功能作用机制及应用.docx
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功能作用机制及应用.docx
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功能作用机制及应用
一、项目名称:
几种具有重要生理功能的蛋白的制备、功能、作用机
制及应用
、主要完成人情况:
排名
姓名
职称
工作单位
完成单位
对本项目主要学术和技术创造性贡献
1
高文运
教授
西北大学
西北大学
DXS及DXR酶研究的总体设计。
主要论文1、
2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的贡献者。
主要知识产权1、2、3的贡献者。
2
边
六
交
教授
西北大学
西北大学
Kringle5蛋白和hSDF-1a蛋白研究的总体设计。
主要论文14、15、16、17、18、19、20
的贡献者。
主要知识产权4、5的贡献者。
3
李
恒
讲师
西北大学
西北大学
主要从事DXS和DXR酶的制备、功能、催化机理及应用研究。
主要论文4、5、6、7、&
10、11的贡献者。
主要知识产权1、2、3的贡献者。
4
李倩
讲师
西北大学
西北大学
主要从事Kringle5和hSDF-1a蛋白的表达、纯化及后处理。
主要论文14、、15的贡献者。
5
赵
新
锋
教授
西北大学
西北大学
在仪器分析方面给予了本项目大力支持。
6
张椰莉
未取
得
西北大学
西北大学
Kringle5蛋白与配体之间的分子识别与相互作用分析。
主要论文14的贡献者之一。
7
刘
慧
未取
得
西北大学
西北大学
乙酰乳酸合酶的制备及催化机制分析。
主要论文3的贝献者之一。
三、完成人合作关系说明:
项目完成人高文运、边六交、李恒、李倩、张椰莉、刘慧。
高文
运教授主要负责DXS及DXR酶研究的总体设计。
合作者边六交教授系本项目第二完成人,边教授在本项目中负责Kringle5蛋白和
hSDF-1a蛋白研究的总体设计。
合作者李恒博士为第一完成人所指导的青年教师,李恒博士在本项目中完成了多种DXS和DXR酶的制备、
酶底物的合成、酶催化机制的分析等工作。
合作者李倩博士在本项目中完成了Kringle5和hSDF-1a蛋白的表达、纯化及后处理工作。
合作者赵新锋教授在仪器分析方面给予了本项目大力支持。
合作者张椰
莉系第二完成人边六交教授所指导的在读博士研究生,该生主要进行了蛋白与配体之间的分子识别与相互作用分析。
合作者刘慧系第一完成人高文运教授所指导的在读硕士研究生,该生进行了乙酰乳酸合酶
的制备及催化机制分析。
四、主要完成单位排序及贡献:
排序
单位名称
主要贡献
第一完成单位
西北大学
是所有代表作SCI论文第一作者单位和知识产权授权专利的申请人。
五、项目简介:
本研究为基础研究,属于生物技术领域,是在国家重大新药创制计划和三项国家自然科学基金等多项项目的资助下完成的。
针对恶性肿瘤、心脑血管疾病及耐药性病原菌感染的治疗药物研究是我国十一五”及十二五”期间重大新药创制”专项中的重中之重!
根据这一指导性原则,项目组分别选定了①具有抑制肿瘤细胞的生长作用的人纤溶酶原的第五个环饼区,即Kringle5;②在缺血性心脑病的细胞治疗方面具有潜在应用前景的人源基质细胞衍生因子1
(hSDF-1);③可用于抗生素筛选的新靶标1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶(DXS)、1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(DXR)以及乙酰羟酸合酶(AHAS)等五个功能蛋白,并从克隆表达、发酵培养、分离纯化和冷冻干燥工艺等方面对如何高效地获得这些蛋白进行了深入的研究。
在能够稳定地获得这些蛋白的基础上,项目组还深入地
探讨了它们在诱变剂诱导下与其分子展开-折叠有关的过程和机理
(如Kringle5和hSDF-1);功能和作用机制(如DXS、DXR及AHAS)以及应用等。
以上研究工作的科学价值在于:
1.为将Kringle5开发为具有自主知识产权的候选I类生物新药提供更多保障;
2.为深入探索hSDF-1蛋白的功能、其与CXCR4相互作用以及它们在缺血性心脑损伤的治疗方面的应用打下了良好的基础;
3.为以DXS、DXR及AHAS为靶点筛选新抗生素提供了重要的理论依据。
围绕上述研究,项目组获得国家重大新药创制专项、国家自然科学基金(三项)和多项省部级项目的资助。
发表SCI论文共计三十五篇,国家发明专利授权五项。
此外,项目组的研究成果也获得了国际国内同行的认可。
六、主要论文专著目录:
序
号
论文专著名称
刊名
作者
影响
因子
年卷页码
(xx年xx
卷xx页)
发表时
间
通讯作
者
第一作
者
国内作
者
SCI他
引次数
他引总
次数
知识产权是否归国内所有
对应附
件编号
1
Antimicrobialmechanismofthemajoractiveessentialoilcompoundsandtheirstructure-activity
relationship
Med.Chem.
