吸光度标准曲线绘制.docx
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吸光度标准曲线绘制.docx
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吸光度标准曲线绘制
吸光度标准曲线绘制
染料吸光度浓度标准工作曲线的绘制 实验一
n
染料吸光度—浓度标准工作曲线的绘制(选做)
一、实验目的
n
掌握分光光度计的使用方法,学会染料吸收光谱曲线的测定和未知染液浓度的测定,加深对染色泽和吸收光谱关系的认识
二、实验原理
n
nn
测定染料在溶液中或纤维上的含量的方法有多种,本实验介绍用分光光度计法测定染料在溶液中的浓度采用分光光度法测定染料浓度的基本理论是基于朗白—比耳定理该定理指出,有色溶液对一束平行单色光的吸光度与溶液的浓度和液层厚度之积成正比其数学表达式为:
A=KbCC1/A1=C2/A2或C2=C1/A1×A2
三、主要实验材料、化学品和仪器
n
n
化学品:
活性红X-3B10g/l、Na2CO3、Na2SO4仪器:
722型分光光度计
四、实验步骤
n
n
吸收光谱曲线的测定(用活性红X-3B)①标准溶液的配制②吸收光谱曲线的测定混合染料浓度的测定①绘制标准曲线②测定未知浓渡的染液绘制标准曲线在测定同一染料的未知浓度时以其λmax处测得的吸光度,在标准曲线上查得对应的染液浓度
五、注意事项
n
n
实验时使用蒸馏水作溶剂,空白溶液也用蒸馏水实验时一律使用B=1CM的比色皿,此时A=KC
六、实验结果与讨论
n
根据所做图线分析染料浓度与吸光度之间呈什么关系若染料相对应浓度发生变化,是否影响它们两者之间的关系
氯浓度标准曲线绘制 氯浓度标准曲线绘制
溶液的配制:
磷酸盐缓冲液:
无水磷酸氢二钠:
无水磷酸氢二钾:
乙二胺四乙酸二钠:
碘酸钾储备液:
碘酸钾标准溶液:
碘酸钾储备液:
10ml
碘化钾:
氢氧化钠:
硫酸溶液:
98%的浓硫酸N,N-二乙基-1,4-苯二胺硫酸盐(DPD):
98%浓硫酸
无水DPD硫酸盐:
EDTA二钠:
所有溶液都配
制
成
1000ml的溶液
待测液的配制
序号
碘酸钾标准溶液/ml
硫酸溶液/ml氢氧化钠溶液/ml磷酸盐缓冲液/mlDPD试剂/ml氯含量/ug
101155021155531115510431155305511555061011551007151155150
氯浓度标准曲线
铁标准曲线的绘制 铁标准曲线的绘制方法
1.方法原理
亚铁在pH3~9之间的溶液中,可与邻菲啰啉生成很稳定的橙红色络合物高铁离子可以通过还原剂还原成亚铁进行测定测量波长在510nm处,用邻菲啰啉分光光度法可测量Fe2+、Fe3+及总铁含量
2.方法适用范围
此方法适用于一般环境水和废水中铁的监测,最低检出浓度为/L,测定上限为mg/L对铁离子大于mg/L的水样,可适当稀释后再按照本方法进行测定
3.仪器及试剂
使用仪器
分光光度计,10mm比色皿
试剂
铁标准贮备溶液
称取硫酸亚铁铵,溶于(1+1)硫酸50mL中,转移至1000mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀此溶液含铁浓度为100μg/mL
铁标准使用液
准确移取标准贮备溶液置于100mL容量瓶中,加水至标线,摇匀此溶液含铁浓度为μg/mL
盐酸(ρ/mL),(1+3)盐酸溶液
盐酸羟胺溶液
盐酸羟胺溶液[ρ(NH2OH·HCl)=100g/L]:
称取10g盐酸羟胺溶于水中,稀
释至100mL
缓冲溶液:
40g乙酸铵加50mL冰乙酸用水稀释至100mL
邻菲啰啉溶液:
邻菲啰啉溶液:
称取邻菲啰啉溶于水中,加数滴盐酸帮助溶解,稀释至100mL
饱和乙酸钠溶液
4.铁标准曲线的绘制方法
标准曲线的绘制
