常用微生物检验方法.docx
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常用微生物检验方法
菌落总数
一、菌落总数介绍:
菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度,与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定,即在需氧情况下,37℃培养48h,能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数,所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌,由于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数,菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量,它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法
菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数,计算出每克(或每ml)原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括:
样品的稀释--倾注平皿--培养48小时--计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致,从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同,只是在某些具体要求方面稍有差别,如有的国家在样品稀释和倾注培养进,对吸管内液体的流速,稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见:
GB4789.2-94《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》
SN0168-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》
三、说明
(一)样品的处理和稀释:
1.操作方法:
以无菌操作取检样25g(或25ml),放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振要或研磨制成1:
10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后,最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min,制成1:
10的均匀稀释液。
用1ml灭菌吸管吸取1:
10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混合均匀,制成1:
100的稀释液。
另取1ml灭菌吸管,按上项操作顺序,制10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
2.无菌操作:
操作中必须有“无菌操作”的概念,所用玻璃器皿必须是完全灭菌的,不得残留有细菌或抑菌物质。
所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。
样品如果有包装,应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。
琼脂平板在工作台暴露15分钟,每个平板不得超过15个菌落。
3.采样的代表性:
如系固体样品,取样时不应集中一点,宜多采几个部位。
固体样品必须经过均质或研磨,液体样品须经过振摇,以获得均匀稀释液。
4.样品稀释误差:
为减少样品稀释误差,在连续递次稀释时,每一稀释液应充分振摇,使其均匀,同时每一稀释度应更换一支吸管。
在进行连续稀释时,应将吸管内液体沿管壁流入,勿使吸管尖端伸入稀释液内,以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
为减少稀释误差,SN标准采用取10mL稀释液,注入90mL缓冲液中。
5.稀释液:
样品稀释液主要是灭菌生理盐水,有的采用磷酸盐缓冲液(或0.1%蛋白胨水),后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。
如对含盐量较高的食品(如酱油)进行稀释,可以采用灭菌蒸馏水。
(二)倾注培养
1.操作方法:
根据标准要求或对污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别在制10倍递增稀释的同时,以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做两个平皿。
将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml,并转动平皿,混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h,取出计算平板内菌落数目,乘以稀释倍数,即得每克(每毫升)样品所含菌落总数。
2.倾注用培养基应在46℃水浴内保温,温度过高会影响细菌生长,过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。
如无水浴,应以皮肤感受较热而不烫为宜。
倾注培养基的量规定不一,从12~20ml不等,一般以15ml较为适宜,平板过厚可影响观察,太薄又易于干裂。
倾注时,培基底部如有沉淀物,应将底部弃去,以免与菌落混淆而影响计数观察。
