式改变的过程。

9细胞脱分化：

培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程就是细胞脱分化。

10细胞再分化：

即脱分化后的分生细胞在特定的条件下，重新恢复细胞分化能力，并经历器官发生形成单极性的芽或根，或经历胚胎发生形成双极性的胚状体，进一步发育成完整植物体，这一过程成为细胞再分化。

11人工种子：

指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。

—

12植物细胞全能性：

指植物体的每一个活细胞都具有该植物的全套遗传信息，具备发育完整植株的潜在能力。

13胚状体：

在离体培养过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。

14单倍体植物：

单倍体是指具有配子体染色体数的孢子体（植物个体）。

具有单套染色体的细胞在人工离体条件下培养，使其单性发育成植物体。

这种具有单套染色体的植物称为单倍体植物。

15离体受精：

（离体授粉）在无菌条件下培养未受精脂肪或胚珠和花粉，使花粉萌发进入胚珠，完成受精作用。

16悬浮培养：

是将植物游离细胞或细小的细胞团，在液体培养基中进行培养的方法。

17看护培养：

是用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂和增值的方法。

18突变体筛选：

19原生质体：

指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。

20传代：

将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养

21细胞分裂指数

[

22克隆化：

一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞繁殖而来。

分离单一细胞并使其繁殖为一细胞群体的方法

23原代培养：

也称初代培养期。

从体内取出组织接种在培养瓶中培养到第一次传代前阶段，一般持续1-4周。

24有限细胞系：

经继代培养后细胞系即使培养条件均能满足细胞繁殖生长，它们也只能在有限的时间内生存，经过运动世代后细胞将逐渐死亡。

25永久细胞系:

大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系

26细胞系：

经过再培养后而形成的具有增殖能力、特性专一、类型均匀的培养细胞

27细胞株：

将所得到的纯净细胞群，以一定的密度接种在lmm厚的薄层固体培养基上，进行平板培养，使之形成细胞团，尽可能地使每个细胞团均来自一个单细胞，这种细胞团称为“细胞株”。

29克隆：

指通过无性繁殖的手段，从一个动物细胞获得遗传背景相同的细胞群或个体群的过程。

获得的细胞叫克隆细胞，个体群称为克隆动物。

30胞质体：

是除去细胞核后由膜包裹的无核细胞。

植物去核原生质体又称微质体或亚原生质体。

~

31细胞重组又叫细胞拆合是指从活细胞中分离出细胞器及其组分，后在体外一定条件下将不同来源的细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术。

32接触抑制：

当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加

33胚胎工程：

在体外受精和体外早期胚胎发育的基础上，通过卵子切割、性别控制、嵌合体制作、细胞核移植、转基因操作等定向控制、改造和创造新遗传性状的技术统称为胚胎工程，又称发育工程。

34干细胞：

干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，它可以化成多种功能细胞35核质体：

由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。

也称为微小原生质体36胚胎干细胞：

胚胎干细胞是由早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离出来的多潜能细胞。

二、问答题

1、植物细胞工程实验室的组成和基本要求有哪些

基本操作室（洗涤区、灭菌区、贮藏区、培养基配制区）、无菌操作室（缓冲准备室、接种室）、培养室、鉴定分析室、温室

便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察

】

2、植物组培中有哪些灭菌方法，其适用范围如何干热灭菌法：

各种玻璃器皿和器械湿热灭菌法：

培养基、蒸馏水、各种器械、棉塞熏蒸灭菌：

接种室和培养室过滤灭菌：

液体培养基药剂灭菌：

培养材料烧灼灭菌：

接种器械、瓶口、棉塞射线灭菌：

接种室空气和台面、花粉灭菌

抗生素抑菌

3、植物细胞和组织培养方法有哪几种

固体培养、液体培养【摇瓶悬浮培养（小规模）、成批培养、半连续培养（大规模反应器）、连续培养】

4、单细胞培养包括哪几种培养方法

a.液体浅层培养b.微室培养c.平板培养d.看护培养

5、在离体培养中，胚状体发生有哪几种方式

1、体细胞胚从外植体上直接发生

.

2、经过愈伤组织的体细胞胚发生

3、细胞悬浮培养的体细胞胚胎发生

6、影响植物细胞脱分化和再分化的因子有哪些

（1）培养基组成对植物细胞脱分化和再分化的影响

1）培养基的营养组成2）培养基的渗透压3）培养基的酸碱度4）激素在细胞分化中的调控

作用

（2）环境条件与植物细胞的脱分化和再分化：

湿度条件、温度条件、光照条件

（3）光周期对植物细胞脱分化和再分化的效应

`

光周期的需要与否，应根据植物种类、培养目的来决定。

7、离体无性繁殖中有哪几种器官发生方式

1、不定芽型，2、器官型，3、器官发生型，4、类胚体发生型，5、原球茎型

8、简述离体无性繁殖步骤。

1、无菌母株制备（制备方法：

田间取材（嫩枝）----自来水冲洗-----消毒剂表面灭菌---无菌条件下切割成带1-2个芽的茎段--接种------诱导不定芽----产生丛芽。

）

2、不定芽增殖（无菌母株——无菌条件——再次切割——继代培养——繁殖，使之在每个芽眼处形成丛芽——反复多次切割培养获得大量不定芽）

3、不定根的诱导，完整植株的形成（将继代增殖的幼嫩小植株——转移至生根培养基中诱导根的分化和根系的形成——完整小植株）

4、再生植株的锻炼和移栽（出管前一周打开瓶——洗净培养基——移栽——大田移栽。

）

<

5、再生植株的鉴定（细胞学鉴定：

形态鉴定）

9、简述药用植物组织培养常见问题和对策。

1、污染及控制

（1）材料带菌与控制控制方法：

彻底灭菌

（2）接种污染与控制