高中生物选修一速简笔记.docx

高中生物选修一速简笔记.docx

《高中生物选修一速简笔记.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高中生物选修一速简笔记.docx（22页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

高中生物选修一速简笔记

高中化学选修1速简笔记

适于加强记忆，配套课本使用

5.1DNA粗提取、鉴定

1．1）DNA在0.1mol/LNaCl溶液中溶解度最大，2mol/L溶解度最小。

DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白质能溶，进一步分离。

2）DNA在80ºC以上变性，多数蛋白质不能忍受60~80ºC。

洗涤剂瓦解细胞膜，对DNA无影响；蛋白酶水解蛋白质。

3）DNA、二苯胺，沸水浴，蓝色。

2．1）选取：

DNA含量较高的生物组织。

2）动物：

加蒸馏水，搅拌，过滤，收集滤液。

植物：

切碎，加洗涤剂、食盐，搅拌研磨，过滤，收集滤液。

3）纯化DNA：

①控制NaCl浓度：

2mol/L，过滤不溶物质，0.14mol/L，析出DNA，过滤溶液中杂质，2mol/L，溶解DNA。

直到丝状物不再增加为止。

②滤液中加嫩肉粉，木瓜蛋白酶。

③滤液60~75ºC恒温水浴箱保温，严格控制温度范围。

4）析出鉴定：

过滤，加与滤液体积相等、冷却的95%酒精溶液，静置，白色丝状物。

用玻璃棒沿一个方向搅拌卷起，滤纸吸去水分。

2mol/LNaCl溶液溶解，二苯胺试剂，混合均匀，沸水加热，冷却，变蓝。

3．1）血液，加柠檬酸钠，防止凝固。

2）加洗涤剂时，轻缓、柔和，否则容易产生大量泡沫。

加入酒精、搅拌，以免加剧DNA分子破裂，不能形成絮状沉淀。

3）二苯胺试剂现配现用：

溶于冰醋酸，加浓硫酸，棕色瓶保存，临用前加2%乙醛溶液。

4）提取高纯度DNA，CTAB、SDS、吐温。

4．1）蒸馏水使鸡血细胞破裂：

低渗液体，水分进入细胞胀破，搅拌加速细胞膜、核膜破裂。

2）洗涤剂：

离子去污剂，溶解细胞膜，有利于DNA释放。

食盐：

有利于DNA溶解。

尼龙布过滤。

3）研磨目的：

破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCl溶液中。

不充分：

DNA提取量减少，导致看不到鉴定效果。

4）滤液中含核蛋白多糖、RNA。

5）反复溶解析出DNA：

能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。

6）方案原理：

一DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同

二蛋白酶分解蛋白质，三蛋白质、DNA变性温度不同。

5.2多聚酶链式反应

1．1）分析细胞内参与DNA复制的各种组成成分与反应条件。

2）DNA羟基末端3´端，磷酸基团末端5´端，DNA合成方向：

从子链5´端向3´端延伸。

3）变性：

80~100ºC双链解体。

4）条件：

DNA模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、TaqDNA聚合酶、控制温度反复进行。

5）一般经历三十多次循环，步骤：

94ºC变性、55ºC复性、72ºC延伸。

6）循环之前进行一次预变性，增加大分子模板DNA彻底变性的概率。

7）两种引物使DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。

8）微量离心管，0.5mL，微量移液器，PCR仪或三个恒温水浴锅来回转移。

2．1）使用前高压灭菌，避免外源DNA因素的污染。

2）缓冲液和酶分装，-20ºC储存，使用前在冰块上缓慢融化。

3）每吸取一次，移液器枪头必须更换。