将μg/mL的铁标准溶液稀释5倍,变成5mg/L的铁标准溶液再依次移取铁标准液0、、、、、置于50mL比色管中,加(1+3)盐酸1mL,100g/L盐酸羟胺溶液2~3mL,再加适量蒸馏水,在水浴中加热然后冷却至室温,加一小片刚果红试纸,滴加饱和乙酸钠溶液至刚果红试纸刚刚变红,加入5mL缓冲溶液和邻菲啰啉溶液2mL,加水至标线,摇匀显色15min后,用10mm比色皿,以空白调零,在510nm处测量吸光度由经过空白校正的吸光度对铁的含量作图
总铁的测定
采样后立即将样品用盐酸酸化至pH为1,分析时取一定量混匀水样至50mL比色管中,加(1+3)盐酸1mL,100g/L盐酸羟胺溶液2~3mL,再加适量蒸馏水,在水浴中加热,以保证全部铁的溶解和还原若仍有沉淀应过滤除去
Fe2+的测定
采样时将2mL盐酸放在一个100mL具塞的水样瓶内,直接将水样注满样品瓶,盖紧瓶塞以防氧化,一直保存到进行测量和显色分析时只需取适量水样,直接加入缓冲溶液和邻菲啰啉溶液,显色5~10min后,用10mm比色皿,以空白调零,在510nm处测量吸光度
Fe3+的测定
Fe3+=总铁-Fe2+
计算铁(Fe,mg/L)=mV
式中,m——由标准曲线查得的铁量,mg/L
V——水样体积,mL
5.标准曲线绘制实例
标准溶液配制方法同,用10mm比色皿,以空白调零,在510nm处测量吸光度由经过空白校正的吸光度对铁的含量作图
铁含量测试数据见表1,铁含量标准曲线见图1
表1 铁含量测试数据序号
1
2
3
4
5
6
曲线参数:
a=-×10-3
b=
γ=铁含量,mg/L0 吸光度0
吸光度
-
图1 铁含量标准曲线
6.注意事项
各批试剂的铁含量如不相同,每新配一次试液,都需重新绘制标准曲线
若试样铁含量较高,可适当稀释;浓度低时可换用30mm或50mm的比色皿
用Excel绘制标准曲线 数理医药学杂志
文章编号:
100424337(2004)0420367202 中图分类号:
TP31714 文献标识码:
B
2004年第17卷第4期
用Excel绘制标准曲线
屠 婕 红
(浙江省嘉兴学院医学院 嘉兴314000)
回归分析在药学工作中有多种多样的应用,例如:
在药物分析工作中确定药物吸收度与其浓度间的具体线性关系;在药理学工作中,希望用一个简单的线性方程式描绘血药浓度与时间的关系;在药剂学工作中,增大而线性增大等,、和线性图借助述工作,1111 首先,将整理好的数据输入到Excel表格中,选定数据区
113 点击“下一步”,如果发现图不理想,如果有误,来更改
114,选好数据后,
,、Y坐标轴的标题,X轴为,Y轴为“吸收度”
域
图3 指定图表的标题和坐标轴
图1 选择所需的数据
112 单击工具栏中的“图表向导”,告诉“图表向导”你所希望
115 点击“下一步”,一张完整的散点图就完成了
的图表类型为“XY散点图”,子图表类型中选“散点图”
图4 多糖含量测定标准曲线散点图
图2 选择XY散点图
收稿日期:
2004202205
・367・
2004Vol
文章编号:
100424337(2004)0420368202 中图分类号:
R311 文献标识码:
A
遗传算法在辅助诊断系统中的应用
姜 淼
(青岛大学医学院 青岛266021)
摘 要:
把遗传算法应用到辅助诊断系统中,详尽阐述了遗传算法的原理,是应用遗传算法解决具体辅助诊断问题的初步设想
关键词:
遗传算法; GA; 群体; 个体; 基因; 辅助诊断
1962年Holland教授首次提出的遗传算法(Genetic
Algorithm,GA)法、共同关注[1~3],通过自然选择、遗传、,实现各个个体的适应性的提高这一点体现了自然界中
1 遗传算法原理
一个简单的遗传算法流程如图1所示:
①对待解决问题进行编码;
②随机初始化群体X(t),定义在t=0时X(0)=(x1,x2,…xn),群体也叫染色体组;
