家兔dic实验报告.docx
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家兔dic实验报告.docx
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家兔dic实验报告
家兔dic实验报告
篇一:
功能学实验家兔弥散性血管内凝血
功能学实验家兔实验性弥散性血管内凝血实验报告
一.实验目的
应用静脉注射兔脑浸液方法,复制家兔实验性DIC。
通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析,了解实验室诊断DIC的常用方法。
并且联系理论知识加深理解DIC的病因及发病机理。
二.实验动物
未知性别家兔(实验室提供)一只。
三.实验过程
1.家兔于仰卧位固定,颈部剪毛,在颈部皮下注射局麻药1%普鲁卡因约5ml,行局部麻醉。
2.用剪刀颈部切开皮肤,钝性分离皮下组织,暴露气管后往外侧拉开切口边缘的皮肤及下方的肌肉组织,找到颈动脉并用玻璃分针分离,行颈动脉插管。
3.第一次采集血标本:
预先向10ml离心管中注入%枸橼酸钠溶液。
再打开血管夹,从颈动脉插管放血,立即反复颠倒混匀(切忌振荡混匀),待离心。
向动脉插管中回推生理盐水,夹好血管夹。
4.复制DIC模型:
抽取2%兔脑浸出液10ml于注射器中,经耳缘静脉缓慢推注,注入速度为每分钟2ml以下。
同时密切观察家兔反应,如出现呼吸急促,烦动不安,当即停止注射,迅速进行第二次采血。
若注射完后家兔未挣扎,则在注射后计时2min,2min后进行第二次采血。
采血方式与第一次采血相同。
5.将前后两次所得的抗凝血,经3000rpm离心5min,将上层血浆清液分别吸至两支清洁试管中,切忌吸入细胞成分,并作好标记备用。
其中一支试管吸入血浆,另一只试管尽量吸取剩下的血浆。
6.血浆鱼精蛋白副凝固试验(3P实验):
向吸取血浆的两支试管中加入1%鱼精蛋白溶液50μl,轻轻摇匀后,在37℃水浴15min。
取出试管,在灯光下对黑色背景一边晃动试管一边观察,溶液清澈者为阴性,出现絮状沉淀或胶冻状物为阳性。
7.KPTT,PT,TT,FIB实验:
剩余两支试管使用凝血仪测定KPTT,PT,TT和FIB,并记录数据。
四.实验药物及器材
实验药物:
2%兔脑浸出液(临用前配,并在37℃保存),1%普鲁卡因溶液,%枸橼酸钠溶液。
生理盐水,1%鱼精蛋白溶液。
实验器材:
兔手术台,手术器械,37℃电热恒温水浴箱,离心机,刻度离心管(2支),试管(5支),移液器(100μl,1000μl),纱布。
五.实验结果
1、实验现象记录
家兔皮下注射局麻药后,在皮下形成鼓包,经按摩揉动数分钟后,鼓包仍存在,局麻药未完全吸收。
经家兔耳缘静脉缓慢推注兔脑浸出液后,家兔表现较平静。
推注完成后计时2min27s时家兔出现呼吸急促,燥动不安,欲挣脱动作,此时进行第二次采血,并离心,进行各项指标测定。
家兔在第二次采血后,又重新恢复平静,呼吸正常。
一小时后家兔仍未死亡。
六.讨论
1.静脉注射兔脑浸液引起DIC的原因和机制
兔脑浸液属于组织因子,大量的兔脑浸液静脉注射后,可激活家兔的外源性凝血系统,启动凝血过程,依次激活凝血因子FIX,FVIII,FX等,激活凝血酶,从而使血小板聚集和纤维蛋白原变为纤维蛋白,促进凝血。
