实验技能比赛.docx
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实验技能比赛
(1)显微镜的基本操作方法 1.调节亮度:
由暗调亮,可以用大光圈,凹面镜,调节反光镜的角度。
2.将临时装片在载物台上适当位置固定好。
3.低倍物镜对准通光孔,使用粗准焦螺旋将镜筒自上而下的调节,眼睛在侧面观察,避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破玻片。
4.左眼通过目镜观察视野的变化,同时调节粗准焦螺旋,使镜筒缓慢上移,直至视野清晰为止。
5.如果在视野中没有被观察对象,可以移动装片,原则为欲上反下,欲左反右。
6.如果不够清晰,可以用细准焦螺旋进一步调节。
7.如果需要在高倍物镜下观察,可以转动转换器调换物镜。
如果视野较暗,可通过1的方法调节;如果不够清晰,可通过6的方法调节,但是不可以用4的方法。
8.使用完毕后,请调节转换器,使空镜头孔对着通光孔,将镜筒调至最低后装入镜箱。
[编辑本段]临时装片的制作 1.在载玻片的中央滴一滴清水,用镊子将材料放入其中,加盖盖玻片后用吸水纸将周围的水吸净擦干净后放到载物台上观察。
2.如果有气泡,可以用滴管在盖玻片一侧滴加清水,用吸水纸在另一侧吸引排出气泡。
3.载物台一定要保持水平,避免清水流出污染载物台。
(2)显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成的一种光学仪器,是人类进入原子时代的标志。
主要用于放大微小物体成为人的肉眼所能看到的仪器。
显微镜分光学显微镜和电子显微镜:
光学显微镜是在1590年由荷兰的杨森父子所首创。
现在的光学显微镜可把物体放大1600倍,分辨的最小极限达0.1微米,国内显微镜机械筒长度一般是160mm。
国内主要生产厂家上海光学仪器厂等
光学显微镜的种类很多,除一般的外,主要有:
①暗视野显微镜:
一种具有暗视野聚光镜,从而使照明的光束不从中央部分射入,而从四周射向标本的显微镜。
②荧光显微镜:
以紫外线为光源,使被照射的物体发出荧光的显微镜。
电子显微镜是在1931年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成的。
这种显微镜用高速电子束代替光束。
由于电子流的波长比光波短得多,所以电子显微镜的放大倍数可达80万倍,分辨的最小极限达0.2纳米。
1963年开始使用的扫描电子显微镜更可使人看到物体表面的微小结构。
■主要用途
显微镜被用来放大微小物体的图像。
一般应用于对生物、医药、微观粒子等观测。
(1)利用微微动载物台之移动,配全目镜之十字座标线,作长度量测。
(2)利用旋转载物台与目镜下端之游标微分角度盘,配全合目镜之址字座标线,作角度量测,令待测角一端对准十字线与之重合,然再让另一端也重合。
(3)利用标准检测螺纹的节距、节径、外径、牙角及牙形等尺寸或外形。
(4)检验金相表面的晶粒状况。
(5)检验工件加工表面的情况。
(6)检测微小工件的尺寸或轮廓是否与标准片相符。
移液枪:
在分析测试方面的研究时,一般采用移液枪(pipette)量取少量或微量的液体。
对于移液枪的正确使用方法及其一些细节操作,是很多人都会忽略的。
现在分几个方面详细叙述。
量程的调节
在调节量程时,如果要从大体积调为小体积,则按照正常的调节方法,逆时针旋转旋钮即可;但如果要从小体积调为大体积时,则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度,再回调至设定体积,这样可以保证量取的最高精确度。
在该过程中,千万不要将按钮旋出量程,否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。
枪头(吸液嘴)的装配
在将枪头(pipettetips)套上移液枪时,很多人会使劲地在枪头盒子上敲几下,这时错误的做法,因为这样会导致移液枪的内部配件(如弹簧)因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散,甚至会导致刻度调节旋钮卡住。
正确的方法是将移液枪(器)垂直插入枪头中,稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。
如果是多道(如8道或12道)移液枪,则可以将移液枪的第一道对准第一个枪头,然后倾斜地插入,往前后方向摇动即可卡紧。