盖严离心管后，用手指轻轻弹击侧壁，使混合均匀。

离心机，使反应液集中在离心管底部。

4）DNA在260nm紫外线波段有一强烈吸收峰。

DNA含量鉴定：

50倍稀释，蒸馏水对照，波长260nm处，紫外分光光度计读数调零，加入比色杯中，测定光吸收值，计算含量：

（50：

标准厚度1cm比色杯中，OD206为1相当于50μg/mL双链DNA）

DNA含量（μg/mL）=50×读数×稀释倍数

5）PCR突出优点：

快速、高效、灵活、易于操作。

5.3血红蛋白的提取和分离

1．1）凝胶色谱法：

分离蛋白质，相对分子质量，凝胶，多孔球体，多糖类化合物，葡聚糖、琼脂糖，较小的易进入通道，路程长，速度慢，较大的在外部移动，短，快。

洗脱。

2）一定范围内，缓冲溶液，维持PH基本不变，1~2种缓冲剂溶解于水，调节使用比例。

体外溶液PH与体内基本一致。

3）电泳，带电粒子在电场作用下发生迁移。

生物大分子一定PH下带上正负电。

向着与所带电荷相反的电极移动。

带电性质不同、分子大小、形状不同，产生不同迁移速度。

4）琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。

测定蛋白质分子量，SDS-聚丙烯酰胺电泳。

迁移率取决于所带净电荷的多少以及分子的大小。

加入SDS，消除净电荷对迁移率的影响，使蛋白质发生完全变性，解聚成单条。

测定结果只是单条肽链的分子量。

SDS负电荷大大超过原有分子量，电泳迁移率完全取决于分子大小。

2．蛋白质的提取和分离：

样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。

1）血液中90%是血红蛋白，四条肽链，两条α-肽链、两条β-肽链。

每条环绕一个亚铁血红素集团，携带一分子氧或二氧化碳，含有血红素呈红色。

2）红细胞洗涤：

去除杂蛋白，有利于分离纯化。

采集的血样及时分离红细胞，低速短时间离心。

胶头吸管吸出上层透明黄色血浆。

下层暗红色红细胞液体倒入烧杯，五倍体积0.9%生理盐水，搅拌、离心、重复三次，

直至上清液不再呈现黄色，表明已经洗涤干净。

3）血红蛋白释放：

加蒸馏水至原体积，40%甲苯，磁力搅拌器，红细胞破裂。

4）分离血红蛋白溶液：

离心管，2000r/min，4层，从上到下，无色透明甲苯层，白色薄层固体：

脂溶性物质沉淀层，红色透明液体：

血红蛋白水溶液，其他杂质暗红色沉淀物。

滤纸过滤，除去脂溶性物质，分液漏斗，静置，分出下层红色透明液体。

5）透析：

透析袋，20mmol/L磷酸缓冲液，pH为7.0。

6）凝胶色谱柱：

打孔，刀切出凹穴，移液管上部不得超出橡皮胶凹穴底面，尼龙网，圆片，

100目尼龙纱，下端出口部连接尼龙管，螺丝夹控制开关，收集器。

7）装填：

垂直固定，根据色谱柱内体积计算所需的凝胶量。

交联葡聚糖凝胶，G凝胶交联程度、膨胀程度、分离范围，75凝胶得水值。

蒸馏水充分溶胀，凝胶悬浮液。

尼龙管打开，一次性缓慢倒入，轻轻敲动，使装填均匀。

不能有气泡存在，有气泡须重装。

完成后，立即连接缓冲液洗脱瓶，50cm操作压，

20mmol/L磷酸缓冲液，充分洗涤平衡，使装填紧密。

8）样品加入洗脱：

打开流出口，缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。

吸管，1mL样品加到顶端，不要破坏凝胶面，打开出口，渗入凝胶床内。

样品完全进入，关闭出口。

20mmol/L磷酸缓冲液，适当高度，缓冲液洗脱瓶，打开出口，洗脱。

待红色蛋白质接近底端，试管收集流出液，每5mL一管，连续收集。

3．1）洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白。

离心速度过高、时间过长，使白细胞等一同沉淀，达不到分离效果。

2）加速凝胶膨胀，加洗脱液湿凝胶，沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，