3.为使菌落能在平板上均匀分布,检液加入平皿后,应尽快倾注培养基并旋转混匀,可正反两个方向旋转,检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min,以防止细菌有所死亡或繁殖。
。
4.培养温度一般为37℃(水产品的培养温度,由于其生活环境水温较低,故多采用30℃)。
培养时间一般为48h,有些方法只要求24h的培养即可计数。
培养箱应保持一定的湿度,琼脂平板培养48h后,培养基失重不应超过15%。
5.为了避免食品中的微小颗粒或培基中的杂质与细菌菌落发生混淆,不易分辨,可同时作一稀释液与琼脂培基混合的平板,不经培养,而于4℃环境中放置,以便计数时作对照观察。
在某些场合,为了防止食品颗粒与菌落混淆不清,可在营养琼脂中加入氯化三苯四氮唑(TTC),培养后菌落呈红色,易于分别。
(三)计数和报告
1.操作方法:
培养到时间后,计数每个平板上的菌落数。
可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。
在记下各平板的菌落总数后,求出同稀释度的各平板平均菌落数,计算处原始样品中每克(或每ml)中的菌落数,进行报告。
2.到达规定培养时间,应立即计数。
如果不能立即计数,应将平板放置于0-4℃,但不得超过24h。
3.计数时应选取菌落数在30~300之间的平板(SN标准要求为25~250个菌落),若有二个稀释度均在30~300之间时,按国家标准方法要求应以二者比值决定,比值小于或等于2取平均数,比值大于2则其较小数字(有的规定不考虑其比值大小,均以平均数报告)。
4.若所有稀释度均不在计数区间。
如均大于300,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
如均小于30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。
如菌落数有的大于300,有的又小于30,但均不在30~300之间,则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
如所有稀释度均无菌落生长,则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。
有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。
5.不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比(同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近),即稀释倍数愈高菌落数愈少,稀释倍数愈低菌落数愈多。
如出现逆反现象,则应视为检验中的差错(有的食品有时可能出现逆反现象,如酸性饮料等),不应作为检样计数报告的依据。
6.当平板上有链状菌落生长时,如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限,则应作为一个菌落计,如存在有几条不同来源的链,则每条链均应按一个菌落计算,不要把链上生长的每一个菌落分开计数。
如有片状菌落生长,该平板一般不宜采用,如片状菌落不到平板一半,而另一半又分布均匀,则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。
7.当计数平板内的菌落数过多(即所有稀释度均大于300时),但分布很均匀,可取平板的一半或1/4计数。
再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。
8.菌落数的报告,按国家标准方法规定菌落数在1~100时,按实有数字报告,如大于100时,则报告前面两位有效数字,第三位数按四舍五入计算。
固体检样以克(g)为单位报告,液体检样以毫升(ml)为单位报告,表面涂擦则以平方厘米(cm2)报告。
大肠菌群及检验
一、大肠菌群介绍
大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致,其定义为:
需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广,在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明,大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方,人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主,而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的,主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低,表明了粪便污染的程度,也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便,也有肠道患者或带菌者的粪便,所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等),因而食品中有粪便污染,则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性,潜伏着食物中毒和流行病的威胁,必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一,目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、大肠菌群检验方法:
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,即:
需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。