③对当前群体X(t)中每个个体xi计算其适应度F(xi),适应度表示了该个体的性能好坏,个体也称染色体,构成个体的元素称为基因;
④应用选择算子产生中间代Xr(t);⑤对Xr(t)应用交叉、变异算子,产生新一代群体X(t+
1);
⑥t:
=t+1;如果不满足终止条件继续③
图1 遗传算法原理流程
2 绘制标准曲线,计算回归方程
211 完成散点图后,点击图上的标准值点,然后按右键,点击
“添加趋势线”,在类型中选“线性”,点击“确定”,标准曲线就画好了
212 点击趋势线(标准曲线),按右键,选趋势线格式,在显示
公式和显示R平方值前的方格内打“√”,再点击确定相应的公式和相关系数就出来了本例中得回归方程式y=,相关系数为,说明在该测量范围内,吸光度A与浓度C呈良好的线性关系
若认真调整参数可以得到不同的效果,Excel在生成图表时,数据和图表是相连的,所以当工作表中的数据发生变化时,图表也会自动更新
图5 线性图,回归方程和R2显示在图表中
收稿日期:
2004204229
・368・
excel+绘制标准曲线 利用Excel进行快速回归分析
在检验工作中,经常遇到建立标准曲线的问题,常常将被测组分的标准含量对响应值绘制成标准工作曲线,然后根据标准曲线计算被测组分的含量以前多是在坐标纸上画图描图,但结果都不是哪么准确,而且计算回规方程和曲线的相关系统也比较麻烦这种如何根据实验数据确定一条最接近于实验点的直线,以及两个变量之间存在什么样的相互关系,解决这些问题的统计学方法就叫做回归分析虽然目前有很多先进仪器的工作站里都具备了该项功能,但对大多数啤酒企业使用的老型号的分光光度计等仪器仍需要另外进行回归处理而涉及这方面的专业软件也有不少,如ORIGIN等但由于是专业软件,使用起来难免会觉得吃力;而且,普及率不高,而Excel因为是微软office中捆绑的软件,普及率可以说是相当高的现在计算机基本得到普及,而且使用的办公软件多是office,因此本人在此介绍一个利用Excel软件,简便、快速地进行线性回归(主要是一元线性回归)的方法,供广大的检验人员
1.打开Excel软件,在工作区D4~D9中依次输入浓度数据,在E4~E9中依次输入响应值(如吸光度)数据,如图1所示
图1
2使用鼠标选取D4~E9内的数据,然后点击工具栏上的“图表向导”图标(或,在“插入”菜单中选择“图表”项)即可打开图表向导
3在“标准类型”选项卡的“图表类型”中选择“XY散点图”,在“子图表类型”中选择“散点图”见图2
图2
4连点两次“下一步”,在“图表标题栏”和“X、Y轴”栏内填上相应的内容,点击“完成”键即出现散点图(其它如横、纵坐标、图表标题、网络线、线形的粗细等可根据需要添加、删除或修改)
5在散点图中任一数据点上右击,在出现的浮动菜单中选择“添加趋势线”项则出现“添加趋势线”窗口6在“添加趋势线”窗口的“类型”选项卡“趋势预测/回归分析类型”中选择“线性”;在“选项”选项卡中选中“显示公式”和“显示R平方值”(即在其前面的复选框中打上“√”),按“确定”键后在绘图区即显示一元线性回归方程、曲线和相关系数R的平方值,如图3所示
图3
27因为一般用R值而不是R值来判断回归线是否有意义,所以我们有必要把R2值换算成R值其换算方法用一
般的具有求平方根功能的计算器(或Windows“附件”里的计算器)就可实现,如在Windows“附件”里的计算器中输入,立即得到了我们所需要的相关系数r
8根据吸光度计算浓度
在B12内输入“X=”,在C12内输入“=(C13-INTERCEPT(E4:
E9,D4:
D9))/SLOPE(E4:
E9,D4:
D9)”在B13内输入“Y=”当将测定的样品的吸光度输入C13区域内后,即可在C12内得到相应的样品的浓度
如果你检测的浓度较多,你只需要对数据的范围做相应的调整便可,用起来是否很方便?