节省时间，除去微生物，排除胶粒内的空气。

3）气泡会搅乱蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。

不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒。

4）蛋白质分离时，红色区带在洗脱过程均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。

1.1果酒果醋制作

1．1）果酒：

酵母菌，异养型，兼性厌氧型，发酵温度18~25ºC，真菌（真核），出芽生殖。

有氧时，有氧呼吸，大量繁殖20ºC，无氧时，酒精发酵。

C6H12O6→2C2H5OH+2CO2

2）葡萄酒自然发酵，附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，色素进入发酵液，呈深红色。

3）缺氧、酸性发酵液中，酵母菌可繁殖生长，大多数不适应。

4）秋季生长繁殖，冬季休眠，春夏旺盛，土壤，传播到葡萄上。

2．1）果醋：

醋酸菌，异养型，好氧型，30~35ºC，原核生物，二分裂生殖。

2）对氧气的含量特别敏感，氧气、糖源充足，糖分解为醋酸，

缺糖源时，乙醇分解为乙醛，变为醋酸。

C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O

3）挑选葡萄，冲洗，榨汁，酒精发酵（果酒），醋酸发酵（果醋）

4）带盖的瓶子，12h拧松一次，放出CO2，拧紧，产生酒精后，打开，盖纱布，醋发酵。

5）充气口：

醋酸发酵，连接充气泵。

排气口：

排出CO2，防止爆裂。

长而弯曲的胶管，防止空气微生物污染。

出料口：

取样。

制酒时关闭充气口，制醋时，输入氧气。

先通气后密封，有氧呼吸大量繁殖，无氧呼吸酒精发酵。

3．1）选择新鲜的葡萄，冲洗，除去枝梗。

2）防止发酵液污染。

榨汁机清洗干净，晾干。

发酵瓶70%酒精消毒。

装入后封闭充气口。

3）留有1/3的空间，暂时储存CO2。

控制好温度、发酵时间。

4）重铬酸钾检测酒精，酸性呈灰绿色。

5）先冲洗再除去枝梗，避免除去枝梗时葡萄破损，被杂菌污染。

1.2腐乳制作

1．1）毛霉：

异养型，好氧型，15~18ºC，丝状真菌（真核），孢子生殖。

2）发达白色菌丝，蛋白酶分解蛋白质，脂肪酶分解脂肪为甘油和脂肪酸。

2．1）毛霉生长：

含水量70%豆腐，笼屉，空气中的毛霉孢子。

现代严格无菌，避免其他杂菌污染，保证产品质量。

2）加盐腌制：

分层整齐排放瓶中，逐层加盐，层数加高增加盐量，接近瓶口表面铺厚。

加盐：

析出水分，使其变硬，不会过早酥烂；抑制微生物生长，避免变质。

3）配制卤汤：

酒、香辛料。

加酒12%：

抑制微生物生长，使具有独特香味。

香辛料：

调制风味，防腐杀菌。

4）密封腌制

3．1）控制好材料用量，盐浓度过低，不足以抑制微生物生长，过高影响口味。

2）酒含量过低，不足以抑制，过高成熟时间延长。

3）防止杂菌污染，玻璃瓶洗刷干净，沸水消毒。

装瓶迅速小心，胶条封口，最好将瓶口先通过酒精灯火焰，防止瓶口被污染。

4．1）盐可防止杂菌污染，避免豆腐腐败。

2）含水量过高豆腐不易成型。

3）皮是前期发酵时表面生长的匍匐菌丝，使腐乳成形，对人体无害。

4）越接近瓶口，杂菌污染越有可能，铺厚可防止杂菌污染。

5）品质影响因素：

菌种、杂菌，温度，发酵时间，调味品。

1.3泡菜制作

1．1）乳酸菌：

异养型，厌氧型，原核，二分裂生殖，无氧时分解葡萄糖为乳酸。

2）亚硝酸盐，白色粉末，易溶于水，食物添加剂，0.3~0.5g中毒，3g死亡。

绝大部分随尿排出，特定条件下，亚硝胺，致癌、致畸、致变异。

3）选择原料，处理，称取食盐，配制盐水，泡菜盐水，加入调味料，装坛，

发酵，成品，测定亚硝酸盐含量。

4）清水、盐4:

1，配制盐水，煮沸冷却，新鲜蔬菜混合均匀，装到半坛，香辛料，

盐水没过全部菜料，盖好，坛盖边沿水槽注满水，保证无氧环境。

经常向水槽中补充水，发酵时间由室内温度决定。

5）盐酸酸化，亚硝酸盐、对氨基苯磺酸，重氮化反应，N-1-萘基乙二胺盐酸盐，

形成红色染料，与已知浓度的标准显色液，目测比较估算含量。

2．1）泡菜坛火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好。

检查，坛口向上压入水中，有无渗水。

2）控制好腌制时间、温度、食盐用量，温度过高、用量过低、时间过短，

细菌大量繁殖，亚硝酸盐增加。

10d后，亚硝酸盐含量开始下降。

3．测定亚硝酸盐含量：

1）配制溶液：

4mg/mL对氨基苯磺酸溶液：

对氨基苯磺酸、20%盐酸。

2mg/mLN-1-萘基乙二胺盐酸盐：

溶于水，避光保存。

5μg/mL亚硝酸盐溶液，水溶解，定容。

提取剂：

氯化镉、氯化钡，溶于蒸馏水，浓盐酸调PH为1,。

氢氧化钠乳液，2.5mol/L氢氧化钠溶液。

2）制备标准显色液：

刻度移液管，0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50mL亚硝酸盐溶液，

（1、2、3、4、5、7.5μg亚硝酸盐），50mL比色管，空白对照。

2.0mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置，1.0mLN-1-萘基乙二胺盐酸盐，蒸馏水，混匀，

观察颜色梯度变化。

3）制备样品处理液：

3坛泡菜，标记，泡菜，榨汁机粉碎，过滤，汁液。

转移到容量瓶，蒸馏水，提取剂，摇床振荡，氢氧化钠溶液，蒸馏水定容，过滤。

转移，氢氧化钠乳液，定容，过滤，溶液变得无色透明。

4）比色：

吸取滤液，对氨基苯磺酸溶液，N-1-萘基乙二胺盐酸盐，定容，静置。

比较，找出最相近，记录计算，每2d测一次。

4．1）含有抗生素牛奶不能发酵成酸奶，杀菌。

2）少吃腌制蔬菜，过久变质，硝酸盐被微生物还原成亚硝酸盐，危害人体。

3）泡菜坛内一层白膜，产膜酵母繁殖。

2.1微生物实验室培养

1．1）培养基：

液体培养基、固体培养基（琼脂）：

微生物表面生长，形成肉眼可见的菌落。

合成培养基、天然培养基（成分不明），选择培养基、鉴别培养基。

水、碳源、氮源、无机盐。

pH、特殊营养物质、氧气。

单质碳不能作为碳源，只有固氮微生物才能利用N2。

乳酸杆菌维生素，霉菌酸性，细菌中性或碱性，厌氧微生物无氧环境。

2）纯净培养物，关键，防止外来杂菌入侵。

无菌技术：

空间、衣着、手消毒，器皿、接种用具、培养基灭菌，

实验操作必须在酒精灯火焰附近进行，避免与周围物品相接触。

3）消毒：

较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物。

煮沸消毒法100ºC5~6min，巴氏消毒法：

不耐高温液体，70~75ºC煮30min、80ºC15min。

75%酒精消毒双手，氯气消毒水源。

灭菌：

强烈理化因素杀死物体内外所有微生物、芽孢、孢子。

灼烧灭菌，酒精灯火焰充分燃烧层，迅速彻底。

干热灭菌，干热灭菌箱，160~170ºC，耐高温、需保持干燥的物品。

高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌锅，水加热煮沸，冷空气排出，密闭，100kPa，121ºC。