枪头卡紧的标志是略为超过O型环,并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。
移液的方法
移液之前,要保证移液器、枪头和液体处于相同温度。
吸取液体时,移液器保持竖直状态,将枪头插入液面下2-3毫米。
在吸液之前,可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴(尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时)。
这时可以采取两种移液方法。
一是前进移液法。
用大拇指将按钮按下至第一停点,然后慢慢松开按钮回原点。
接着将按钮按至第一停点排出液体,稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。
最后松开按钮。
二是反向移液法。
此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体,其原理就是先吸入多于设置量程的液体,转移液体的时候不用吹出残余的液体。
先按下按钮至第二停点,慢慢松开按钮至原点。
接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体,继续保持按住按钮位于第一停点(千万别再往下按),取下有残留液体的枪头,弃之。
移液器的正确放置
使用完毕,可以将其竖直挂在移液枪架上,但要小心别掉下来。
当移液器枪头里有液体时,切勿将移液器水平放置或倒置,以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。
维护保养时的注意事项
如不使用,要把移液枪的量程调至最大值的刻度,使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。
最好定期清洗移液枪,可以用肥皂水或60%的异丙醇,再用蒸馏水清洗,自然晾干。
高温消毒之前,要确保移液器能适应高温。
校准是可以在20-25度环境中,通过重复几次秤量蒸馏水的方法来进行。
使用时要检查是否有漏液现象。
方法时吸取液体后悬空垂直放置几秒中,看看液面是否下降。
如果漏液,原因大致有一下几方面:
1、枪头是否匹配;2、弹簧活塞是否正常;
3、如果是易挥发的液体(许多有机溶剂都如此),则可能是饱和蒸汽压的问题。
可以先吸放几次液体,然后再移液。
微量移液器基本使用方法
1)选择适当的Pipetman:
不同型号的微量移液器,各有其吸取体积范围,请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。
P10 0.5~10P20 2~20P100 20~100P200 50~200
P1000 200~1,000P5000 1,000~5,000
2)设定体积:
设定体积时,由低旋转至高值,须先超越所欲设定值至少三分之一转后,再反转至设定值;由高旋转至低值,则直接转至设定值即可。
请勿将体积调整圈转到超过最低或最高的使用范围。
3)套上微量移液器头,吸取溶液:
吸取溶液时,尖端请先套上微量移液器头(tip),P1000使用蓝色微量移液器头,P200及P20使用黄色微量移液器头。
将按钮压至第一段,尽可能保持微量移液器垂直,将微量移液器头尖端浸入溶液,再缓慢释放生物技术核心实验第一章基本操作技术按钮(图1.2)。
释放按钮不可太快,以免溶液冲入吸管柱内而腐蚀活塞。
微量移液器头尖端浸入溶液的程度随吸取的体积及使用型号而定:
P10 <1mmP20,P100 2~3mm
P200,P1000 2~4mmP5000 3~6mm
4)释放溶液:
将微量移液器头与容器壁接触,慢慢压下按钮至第一段,停一两秒再压至第二段,把溶液完全压出。
使用注意事项
1)勿将微量移液器本体浸入溶液中。
2)吸取黏度高之试液,请先将微量移液器头尖端以刀片或剪刀将出口切大,并先行预润后再吸取。
3)吸取酸液或具腐蚀性溶液后,请将微量移液器拆解开,各部位零件以蒸馏水冲洗干净,擦干后再正确组合回复原状。
4)微量移液器的任何部份切勿用火烧烤,亦不可吸取温度高于70℃的溶液,避免蒸气侵入腐蚀活塞。
5)套有微量移液器头的微量移液器,无论微量移液器头中是否有溶液,均不可平放,需直立架好。
6)P5000必须使用过滤头,过滤头潮湿即需更换。