另外,凝血酶激活后反馈性激活FIX,FX,FXI,FXII等,扩大凝血反应。
此即为高凝期,微循环易形成广泛的微血栓。
大量凝血酶的激活和微血栓形成,使血液中凝血因子和血小板被大量消耗,同时可能继发性激活纤溶系统,导致凝血系统与纤溶系统不平衡,血液处于消耗性低凝期,此时机体有明显出血症状。
DIC时产生的大量凝血酶和FXIIa等激活纤溶系统,产生大量纤溶酶,导致纤溶亢进,大量纤维蛋白降解产物形成,具有明显的抗凝作用,称继发性纤溶亢进,此时机体出血十分明显。
2.KPTT、PT、TT、Fg和3P实验的原理、临床意义以及在本实验中发生变化的原因和机制。
(1)KPTT实验是在血浆中加入KPTT试剂(包括接触因子激活剂和部分磷脂)以及钙离子,观察血浆发生凝固的时间。
由于在37℃时,以接触因子激活剂可以激活凝血因XII和XI,从而激活内源性凝血通路。
另外,以部分凝血活酶脑磷脂悬液代替血小板提供凝血的催化表面,在Ca2+参与下,实现凝血。
这样消除了血小板对凝血的影响,最后凝血时间仅与内源性凝血通路中的凝血因子活性有关,可以筛查内源性凝血通路是否正常。
实验中,由于家兔DIC时,外源性凝血通路激活的凝血酶可以反馈性激活FXI,FXII,导致内源性凝血通路中的凝血因子被消耗。
因此KPTT延长。
(2)PT是在血浆中加入过量的组织凝血活酶浸出液和钙离子,使凝血酶原转化为凝血酶,从而激活外源性凝血途径,使纤维蛋白原转变为纤维蛋白即发生凝固;其凝固时间的长短是反映血浆中凝血酶原、外源性凝血因子V,VII,X以及纤维蛋白原的水平。
实验中,由于家兔注入大量组织因子,外源性凝血通路激活,导致凝血酶原、外源性凝血因子以及纤维蛋白原均被消耗,因此PT时间延长。
(3)TT实验是在血浆中加入标准化的凝血酶溶液,测定血浆凝固需要的时间,又称为血浆凝血酶时间。
由于凝血酶在血浆中主要使纤维蛋白原转化为纤维蛋白,促进凝血。
因此TT主要与抗凝血物质和纤维蛋白原含量有关。
实验中,外源性凝血通路激活后消耗大量纤维蛋白原形成血栓,而且继发纤溶亢进,因此血液中纤维蛋白原含量降低,抗凝物质增多,造成TT延长。
(4)FIB实验是在血浆中加入定量的凝血酶,使血浆中纤维蛋白原转变为纤维蛋白,从而使血液凝固。
通过测量血浆凝固的时间来计算纤维蛋白原含量。
实验中,外源性凝血通路激活后消耗大量纤维蛋白原形成血栓,理论上血浆纤维蛋白原含量应该降低。
但实际上观察到DIC后采血得到的血浆纤维蛋白原含量反而比实验前血浆要略高,可能与吸取DIC血浆样本时,由于吸入少量细胞,在检验时细胞破坏释
放蛋白质,从而影响结果;或者由于血浆中含有异形球蛋白,影响了实验中血浆凝固。
(5)3P实验用于测定血浆中纤维蛋白单体(sFM)含量。
在DIC继发性纤溶亢进期,由于纤溶系统激活,产生大量纤溶酶。
纤溶酶大量降解纤维蛋白多聚体,产生大量FDP。
FDP与sFM在血浆中可形成可溶性复合物,不会降解。
加入鱼精蛋白后,可溶性复合物解离,游离出的FM便会相互聚合形成不溶性的肉眼可见的颗粒状、絮状或胶冻状沉淀,因此可观察到阳性反应。
实验中,由于DIC激活外源性凝血通路,导致大量纤维蛋白原形成纤维蛋白单体及多聚体,因此3P实验应该可见沉淀,呈阳性。
到实际上未能观察到阳性反应,可能为采血时家兔已处于DIC中晚期,sFM也在纤溶酶的作用下降解成FDP,而3p实验要求较大分子量的FDP或sFM,因此未能形成沉淀。