紫外线照射，喷洒消毒液，石炭酸、酶酚皂溶液。

2．1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：

计算：

100mL

称量：

准确，牛肉膏黏稠，玻璃棒挑取，称量纸，牛、蛋白胨吸潮，迅速，及时盖上瓶盖。

溶化：

牛肉膏、称量纸一同放入烧杯，少量水，加热，分离，玻璃棒取出纸。

蛋白胨、氯化钠，搅拌，溶解，琼脂，加热熔化，搅拌，防止琼脂糊底烧杯破裂，

蒸馏水至100mL。

灭菌：

培养基，转移到锥形瓶，棉絮，牛皮纸，皮筋勒紧，高压灭菌锅，

培养皿，旧报纸包紧，干热灭菌箱。

倒平板：

冷却到50ºC左右，酒精灯火焰附近。

培养皿放好，右手锥形瓶，左手拔棉絮。

右手锥形瓶，瓶口迅速通过火焰。

左手打开培养皿，稍大于瓶口的缝隙，右手倒入培养基，左手立即盖上。

平板冷却凝固，倒过来放置，皿盖下皿底上。

2）纯化大肠杆菌：

平板划线法、稀释涂布平板法。

使聚集在一起的微生物分散成单个细菌，在培养基表面形成单个菌落，以便纯化菌种。

平板划线法：

接种环灼烧冷却，火焰旁打开菌液试管棉塞，试管口通过火焰，

接种环沾取一环，试管口通过火焰盖上，左手打开培养皿缝隙，

右手接种环迅速伸入，划三到五条平行线，盖上，不要划破培养基，

灼烧接种环冷却，第一区域划线末端往第二划线，三四五，最后一区不要与第一区相连，

平板倒置，培养箱培养。

稀释涂布平板法：

系列稀释：

各9mL水，6试管，灭菌，101~106编号，

移液管，1mL菌液，注入101，移液管吹吸三次，充分混匀。

从101吸取1mL注入102，重复。

移液管灭菌，火焰附近1~2cm处操作。

涂布平板：

涂布器，浸入70%酒精，取少量菌液（不超过0.1mL），滴加培养基上，

沾有少量酒精涂布器，引燃，酒精燃尽后，冷却，均匀涂布表面，可转动培养皿。

取出时让多余酒精滴尽，再引燃，不要将过热涂布器放入酒精，以免引燃酒精。

接种后、未接种，37ºC恒温箱。

3）菌种保藏：

临时保藏：

固体斜面培养基，4ºC冰箱，每3~6个月，转移到新鲜。

保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异。

长期保存：

甘油管藏，3mL甘油瓶，1mL甘油，灭菌，1mL菌液，混匀，-20ºC冷冻箱。

3．1）灭菌冷却，用手触摸锥形瓶，感觉温度下降到刚好不烫手时，开始倒平板。

2）瓶口通过火焰，灼烧灭菌，防止瓶口微生物污染培养基。

3）平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度也比较高，

平板倒置，使培养基表面水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染。

4）培养基溅在皿盖和皿底之间，空气中的微生物可能在这里滋生，最好不再使用。

5）第一次灼烧接种环，避免可能存在的微生物污染培养基。

每次划线前灼烧，杀死上次划线后残留的菌种，使下次划线菌种直接来源于上次划线末端，

从而通过划线次数增加，每次划线时菌种数目减少，以便得到单个细菌菌落。

划线结束后灼烧，杀死残留菌种，以免污染周围环境、感染操作者。

6）灼烧冷却再划线，以免温度太高，杀死菌种。

7）从末端开始划线，线条末端细菌数目少，能使每次划线菌种数目随着划线次数增多而减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