Res.
XianHui,GeYan,Fang-Lin,Tian,
HengLiand
Wen-YunGao
1.28
2017年26
卷442-449
页
2017-0
2-01
高文运
惠先
惠先,闫格,田方琳,李恒,高文运
4
4
是
2-1-1
2
Antimicrobialmechanismof
theaflavins:
Theytarget
1-deoxy-D-xylulose5-phosphate
reductoisomerase,thekeyenzymeoftheMEPterpenoidbiosyntheticpathway
Sci.Rep.
XianHui,QiaoYue,Dan-Dan
Zhang,HengLi,Shao-QingYang&Wen-YunGao
4.26
2016年6卷
38945页
2016-1
2-12
高文运
惠先
惠先,岳俏,张旦旦,李恒,杨少青,高文运
1
1
是
2-1-2
3
Inhibitionofgreenteaandthecatechinsagainst1-deoxy-D-xylulose5-phosphatereductoisomerase,thekeyenzymeoftheMEPterpenoidbiosyntheticpathway
Fitoterapia
XianHui,HuiLiu,Fang-LinTian,
Fei-FeiLi,HengLi,Wen-YunGao018
2.70
2016年113
卷80-84页
2016-0
9-01
高文运
惠先
惠先,刘慧,田方琳,李菲菲,李恒高文运
1
2
是
2-1-3
4
CloningandCharacterizationofGSTFusionTagStabilizedLargeSubunitofEscherichiacoliAcetohydroxyacidSynthaseI
J.Biosci.
Bioeng.
HengLi,NanLiu,
Wen-TingWang,
Ji-YuWang,
Wen-YunGao
2.24
2016年121
卷21-26页
2016-0
2-01
高文运
李恒,刘楠
李恒,刘楠,王文婷,王继宇,高文运
3
4
是
2-1-4
5
Aspecificprocesstopurify
2-methyl-D-erythritol-4-phosphateenzymaticallyconvertedfrom
D-glyceraldehyde-3-phosphateand
pyruvate
Naturalproductcommunications
Yang,S.Q.,Deng,
J.,Wu,Q.Q.,Li,
H.,Gao,W.Y.
0.88
2015年
10
(2)卷
339-340页
2015-0
2-01
高文运
杨少青,邓
冃U
杨少青,邓冃1」,吴倩倩,李恒,高文运
0
0
是
2-1-5
6
Mechanisticinsightsinto
1-deoxy-D-xylulose5-phosphatereductoisomerase,akeyenzymeoftheMEPterpenoidbiosyntheticpathway
FEBSJ.
Li,H.;Tian,
J.;Sun,W.;Qin,
W.;Gao,Wen-Yun
3.90
2013年280
卷
5896七905
页
2013-1
1-01
高文运
李恒
李恒,田洁,孙伟,秦巍,高文运
3
8
是
2-1-6
7
Achemo-enzymaticcascadefortheone-potsynthesisof
1-deoxy-D-xylulose5-phosphateand1-deoxy-D-xylulose
Tetrahedron
Lett.
Shao-BoDai,JuanLiao,JieTian,HengLi,Wen-YunGao*Ren,GangWang
2.19
2012年53
卷
4809-4812
页
2012-9
5
高文运
戴少
波,
廖娟
戴少波,廖娟,田洁,李恒,高文运
1
1
是
2-1-7
8
PreparationofIsotope
Helvetica
Li,Heng,Shao-Bo
1.07
2012年
2012-5-
高文运
李恒
李恒,
0
2
是
2-1-8
Labeled/UnlabeledKeyIntermediatesin2-Methyl-D-erythritol4-PhosphateTerpenoidBiosyntheticPathway
ChimicaActa
Dai,Wen-Yun
Gao*
95(5)卷
683-715页
1
戴少波,高文运
9
DeterminationofSteady-StateKineticParametersof1-Deoxy-D-x
ylulose-5-phosphateSynthasebyPre-columnDerivatizationHigh
PerformanceLiquidChromatographyUsing2,4-Dinitrophenylhydrazine
Chinese
Journalof
Analytical
Chemistr
Hu,Y.,Wang,XJ.,Li,H.,Gao,WY.