目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。
两个标准方法在检测程序上略有不同。
(一)国家标准:
国家标准采用三步法,即:
乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
乳糖发酵试验:
样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
36±1℃培养48±2h,观察是否产气。
分离培养:
将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36±1℃培养18-24h,观察菌落形态。
证实试验:
挑取平板上的可疑菌落,进行革兰氏染色观察。
同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h,观察产气情况。
报告:
根据证实为大肠杆菌阳性的管数,查MPN表,报告每100ml(g)大肠菌群的MPN值。
具体操作参见GB4789.3-94《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》
(二)原国家商检局制订的行业标准,等效采用美国FDA的标准方法,用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。
本方法采用两步法:
推测试验:
样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管LST肉汤。
36±1℃培养48±2h,观察是否产气。
证实试验:
将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中,36±1℃培养48±2h,观察是否产气。
以BGLB产气为阳性。
查MPN表,报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
具体操作参见SN0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》
三、说明:
1.MPN检索表:
MPN为最大可能数(MostProbableNumber)的简称。
这种方法,对样品进行连续系列进行稀释,加入培养基进行培养,从规定的反应呈阳性管数的出现率,用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。
MPN检索表只给了三个稀释度,如改用不同的稀释度,则表内数字应相应降低或增加10倍。
注意国家标准和行业标准中所附MPN表所用稀释度是不同的,而且结果报告单位也不相同。
2.初发酵和证实试验:
无论是国家标准的三步法还是行业标准的两步法,都利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验,培养基的配制略有不同,但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义,即“在37℃分解乳糖产酸产气”。
初发酵阳性管,不能肯定就是大肠菌群细菌,经过证实试验后,有时可能成为阴性。
有数据表明,食品中大肠菌群检验步骤的符合率,初发酵与证实试验相差较大。
因此,在实际检测工作中,证实试验是必需的。
3.产气量与倒管:
在乳糖发酵试验工作中,经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。
实验表明,大肠菌群的产气量,多者可以使发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还小的气泡。
如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时,可以用手轻轻打动试管,如有气泡沿管壁上浮,即应考虑可能有气体产生,而应作进一步试验。
4.挑选菌落:
国家标准中,需要对初发酵阳性培养物接种伊红美蓝平板分离,对典型和可疑菌落进行观察和证实试验。
由于大肠菌群是一群细菌的总称,在平板大肠菌群菌落的色泽、形态等方面较大肠菌更为复杂和多样,而且与大肠菌群的检出率密切相关。
国家标准方法规定伊红美蓝平板为分离培养基,在该平板上,大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽时,检出率最高;红色、粉红色菌落检出率较低。
另外,挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系,只挑取一个菌落,由于机率问题,尤其当菌落不典型时,很难避免假阴性的出现。
所以挑菌落一定要挑取典型菌落,如无典型菌落则应多挑几个,以免出现假阴性。
5.抑菌剂:
大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。
抑菌剂的主要作用是抑制其它杂菌,特别是革兰氏阳性菌的生长。
国家标准中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂,行业标准中LST肉汤利用十二烷基硫酸钠作为抑菌剂,BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑菌剂。
抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌,而有利于大肠菌群细菌的生长和挑选,但对大肠菌群中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。
有些抑菌剂用量甚微,称量时稍有误差,即可对抑菌作用产生影响,因此抑菌剂的添加应严格按照标准方法进行。
沙门氏菌及检验
人沙门氏菌病有四类综合症:
沙门氏菌病;伤寒;非伤寒型沙门氏菌败血症和无症状带菌者。