8）应从各个细节保证无菌，所有操作在酒精灯附近进行，酒精灯与培养皿的距离要合适，吸管头不要接触其他任何物体，吸管要放在酒精灯附近。

9）营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。

营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。

人及动物的营养物质：

水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。

植物的营养物质：

矿质元素、水、二氧化碳等三类。

微生物的营养物质：

水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。

10）将未接种的培养基在恒温箱中保温1~2天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。

2.2土壤细菌分离与计数

1．1）寻找目的菌株时，必须根据它对生存环境的要求，到相应的环境中寻找。

微生物筛选，人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。

选择培养基。

碳源：

葡萄糖、尿素，氮源：

尿素，只有能合成脲酶的微生物才能生长。

2）统计菌落数目。

稀释涂布平板法，统计样品活菌数目，稀释度足够高。

一个菌落来源于一个活菌，统计平板上的菌落数，推测。

选择菌落数为30~300。

统计的菌落数往往比活菌实际数目低，统计结果用菌落数表示。

血球计数板计数法，显微镜直接计数，不能区分死活，不适于运动细菌，个体微小看不到。

3）设置对照：

排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高可信度。

2．1）土壤取样：

70~90%细菌，酸碱度接近中性的潮湿土壤，3~8cm土壤层。

铲去表层土。

2）样品稀释：

稀释程度直接影响菌落数目。

一定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在30~300之间，便于计数。

测定细菌数量，104、105、106，放线菌103、104、105，真菌102、103、104。

3）微生物培养观察：

细菌30~37ºC1~2d，放线菌25~28ºC5~7d，霉菌25~28ºC3~4d。

每隔24小时统计一次，选取数目稳定时的为结果，防止因培养时间不足而遗漏菌落数目。

同种微生物一定条件下，稳定的菌落特征。

形状、大小、隆起程度、颜色。

表格。

形态：

标点状、圆形、丝状、不规则状、假根状、纺锤状

突起：

扁平、隆起、凸透镜状、垫状、脐突状

边缘：

完整、波状、裂片状、啮蚀状、丝状、卷曲状

3．1）无菌操作：

铁铲、信封使用前灭菌，火焰旁称取土壤，倒入锥形瓶，塞好。

全部操作在火焰旁进行。

2）做好标记。

标记培养皿，培养基种类、培养日期、平板上培养样品的稀释度。

3）耗时太长，事先制定计划，提高工作效率。

4．每克样品中的菌株数=（C/V）×M

C某一稀释度下平板上生长的平均菌落数

V涂布平板时所用稀释液体积mL，M稀释倍数

2.3分解纤维素微生物分离

1．1）纤维素：

棉花中含量最高，复合酶，C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶。

前两种分解纤维素为纤维二糖，第三种分解纤维二糖为葡萄糖。

滤纸条，醋酸-醋酸钠缓冲液，纤维素酶（70~80U/mL），振荡140r/min，滤纸完全分解。

2）刚果红染色法：

筛选纤维素分解菌，颜色反应。

刚果红CR，染料，纤维素，红色复合物，不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。

形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。

2．土壤取样，选择培养，梯度稀释，涂布鉴别培养基上，挑选产生透明圈菌落，发酵培养

1）土壤取样：

富含纤维素环境，多年落叶腐殖土，多年积累枯枝败叶，滤纸埋在土里。

2）选择培养：

液体培养基，碳源：

纤维素，对照：

牛肉膏蛋白胨培养基。

土样，30mL选择培养基，锥形瓶，摇床，振荡，直至培养液变混浊。

吸取，转移，新鲜选择培养基，振荡变混浊，吸取，稀释涂布，鉴别培养基。

3）刚果红染色法：

①长出菌落，1mg/mLCR溶液，倒去CR，1mol/LNaCl溶液，倒掉NaCl。

②10mg/mLCR溶液，灭菌，培养基200:

1CR溶液加入，混匀，倒平板，长出菌落。

4）发酵培养：

纤维素酶，液体发酵、固体发酵。

测定方法：

纤维素酶分解滤纸后产生的葡萄糖定量测定。

3．1）富含纤维素环境，生物与环境的相互依存关系，纤维素分解菌含量相对较高，

获得目的微生物几率较高。

2）滤纸埋在土壤中，使纤维素分解菌相对聚集，人工设置生存环境。

深10cm腐殖土壤。

3）两种染色法比较：

①优点：

颜色反应基本为纤维素分解菌

缺点：

操作繁琐，使菌落之间混杂。

②优点：

操作简单，不存在混杂。

缺点：

含淀粉物质，假阳性反应；有些微生物降解色素，不易区分。

4）选择培养浓缩所需微生物，选择培养条件下，能适应这种营养条件的微生物迅速繁殖，不适应的被抑制。

3.1菊花组织培养

1．1）细胞分化：

个体发育，形态、结构、功能，稳定性差异。

2）离体植物组织或细胞，分裂，愈伤组织，排列疏松无规则，高度液泡化，无定形，

薄壁细胞。

脱分化，再分化。

3）植物材料的选择直接关系到实验的成败。

年龄、保存时间的长短。

菊花：

未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。

4）MS培养基，液体，大量元素、微量元素、有机物（甘氨酸、维生素）、蔗糖、植物激素。

生长素、细胞分裂素，启动细胞分裂、脱分化、再分化关键性激素。

加强趋势。

用量比例影响植物细胞的发育方向：

生>细：

根分化，生<细：

芽分化，生=细：

愈伤组织。

pH：

5.8左右，温度18~22ºC，每日日光灯照射12h。

2．1）制备MS培养基：

4ºC保存，培养基母液。

配制母液：

大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。

激素、维生素、用量较小的有机物1mg/mL。

根据浓缩倍数计算用量。

配制培养基：

1L培养基，琼脂，加800mL蒸馏水，加热熔化，蔗糖，母液依次加入，

蒸馏水定容，调节pH，分装，锥形瓶，50mL或100mL。

菊花茎段培养比较容易，不必添加植物激素。

灭菌：

培养基、器械，高压蒸汽灭菌。

2）外植体消毒：

生长旺盛的嫩枝，流水冲洗，少许洗衣粉，软刷轻轻刷洗，冲洗，

无菌吸水纸吸干表面，70%酒精，摇动2~3次，立即取出，无菌水清洗，吸干，

放入0.1%氯化汞溶液中，取出，清洗3次，漂净消毒液。

考虑消毒效果、植物耐受能力。

3）接种：

70%酒精，擦拭工作台，点燃酒精灯，酒精灯旁进行，火焰灼烧灭菌。

锥形瓶左侧，经消毒的菊花茎段，无菌培养皿，切成小段，

左手锥形瓶，右手拉开绳子，右手手心攥封口膜，避免封口膜接触瓶口一面被污染。

左手瓶，瓶口旋转通过火焰，右手镊子，夹取茎段，插入培养基。

注意方向，不要倒插。

每瓶6~8块，重新扎好。

4）培养：

无菌箱，定期消毒，18~22ºC，日光灯照射12h。

5）移栽：

生根，打开封口膜，培养间，流水清洗根部，消过毒蛭石或珍珠岩，长壮，土壤。

6）栽培：

记录生长情况。

3．1）MS培养基中，大量元素、微量元素提供所需无机盐，蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压，有机物满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。

微生物培养基以有机营养为主，MS培养基以大量无机营养为主。

2）进行无性繁殖的植物，容易进行组织培养。

3.2月季花药培养

1．1）被子植物，雄蕊，花丝、花药。

花药囊状结构，花粉，花粉母细胞减数分裂，

单倍体的生殖细胞。

花粉发育，小孢子四分体时期、单核期、双核期。

1个小