牛血清蛋白-吸光度标准曲线 1.牛血清蛋白-吸光度标准曲线制作:
编号01234567
100ug/ml牛 血清蛋白(ml)水(ml)
考马斯亮蓝试剂(ml)OD值(A280nm)
摇匀,3分钟后开始测,20分钟内测完2.取样品1ml样品,加入5ml考马斯亮蓝试剂,测OD值附:
1.考马斯亮蓝G—250100mg溶于50ml95%乙醇,加入100ml85%H3PO4,用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤2.纯的牛血清血蛋白,预先经微量凯氏定氮法测定蛋白
氮含量,根据其纯度同/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液
关于《分光光度仪结构原理及微机绘制标准曲线》实验的相关课堂提问 实验二分光光度仪结构原理及微机绘制标准曲线相关课堂提问
1.有关分光光度仪构造、工作原理中涉及的相关问题:
(1)请阐述分光光度仪的基本结构?
分光光度仪的主要功能是什么?
(2)物质的颜色与其对光的吸收有什么内在联系?
分光光度仪所使用的光源有哪两类?
这两类光源的发光体是什么?
根据光的波长,你能大致阐述紫外、可见及红外光的波长范围吗?
根据光源性质,可将分光光度仪分为哪两类?
(3)什么是单色光与复合光?
用分光光度仪测定物质含量时,透过被测物质的光是单色光还是复合光?
从分光光度仪发出的光是单色光还是复合光?
分光光度仪是如何实现由复合光到指定输出单色光的?
用分光光度仪测定物质含量时,是如何选择单色光的?
(4)分光光度仪吸收池又称为比色皿,其作用是什么?
紫外与可见分光光度仪所用的比色皿有什么不同?
为什么紫外分光光度仪在紫外光波长范围内测定物质吸光度时,只能选用石英比色皿作吸收池?
(5)分光光度仪的核心部件是检测器?
它的作用是什么?
为什么说分光光度仪的光电管是分光光度仪最脆弱的部件?
在使用分光光度仪时应该注意什么事项?
(6)请阐述Beer-Lamber定律?
请根据Beer-Lamber定律表达式,阐述用分光光度仪测定含量时,被测物质的吸光度大小与其浓度大小成正比例(线性)关系?
具体分光光度仪是如何测定物质吸光度大小的?
为什么说用分光光度仪测定物质含量时,必须注意,其物质吸光度的大小范围应控制在~范围内?
2.用分光光度仪测定物质含量时,为什么必需先用标准品定制标准曲线,请阐述定制标准曲线的目的及意义?
定制标准曲线所选用的标准品应具备哪些特性?
3.有关分光光度仪正确操作使用中涉及的相关问题:
(1)请正确阐述分光光度仪的正确操作程序?
在分光光度仪的正确操作使用中,取、放比色皿时,必须注意什么问题?
为什么?
(2)什么叫“黑体”与“参比”?
它们在分光光度仪的操作使用中各起何作用?
以7200可见分光光度仪为例,其放置比色皿的拉槽中共有四个方格,在这些方格中,请指出黑体与参比液正确放置位置如何通过“黑体”与“参比”对分光光度仪进行校正?
校正后的分光光度仪,其“黑体”的透光率与吸光度分别为多少?
其“参比”液的透光率与吸光度又分别为多少?