沙门氏菌胃肠炎是由除伤寒沙门氏菌外任何一型沙门氏菌而所致,通常表现为轻度,持久性腹泻。
伤寒实际上是由伤寒沙门氏菌所致。
未接受过治疗的病人致死率可超过10%,而对经过适当医疗的病人其致死率低于1%,幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
这些无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人(传统的例子就是玛丽伤寒)。
非伤寒型沙门氏菌败血症可由各型沙门氏菌感染所致,能影响所有器官,有时还引起死亡。
幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
一、致病性
沙门氏菌胃肠炎,潜伏期一般6-72小时,主要症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。
病程一般1-2天或更长。
感染剂量为15-20个菌,死亡率达1-4%。
最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。
污染源主要是人和家畜的粪便,沙门氏菌常存在于动物中,特别是禽类和猪。
在许多环境中也有存在。
从水,土壤,昆虫中,从工厂和厨房设施的表面和动物粪便中已发现该类细菌。
它们可以存在于多类食品中,包括生肉,禽,奶制品和蛋,鱼,虾和田鸡腿,酵母,椰子,酱油和沙拉调料,蛋糕粉,奶油夹心甜点,顶端配料,干明胶,花生露,橙汁,可可和巧克力。
沙门氏菌属也是嗜温性细菌,在中等温度,中性pH,低盐和高水活度条件下生长最佳。
生长最低水活度为0.94。
兼性厌氧,对中等加热敏感。
同样,该菌属能适应酸性环境。
通过卫生以防止二次污染;蒸煮;巴氏消毒等控制。
正常家庭烹调,个人卫生可以防止煮熟食品的二次污染,以及控制时间和温度一般都能充分防止沙门氏菌病的发生。
二、检验
因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体,因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。
沙门氏菌是食物传播病原菌中研究最活跃的细菌。
从食品中分离和鉴定沙门氏菌,当前通用的方法学分5个步骤:
1.前增菌-第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌,使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
2.选择性增菌-在含选择性抑制剂的促生长培养基中间,样品进一步增菌的一个步骤。
此培养基允许沙门氏菌持续增殖,同时阻止大多数其他细菌的增殖。
3.选择性平板分离-这一步采用固体选择性培养基,抑制非沙门氏菌的生长,提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
4.生物化学筛选-排除大多数非沙门氏菌。
也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。
5.血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。
这五个步骤代表理想状况。
不过一个有经验的检验员,可能在一个或几个步骤中看出特性和差别。
目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础,25g食品为标准分析单位。
三、从食品中分离沙门氏菌样品的制备
下面的方法是以25g样品为检测单位,样品:
肉汤为1∶9的比例。
除非另有说明,根据混合程度,加足够的肉汤保持1∶9的比例。
对不需准确称量检测的样品,例如:
田鸡腿,可参看特定方法说明。
1、干蛋黄、干蛋白、干全蛋、液奶(去脂牛奶,含2%脂肪牛奶,全脂奶,和脱脂奶)、粉状调制食品(蛋糕,甜饼,炸面圈,饼干和面包)、婴儿食品、口食或软管进食含蛋的食品:
检验前的冷冻样品最好不要解冻。
如果冷冻样品必须软化以获取待检测部分,则尽可能迅速的解冻所需部分,使竞争菌数少增加或降低沙门氏菌的可能损伤。
解冻需在45℃以下,有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在25℃,18小时内解冻。
无菌操作称取25g样品,放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500mL)或其他合适的容器内。
非粉状的样品,加入225mL灭菌乳糖肉汤。
如果制品是粉状,加入约15mL灭菌乳糖肉汤,用灭菌玻璃棒,匙或灭菌压舌器搅拌,使成均匀悬液。
再加3份乳糖肉汤10mL,10mL,190mL,使总量为225mL。
充分搅拌,直到样品完全悬浮没有团块为止。
盖紧瓶盖在室温静置60min。
振摇使充分混匀,用试纸测定pH值。
必要时用灭菌的1NNaOH或1NHcl调节pH至6.8±0.2。
在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。
然后将瓶盖旋松约1/4圈,置35℃培养24±2小时。
以下步骤按四,1-10进行。
2、蛋类:
A、含壳蛋:
用硬刷子在水流下刷洗蛋。
把蛋在含0.1%十二烷酸磺酸钠(SDS)的200ppm氯离子溶液中浸泡30min。
加8mL5.25%次氯酸钠到含1gSDS的992mL蒸馏水中,制备200ppmcl-/0.1%SDS溶液。
这种消毒剂需在使用前临时制备。
无菌操作打开蛋,使用灭菌的蛋分离器,弃去蛋白。
无菌操作称取25g蛋黄到灭菌的500mL锥型瓶或其他合适容器内。
加225mL胰胳胨(胰化物)大豆肉汤(TSB),并振荡充分混匀。
在室温下静置60分钟。
振摇使其充分混匀,用试纸测定pH值。
必要时调节pH值至6.8±0.2,置35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。