7)若不小心使溶液进入吸管柱内时,应予以拆解,将活塞组件、吸管柱、O-ring、铁氟龙垫等各部位以清水冲洗干净后,再以酒精擦拭,擦干后再正确组合回复原状。
8)定期自行以天平检查准确度,若有任何问题请送厂维修。
微量移液器PipetmanP的使用
A,保持微量移液器垂直,将按钮压至第一段;B,微量移液器头尖端浸入溶液,缓慢释放按钮;C,保持微量移液器垂直,将微量移液器头与容器壁接触,慢慢压下按钮至第一段;D,压至第二段把溶液完全释放出;E,释放按钮回原状。
高压蒸汽灭菌器:
使用方法与注意事项
一、高压蒸汽灭菌器使用方法
(1)在外层锅内加适量的水,将需要灭菌的物品放入内层锅,盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
(2)加热使锅内产生蒸气,当压力表指针达到33.78kPa时,打开排气阀,将冷空气排出,此时压力表指针下降,当指针下降至零时,即将排气阀
一、高压蒸汽灭菌器使用方法
(1)在外层锅内加适量的水,将需要灭菌的物品放入内层锅,盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
(2)加热使锅内产生蒸气,当压力表指针达到33.78kPa时,打开排气阀,将冷空气排出,此时压力表指针下降,当指针下降至零时,即将排气阀关好。
(3)继续加热,锅内蒸气增加,压力表指针又上升,当锅内压力增加到所需压力时,将火力减小,按所灭菌物品的特点,使蒸气压力维持所需压力一定时间,然后将灭菌器断电或断火,让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气,然后才能开盖取物。
二、高压蒸汽灭菌器注意事项:
(1)待灭菌的物品放置不宜过紧。
(2)必须将冷空气充分排除,否则锅内温度达不到规定温度,影响灭菌效果。
(3)灭菌完毕后,不可放气减压,否则瓶内液体会剧烈沸腾,冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。
须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。
又名:
高压灭菌器,高压灭菌锅,高压蒸汽灭菌锅,手提高压灭菌器,手提高压灭菌锅,手提式高压灭菌器,手提式高压灭菌锅,手提式高压蒸汽灭菌器,手提式高压蒸汽灭菌锅
(4)装培养基的试管或瓶子的棉塞上,应包油纸或牛皮纸,以防冷凝水入内。
(5)为了确保灭菌效果,应定期检查灭菌效果,常用的方法是将硫磺粉末(熔点为115℃)或安息香酸(熔点为120℃)置于试管内,然后进行灭菌试验。
如上述物质熔化,则说明高压蒸气灭菌器内的温度已达要求,灭菌的效果是可靠的。
也可将检测灭菌器效果的胶纸(其上有温度敏感指示剂)贴于待灭菌的物品外包装上,如胶纸上指示剂变色,亦说明灭菌效果是可靠的。
(6)现在已有微电脑自控型高压蒸气灭菌器,只需放去冷气后,仪器即可自动恒压定时,时间一到则自动切断电源并鸣笛,使用起来很方便。
三、高压蒸汽灭菌器应用:
为最常用的灭菌方法,一般以101.33kPa处理15~20min,可达到对物品进行灭菌的目的。
凡耐高温和潮湿的物品,如常用培养基、生理盐水、衣服、纱布、玻璃器材等都可用本法灭菌
离心机使用
目前,实验室常用的是电动离心机电动离心机转动速度快,要注意安全,特别要防止在离心机运转期间,因不平衡或试管垫老化,而使离心机边工作边移动,一致从实验台上掉下来,或因盖子未盖,离心管因振动而破裂后,玻璃碎片旋转飞出,造成事故。
因此使用离心机时,必须注意以下操作。
(1)离心机套管底部要垫棉花或试管垫。
(2)电动离心机如有噪音或机身振动时,应立即切断电源,即时排除故障。
(3)离心管必须对称放入套管中,防止机身振动,若只有一支样品管另外一支要用等质量的水代替。
(4)启动离心机时,应盖上离心机顶盖后,方可慢慢启动。
(5)分离结束后,先关闭离心机,在离心机停止转动后,方可打开离心机盖,取出样品,不可用外力强制其停止运动。
(6)离心时间一般1~2分钟,在此期间,实验者不得离开去做别的事。
一、操作方法:
1、打开门盖,装好转子,螺母压紧。
2、用水平仪放置转子上,调整仪器前方两个螺杆确保仪器水平。
3、将加液称量后的离心管放入转子内,离心管必须成偶数对称放入;关上门盖。
4、插上电源插座,按下电源开关。
5、设置转子号、转速、时间:
在停止状态下时,用户可以设置转子号、转速、时间,按设置(SET)键,此时离心机处于设置状态,停止灯亮、运行灯闪烁;在运行状态下时,用户只能设置转速、时间,按设置(SET)键,此时离心机处于设置状态,运行灯亮、停止灯闪烁(停止状态下按“SET”键可以在时间、转速和转子号之间循环选择;运行状态下按“SET”键可以在时间和转速之间循环选择)。
(1)、设置转子号:
按“SET”键,当显示转子号数码管右下角的小数点亮时,即进入转子号设置,再按“▲”或“▼”键选择离心机本次工作所带的转子号,共有五种转子可供选择,注意:
设置的转子号要与所选用的转子一致,不可设置错误。
(2)、设置转速:
按“SET”键,当显示转速最后一个数码管右下角的小数点亮时,即进入转速设置,再按“▲”或“▼”键确定离心机本次工作的转速。
(3)、设置时间:
按“SET”键,当时间最后一个数码管右下角的小数点亮时,即进入时间设置,再按“▲”或“▼”键确定离心机本次工作的时间(时间最长为99分钟),时间为倒计时。
(4)、当上述三个步骤完成后,再按“认可(ENTER)”键,以确认上述所设的转子、转速、时间,然后按“START”键启动离心机。
离心机开始运行,面板上显示转子号、转速及剩余离心时间。
6、离心机时间倒计时到“0”时,电机断电,5秒钟后开始刹车,离心机将自动停止,当转速等于0r/min时,蜂鸣器鸣叫15声,按下“RCF”键可取消鸣叫;运行途中按“STOP”键,离心机停止运转,蜂鸣器不响。
7、在运行当中,如果要看离心力,按下“RCF”键(RCF灯亮),就显示当时转速下的离心力,4秒钟后自动返回到运行状态。
8、在离心运行途中,如果需要检查原设置的参数,按设置(SET)键,仪器显示原设置的参数;4秒钟后(无键盘响应的情况下)仪器将自动返回到运行状态。
9、在离心机运行途中,如果需要修改运行参数,按设置(SET)键至小数点到所要修改参数的位置,再按上升键或下降键选择所要修改的参数,按认可键以确认所修改参数。
10、当转子停转后,打开门盖取出离心管。
11、关断电源开关,离心机断电。
二、安全注意事项:
1、离心机在运转时,不得移动离心机,不得打开门盖。
2、离心机移动位置后,需重新调整仪器水平。
3、所有转子不能超过其最高转速使用。
不同的转子号相对应的最高转速不同,本机的微机程序已锁定了每种转子相对应的最高转速,即每次设置转子号时必须设置正确。
3、本机转子正常使用寿命为五年,过期应更换新转子。
如果使用不当造成转子出现腐蚀或划伤,该转子应停止使用,必须更换新转子。
4、使用前应检查离心管是否有裂纹,凡有裂纹的离心管,请勿使用。
离心过程中如有离心管破裂,会引起较大的振动,应立即停机处理。
三、保养及维护:
仪器在设计时已考虑了尽量减少复杂的维修及检查工作,但使用中仍应按要求进行日常的维护和保养,以确保仪器长期安全有效的工作。
1、离心结束后,如下次使用的间隔时间较长,应将转子从离心室内取出。
然后将转子清洗抹干,以免腐蚀影响转子的使用寿命。
2、离心过程中,如有离心管破裂及其他方面原因,转子表面粘有溶液,应将转子清洗抹干。
3、转子取出后,把电机的转动轴及转子底部相配合的孔擦干,涂少量润滑脂或医用凡士林。
分光光度计:
WFJ2000型和WFJUV-2000型分光光度计有透射比、吸光度、已知标准样品的浓度值或斜率测量样品浓度等测量方式,可根据需要选择合适的测量方式。
该光度计设有自检功能,自检后波长自动停在546nm,测量方式自动设定在透射比方式(T),并自动调100%T和0%T。
在开机前,须确认仪器样品室内是否有物品挡在光路上,光路上有阻挡物将影响仪器自检甚至造成仪器故障。
1.使用方法:
1)连接仪器电源线,确保仪器供电电源有良好的接地性能。
2)接通电源,至仪器自检完毕,显示器显示“546nm100.0”即可进行测试。
3)用键设置测试方式:
透射比(T),吸光度(A),已知标准样品浓度值方式(C)和已知标准样品斜率(F)方式。
4)用波长设置键,设置所需的分析波长。
如果没有进行上步操作,仪器将不会变换到想要的分析波长。
根据分析规则,每当分析波长改变时,必须重新调整OA/100%T。
2000型和UV-2000型光度计特别设计了防误操作功能:
当波长被改变时,第一排显示器会显示“BLA”字样,提示下一步必须调OA/100%T,当你设置完波长时,如没有调OA/100%T,仪器将不会继续工作。
5)根据设置的分析波长,选择正确的光源。
光源的切换位置在335nm处。
正常情况下,仪器开机后,钨灯和氘灯同时点亮。