(3)在通过分光光度仪,定制标准曲线时,测定不同浓度标准品液与其对应吸光度时,为什么只能选择两个比色皿进行测定,而不用多个比色皿来测定?
所使用的这两只比色皿,在操作前应如何校正?
在用同一只比色皿对于不同浓度的标准品液进行测定时,请阐述其正确的操作顺序和方法
(4)在向比色皿中加待测液时,其加样量的范围如何?
在加样时如何防止被加样品流到比色皿外壁上?
4.关于定量分析用器皿的清洗、取样与放置方式等方面涉及的相关问题:
(1)定量分析检测用的玻璃器皿如何判定其清洁程度?
比色皿与移液管中的污渍如何清洗?
常用的铬酸洗液主要成份是什么?
请阐述洗液洗涤污渍的原理
(2)为什么在洗液失效前可反复使用?
如何判断洗液是否失效?
为防止洗液失效,使用完洗液后应如何放置?
(3)移液管在移液管架上有几放置方式?
你能说出这两种方式有什么不同吗?
比色皿为什么不能用刷子来刷洗?
正确的比色皿洗涤方法是什么?
洗净后的比色皿如何放置?
(4)在移液管准确取量操作中,正确的操作方式如何?
移液管取样有哪两种方式?
最后留在嘴部的半滴液体应如何处置?
一般移液管取样时,取样是否会全部流出?
能否用洗耳球将移液管中留存的液体全部吹出?
一般
移液管能准确取样的精度是多少?
如果取样要求精度更高时,应选用什么量器来取样?
(5)本实验用到一种特殊的玻璃器皿血糖管,请阐述血糖管正确的加样方法,同时请阐述血糖管使用后的正确清洗方法
5.关于测定物质含量、定制标准曲线的目的及标准曲线应用中涉及的相关问题:
(1)用分光光度法测定物质含量通常需定制标准曲线,你能说出定制标准曲线的目的吗?
(2)为什么说曲线又通常称为“工作曲线”?
(3)在应用曲线,测定物质含量时,需注意哪些问题?
(提示:
首先一台分光光光度仪定制的标准曲线,只能在这台仪器上应用;其次测定样品含量时,样品的吸光度大小应在所应用的标准测定范围内)
6.关于采用微机处理数据、定制标准曲线与微机绘图等方面涉及的相关问题:
(1)请阐述用分光光度法,通过微机绘制标准曲线,测定物质含量的规范操作步骤?
操作中用微机绘制出的“两表一图”具体指什么?
如何利用数据处理表,通过微机计算出回归方程的截距、斜率及相关性?
(2)标准曲线反映的是哪两者的关系?
按惯例,纵、横坐标各表示什么?
标准曲线上反映出的物质浓度称为“显色浓度”,与本实验为例,该显色浓度与标准溶液的浓度之间存在什么关系?
并请将加样表中各加样管对应的显色浓度计算出来
(3)请阐述微机绘制标准曲线有哪几大要素?
请阐述用微机绘制标准曲线的操作步骤在绘图中常常需要绘制出两条线,你能说出这两条线的正确名称吗?
这两条线之间的关系如何?
7.关于标准曲线定制、物质含量测定中操作中具体涉及到的相关问题:
(1)如果被测物质的吸光度值不在标准曲线确定的范围内时,能否用此标准曲线对应的线性回归方程来计算样品的显色浓度?
为什么?
吸光度值过高或过低时,应如何处置?
(2)以本实验为例,其待测样品液的显色浓度与待测液浓度之间存在什么关系?
(3)以本实验为例,在定制葡萄糖标准曲线时,发现当吸光度达到某一值时,在后续的测定中发现吸光度不再遵循Beer-Lamber定律,而是基本保持不变,这是为什么?
问题出在何处?
(4)以本实验为例,某同学在同时进行定制葡萄糖标准曲线及完成样品测定加样操作时,发现自己测得的一组值普遍比其他同学测得的结果偏小,这是为什么?