B、液全蛋(均状):
无菌操作称25g置于无菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中。
加225mLTSB并振荡充分混匀。
按上面所述继续。
C、煮硬的蛋(鸡蛋,鸭蛋或其他蛋类):
目前,不知道蛋白中的沙门氏菌抑制因子是否具有热稳定性。
因此,无菌操作分离蛋白和蛋黄。
称取25g粉状蛋黄固体到无菌500mL锥型瓶或其他合适容器中。
加225mLTSB并旋转充分混匀。
按上面所述继续。
3、脱脂乳粉
A、速溶:
无菌操作称取25g样品,加入灭菌烧杯(250mL)或其它合适容器内。
经灭菌玻璃或纸质(用带卷好以备高压灭菌)漏斗,往灭菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中(装有225mL煌绿水),缓缓倾注25g检测单位,使其覆盖在煌绿水表面。
也可将多份25g检验单位按比例倒入相应份数的煌绿水表面。
按每1000mL灭菌蒸馏水中加1%煌绿溶液2mL配置煌绿水。
将盛有样品前增菌培养基的容器静置60±5分钟。
松松地盖上容器盖,不需要混合或调节pH值,于35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。
B、非速溶:
按上述A脱脂乳粉的方法进行,只不过不允许将多份检验单位按比例合并检验。
4、全脂奶粉:
无菌操作称取25g样品,加入无菌的,带螺旋帽的广口瓶中(500mL)或其他合适的容器内。
加入225mL灭菌蒸馏水并振荡充分混匀。
盖紧在室温下静置60分钟。
使其充分混匀,用试纸测定pH值。
必要时调节pH值至6.8±0.2。
在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。
然后加0.45mL1%的煌绿染液并充分混匀。
旋松瓶盖约1/4转后,置35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。
5、酪蛋白:
无菌操作称取25g样品,加入无菌均质杯中,加225mL灭菌乳糖肉汤到样品中并匀质2分钟。
无菌操作,把已匀质的混合物转移到灭菌,带螺旋帽的500mL广口瓶或其他合适的容器内。
盖紧盖子在室温下静置60分钟。
振摇使充分混匀,用试纸测定pH值。
必要时调节pH值至6.8±0.2。
在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。
旋松瓶盖约1/4圈后,置35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。
6、大豆粉:
无菌操作称取25g样品,加入灭菌烧杯(250mL)或其它合适容器内。
用灭菌玻璃或纸质(用带卷好以备高压灭菌)漏斗,往装有225mL乳糖肉汤的灭菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中,缓缓倾注25g检测单位,使其覆盖在乳糖肉汤表面。
检测单位(25g)不可多份按比例混合检测。
容器静置60±5分钟。
松松地盖上容器盖,不需要混合或调节pH值,于35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。
7、含蛋制品(面条,蛋卷,通心粉,意大利面条)、干酪、生面团、调制色拉(火腿,蛋,鸡肉,金枪鱼,火鸡)、新鲜的、冷冻的、或干的水果和蔬菜、果仁、甲壳类动物(小虾,蟹,小龙虾,LANGOSTINOS,龙虾)和鱼:
检测前冷冻样品最好不要解冻,如果冷冻样品必须软化以取其检测部分,则要在持续搅拌并带有自动调温器控制的45℃水浴内15分钟内解冻。
或者在25℃18小时内进行。
无菌操作称取25g样品,加入灭菌的均质器中。
加入225mL灭菌的乳糖肉汤并均质2分钟。
再无菌操作转移已均质的混合物到无菌的带螺旋帽的广口瓶中(500mL)或其他合适的容器内。
盖紧瓶盖,于在室温下静置60分钟。
振摇使其充分混匀,用试纸测定pH值。
必要时调节pH值至6.8±0.2。
充分混匀。
旋松瓶盖约1/4转后,置35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。
8、干酵母:
无菌操作称取25g样品,放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500mL),或其他合适的容器内。
加入225mL灭菌胰酪胨(胰化)大豆肉汤,充分混匀使酵母形成均匀悬液。
盖紧瓶盖于在室温下静置60分钟。
振摇使其充分混匀,用试纸测定pH值。
必要时,调节pH值至6.8±0.2,在测定最终pH前要混合充分。
旋松瓶盖约1/4转后,置35℃培养24±2小时。
非活性干酵母,以下步骤按D,1-11进行。
活性干酵母,混匀经培养过的样品,转种1mL到10mL月桂基蛋白(LST)中,另转种1mL到10mL四磺酸盐(TT)肉汤中。
将此两种选择性肉汤于35℃培养24±2小时。
充分地旋转混合经培养过的增菌肉汤,每种肉汤都要用3mm接种环划线接种3个选择性平板(四,3和四,4),接下面的四,510进行。
9、食品上霜和上顶用的混合物:
无菌操作称取25g样品,放入灭菌,带螺旋帽的广口瓶或其他合适的容器中。
加入225mL营养肉汤并充分混合。
盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。
振摇使其充分混匀,用试纸测定pH值。
必要时,调节pH值至6.8±0.2。
旋松瓶盖约1/4转后,置35℃培养24±2小时。
以下步骤按四,1-10继续。
10、调味品:
A、黑胡椒、白胡椒、芹菜籽或者干
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