0.8
2012年40
卷
1859-1864
2012-1
2-1
高文运
胡玥
胡玥,
王雪娇,李恒,高文运
3
6
是
2-1-9
10
Optimizedenzymaticpreparationof1-deoxy-D-xylulose5-phosphate
Bioorg.Chem.
Zhou,Y.F.,Cui,
Z.,Li,H.,Tian,J.,
Gao,Wenyun*
3.23
2010年38
卷120-123
页
2010-9
1
高文运
周跃飞
周跃飞,崔哲,李恒,田洁,高文运
2
6
是
2-1-10
11
Animprovedpreparationof
D-glyceraldehyde3-phosphateanditsuseinthesynthesisof
1-deoxy-D-xylulose5-phosphate
Helv.Chim.
Acta
Li,H.,Tian,J.,Wang
H.,Yang,S.Q.,
Gao,Wenyun
1.07
2010年93
卷
1745-1750
页
2010-9
1
高文运
李恒
李恒,田洁,王辉杨少青高文运
7
18
是
2-1-11
12
Biosynthesisoftheiridoidglucoside,lamalbid,inLamiumbarbatum
Phytochemisty
Li,H.,Yang,S.Q.,
Wang,H.,Tian,J.,
Gao,Wenyun
3.21
2010年71
卷1690-1
694页
2010-1
0-1
高文运
李恒
李恒,杨少青,王辉,田洁,高文运
2
2
是
2-1-12
13
同位素标记及未标记的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸和2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸的合成方法hybrid
有机化学
高文运
1.01
2010年9卷
124-136页
2010-1
1
高文运
高文运
高文运
0
1
是
2-1-13
14
Recognitionandbindingof
voltage-dependentanionchannel-1
withATPandNADHbyspectroscopicanalysisandmoleculardocking
RSCAdvances
LiQian,DuanMeijiao,LiShasha,
ZhangYeli,QiaoPan,BianLiujiao*
3.11
2016年6卷
1-28
2016-2
17
边六交
李倩
李倩,段美娇,李莎莎,
张椰莉,乔盼,边六交
0
0
是
2-1-14
15
Recognitionandbindingoflactamantibioticstobovineserumalbuminbyfrontalaffinitychromatographyincombinationwithspectroscopyandmoleculardocking
J.Chromatogr.
B
LiQian,ZhangTianlong,Bian
Liujiao*
2.60
2016年1014
卷90-101页
2016-4
1
边六交
李倩
李倩,
张天龙,边六交
1
4
是
2-1-15
16
Bindingofangiogenesisinhibitorkringle5toitsspecificligandsbyfrontalaffinitychromatography
J.Chromatogr.
A
BianLiujiao,Li
Qian,JiXu
3.98
2015年1401
卷42-51页
2015-7
3
边六交
边六交
边六交,李倩,冀旭
2
4
是
2-1-16
17
Isolationandpurificationof
monosialo-tetrahexosylgangliosidesfrompigbrainbyextractionandliquidchromatography
Biomed.
Chromatogr.
BianLiujiao*,
YangJianting,Sun
Yu
1.61
2015年
29卷
1604-1611
页
2015-1
0-1
边六交
边六交
边六交,杨建婷,孙玉
0
0
是
2-1-17
18
Isolationandpurificationof
recombinanthumanplasminogenKringle5byliquidchromatographyandammoniumsulfatesalting-out
Biomed.
Chromatog
BianLiujiao*,Ji
Xu,HuWei
1.61
2014年
28卷
957-965页
2014-7
1
边六交
边六交
边六
交,冀旭,胡伟
2
2
是
2-1-18
19
Temperature-inducedconformationaltransitionofbovineserumalbumininneutralaqueoussolutionby
reversed-phaseliquidchromatography
Biomed.
Chromatogr.