为延长光源灯的使用寿命,仪器特别设置了光源灯开光控制功能,当分析波长在335nm—1000nm时,应选用钨灯。
6)将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中,打开样品室盖,将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中,盖上样品室盖。
一般情况下,参比样品放在第一个槽位中。
仪器所附的比色皿,其透射比是经过配对测试的,未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。
比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕迹,被测溶液中不能有气泡、悬浮物,否则也将影响样品测试的精度。
7)将参比样品推(拉)入光路中,按“OA/100%T”键调OA/100%T,此时显示器显示的“BLA——”直至显示“100.0”或“0.000”为止。
8)当仪器显示器显示出“100.0”或“0.000”后,将被测样品推(拉)入光路,这时便可从显示器上得到被测样品的透射比或吸光度值。
2.样品浓度的测量方法:
A.已知标准样品浓度值的测量方法:
1)用键将测试方式设置A(吸光度)状态。
2)用WAVELENGTH△▽设置键,设置样品的分析波长,根据分析规程,每当分析波长改变时,必须重新调整OA/100%T。
3)将参比样品溶液,标准样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中,打开样品室盖,将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中,盖上样品室盖。
一般情况下,参比样品放在第一个槽位中。
仪器所附的比色皿,其透射比是经过配对测定的,未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度,比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕迹,被测溶液中不能有气泡、悬浮物,否则也将影响样品测试的精度。
4)将参比样品推(拉)入光路中,按“OA/100%T”键调OA/100%T,此时显示器显示的“BLA——”直至显示“100.0”或“0.000”为止。
5)用键将测试方式设至C状态。
6)将标准样品推(或拉)入光路中。
7)按“INC”或“DEC”键将已知的标准样品浓度值输入仪器,当显示器显示样品浓度值时,按“ENT”键。
浓度值只能输入整数值,设定范围为0~1999。
8)将被测样品中依次推(或拉)入光路中,这时便可以从显示器上分别得到被测样品的浓度值。
B.已知标准样品浓度斜率(K值)的测量方法:
1)用键将测试方式设置A(吸光度)状态。
2)用WAVELENGTH△▽设置键,设置样品的分析波长,根据分析规程,每当分析波长改变时,必须重新调整OA/100%T。
3)将参比样品溶液,标准样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中,打开样品室盖,将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中,盖上样品室盖。
一般情况下,参比样品放在第一个槽位中。
仪器所附的比色皿,其透射比是经过配对测定的,未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度,比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕迹,被测溶液中不能有气泡、悬浮物,否则也将影响样品测试的精度。
4)将参比样品推(拉)入光路中,按“OA/100%T”键调OA/100%T,此时显示器显示的“BLA——”直至显示“100.0”或“0.000”为止。
5)用键将测试方式设至F状态。
6)按“INC”或“DEC”键将已知的标准样品浓度斜率值输入仪器,当显示器显示样品浓度斜率时,按“ENT”键。
这时,测试方式指示灯自动指向“C”,斜率值只能输入整数值。
7)将被测样品中依次推(或拉)入光路中,这时便可以从显示器上分别得到被测样品的浓度值。
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