同样,对应相同显色浓度,发现样品待测液测得的吸光度值大于其对应标准葡萄糖液所测得的吸光度,这又是为什么?
8.关于本实验原理涉及到的相关问题:
(1)请阐述3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的原理(要求从反应机理,相关反应生成物与还原糖的量的关系,反应生成物的最大吸光度对应的最大吸收波长的确定以及测定范围等多方面进行阐述)
(2)请阐述马铃薯总糖含量测定原理(要求从马铃薯总糖提取、总糖中多糖的水解、水解后还原糖测定方法等方面进行阐述)
(3)请阐述用移液管正确完成样品的移取及反应试剂加样后,在是否需加入纯净水对血糖管进行定容?
反应后对血糖管定容时是否能用自来水取代纯净水进行定容?
编写人:
徐文俊
生物产业学院基础实验教学中心
20091008
怎么通过excel绘制的标准曲线计算样品浓度 怎么通过excel绘制的标准曲线计算样品浓度
1取两个比色皿都装入高纯水,在测定波长下进行比色,若有一个数值偏小,另一个数值偏大两个差值即为比色皿纲差A纲差=A大-A小
2使用吸光值大的比色皿测定浓度分别为0,10,20,30,40μg/l的标准溶液吸光值A3将数值输入excel表格中,如下图:
4下一步如图输入=,再选中B4单元格,输入-,再选中纲差对应的单元格B1.,此时再按一下F4,把B1单元格锁定会发现出现=B4-$B$1,最后回车
→此图为按下F4后界面
→此图为再按下回车后界面
5单击选中C46将鼠标移动至右下角的黑方点处会变成一个黑色十字,单击并往下拖动
再回车后出现计算结果
7再在表中输入一列:
△A在D5中输入如下:
再按下F4,回车
再将下方单元格拖动计算出结果
8按住ctrl键不放再用鼠标选中图中两列后再放开鼠标左键,出现下图↓
点击
作图选XY散点图:
点完成
生成图表后,选择生成的曲线,之后在曲线上点击右键,选择“添加趋势线”,在“类型”中,选择最接近的曲线形式比如你的曲线接近线性,则选择“线性”,
之后切换到“选项”标签页,选择“显示公式”,确定此时,就会在图表中出现一个公式,即浓度对吸光度的关系
应用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样本浓度
整体思路:
整体思路:
在ELISA实验结束后,我们得到的是经酶标仪读出的标准品以及样本的OD值其中,标准品的浓度已知,我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度,以OD值为横坐标,浓度为纵坐标,做一条标准曲线,并用公式表示出来这样,我们把样本的OD值以X值代入,便可求出Y值,即样本浓度下面我们就一步步来实现这个目标:
1.首先,将数据整理好输入Excel,分别为经酶标仪读出标准品的OD值及其对应的浓度值
2.拖动鼠标选取完成的数据区,并点击图表向导,在图表类型中选“XY散点图”,并选择子图表类型的“散点图”第一个没有连线的)(如下图所示
3.点击“下一步”出现如下图界面如是输入是如本例横向列表的就不用更改,,如果是纵向列表就改选“列”
在做ELISA标准曲线,并通过此曲线求样本浓度时,因样本OD值是已知的,因此,我们需要将OD值设为X根据上图我们可以看到,横坐标X值为OD值,纵坐标Y为标准品浓度,这正是我们想要的
4.有时需要我们手动选择X值,这时可以点击“系列”来更改,如下图
如果要对横坐标和纵坐标进行掉换,我们可以就点击X值和Y值文本框右边的小图标,结果如下图:
出现上图后,拖动鼠标选取正确的数据区域以调整X或Y
5.调好之后,然后点击“下一步”出现图表选项界面,如下图
6.点击“下一步”在弹出的窗口再点击“完成”现在一张带标准值的完整散点图,就已经完成,如下图
7.到了这一步,散点图便完成了我们可能会问,曲线在哪里啊?
其实很简单,先点击图上的标准值点(记住一定要点选上),然后单击右键,点击
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- 光度 标准 曲线 绘制