BianLiujiao,Wu
Dan,HuWei
1.61
2014年
28卷
295-301页
2014-2
1
边六交
边六交
边六
交,吴丹,胡伟
2
4
是
2-1-19
20
Urea-induceddissociationofnervegrowthfactorfromvenomofChinesecobrabySEC
Chromatographia
BianLiujiao,Ji
Xu,HuWei
1.40
2014年
77卷
793-802页
2014-6
1
边六交
边六交
边六交,冀旭,胡伟
0
2
合计
39
75
补充说明
七、主要知识产权证明目录:
序号
知识产权类别
知识产权具体名称
国家
(地区)
授权号
授权日期
证书编号
权利人
发明人
专利有效状态
对应附
件编号
1
发明专利
化学法-酶法制备
1-脱氧-D-木酮糖
5-磷酸的方法
中国
ZL2010101009
749
2013-11-06
1300744
西北大学
高文运;田洁;廖娟;李恒;王雪娇;戴少波
有效
3-1
2
发明专利
1-脱氧-D-木酮糖
5-磷酸还原异构化酶抑制剂及其衍生物的制备
中国
ZL2012103914
65.5
2014-04-09
1380148
西北大学
高文运;郝保华;惠先;李恒;董磊
有效
3-2
3
发明专利
中药黄今中黄酮类化合物作为DXR抑制剂的用途
中国
ZL2013104419
96.5
2015-10-21
1820593
西北大学
高文运;李恒;董磊;闫格;田方琳
有效
3-3
4
发明专利
一种高活性可溶型血管生长抑制剂
Kringle5三聚体的
咼效表达方法
中国
ZL2010102987
71.5
2013-06-05
1208409
西北大学
边六交;妙亮
有效
3-4
5
发明专利
人源基质细胞衍生因子1a的表达载体、构建方法及应用•
中国
ZL2013102535
58.6
2015-10-21
18118013
西北大学
边六交;蔚萍;冀旭;候俊
有效
3-5
八、客观评价:
项目组研究开发的血管生长抑制剂Kringle5是一种新型生物药物候选蛋白,目前处于研究开发阶段。
借助国家科技重大专项项目(基因重组血管生长抑制剂Kringle5的中试生产工艺和药用研究,2009ZX09103-696)的实施,项目组已建立了血管生长抑制剂Kringle5的发酵培养和分离纯化中试生产线一条,已经能够规模化生产出纯度和活性都满足药用的合格的用于研究用的血管生长抑制剂Kringle5制剂,初步建
立了重组血管生长抑制剂Kringle5的生产质量标准;初步完成血管生长抑制剂Kringle5的主要药效学、药代动力学和药理学研究和安全性评价。
除国家科技重大专项支持外,该项目目前还获得国家自然科学基金一项及若干项省部级项目的资助,获得国家发明专利两项。
项目组关于DXS酶及其催化DXP合成方法的研究已得到国内同行专家的认可,利用该方法已为武汉大学生命科学学院及中国林业大学草坪研究所的相关老师制备了未标记及13C-DXP。
在对DXR的研究中,项目研究人员也提出了该酶新的底物结合方式及催化循环,发现了一些该酶的新抑制剂。
该项目目前已获得国家自然科学基金三项及若干项省部级项目的资助,获得国家发明专利三项。
关于Kringle5及hSDF-1a勺研究:
项目组获得了用以高效表达Kringle5的基因工程菌株,制备了融合的和非融合的目标蛋白Kringle5,进行了重组Kringle5候选蛋白药物的成药性研究,旨在为将其开发为具有自主知识产权的候选I类生物新药做出贡献。
建立了hSDF-1。
原核表达、包涵体柱外复性和阳离子交换柱一步法分离纯化方法,高效地获得了纯度较高的目标蛋白,为该蛋白的主要药效学、药代动力学及药理学研究和安全性评价方面的研究打下了坚实的基础。
关于DXS及DXR的研究:
DXS:
在获得了稳定的DXS酶来源的基础上,项目组以该蛋白为催化剂建立了多个DXP(萜类化合物MEP生物合成途径关键中间体)的简单高效的制备方法,其中一个方法目前已获得专利授权,另一个方法被JohnWhitthall和P.W.Sutton编纂的专著收录(JieTian,HengLiandWen-YunGao,ImprovedEnzymaticPreparationofDXP,inPracticalMethodsforBiocatalysisandTransformations2,eds.J.WhitthallandPeterW.Sutton,JohnWiley&SonsLtd.,2012,pp280-284)。
同时,有关DXP的合成方法也获得了国内相关领域内专家的认可,如上海交通大学农业与生物学院的相关专家,武汉大学生命科学学院的相关专家,北京林业大学草坪研究所及中国农业科学院北京畜牧兽医研究所的相关专家等。
法国克莱蒙费朗第二大学的化学家M.Lemaire教授在GreenChemistry杂志(IF=8.506)上发表的论文认为项目
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