七.实验结论
经实验现象及理论分析,在DIC时KPTT、PT、TT均延长,FIB含量降低;3P实验仅适用于DIC早期检测,DIC中晚期可呈阴性。
篇二:
家兔失血性休克实验报告
病理生理实验报告——
家兔失血性休克
——2011302280083潘晴
实验目的
1、了解失血性休克动物模型的复制方法并复制失血性休克的动物模型;2、观察失血性休克时和抢救休克时动物的功能代谢变化及微循环改变;3、了解失血性休克的治疗,探讨失血性休克的发病机理及救治措施。
实验原理
休克是多种原因引起的,以机体急性微循环障碍为主要特征,并可导致器官功能衰竭等严重后果的全身性病理过程。
失血导致血容量减少,是休克常见的病因。
休克的发生与否取决于失血量和失血速度,当血量锐减(如外伤出血、胃十二指肠溃疡出血或食管静脉曲张出血)超过总血量的20%以上时,极易导致急性循环障碍,组织有效血液灌流量不足,即休克的发生。
根据休克过程中微循环的改变,将休克分为三期:
休克早期(微循环缺血期或缺血性缺氧期);休克期(微循环淤血期或淤血性缺氧期);休克晚期(微循环衰竭期或DIC期)。
但依失血程度及快慢的不同,各期持续时间、病理生理改变和临床表现均有所不同。
对失血性休克的治疗,首先强调的是止血和补充血容量,以提高有效循环血量、心排血量,改善组织灌流;其次根据休克的不同发展阶段合理应用血管活性药物,改善微循环状态。
实验对象
家兔
实验器材
BL-420生物机能实验系统手术器械、输液装置、尿量测定装置、量筒、注射器、针头、20%乌拉坦、1%肝素、1%NA、生理盐水。
观察指标
动脉血压(BP)mmHg中心静脉压(CVP)cmH2O呼吸(R)频率、幅度尿量(U)ml/10min
实验步骤
1、称重麻醉:
(乌拉坦5ml/kg);
2、固定备皮:
仰卧固定,颈部和腹部剪毛备皮;
3、血管分离:
颈部正中切口,分离右侧颈外V和左侧颈总A,穿双线备用;4、荷包缝合:
切口部位:
下腹部耻骨联合上方3-5cm内,正中切口;5、肝素抗凝:
(耳缘V,1ml/kg)排净空气,尽量靠近远心端,回抽有血;了6、血管插管:
结扎远心端,夹闭近心端,仅先后顺序不同;
7、呼吸装置:
胸腹部正中皮肤呼吸最明显处,穿单线固定,并连于张力传感器;8、%AD()第一次记录9、复制休克(40mmHg,30min)第二次记录10、注射NA(耳缘注射,1ml/kg)第三次记录11、静脉补液(40~60滴/分)第四次记录
注意事项
1、麻醉深浅要适度,麻醉过浅,动物疼痛,可致神经源性休克;过深则抑制呼吸。
2、牵拉肠袢要轻,以免引起创伤性休克。
3、动、静脉导管,事先用肝素充盈,排除空气。
导管插入后,再推入少量的肝素抗凝,防止导管前端堵塞;静脉导管插入后可缓慢滴注生理盐水保持管道通畅。
放血后也应及时往动脉导管内推注肝素。
4、血管插管时,结扎远心端,夹闭近心端,仅先后顺序不同:
颈外V:
先夹闭近心端,后结扎远心端,插入4-5cm;颈总A:
先结扎远心端,后夹闭近心端,插入2-4cm。
剪口部位尽量靠近远心端,成45度角朝向近心端剪开小口,约为管径的1/3-2/3,插管方向朝向近心端。
5、输液时应注意三通管的使用,输液装置只能单向与静脉导管相通,不能在输液的同时测中心静脉压。
要观察中心静脉压时,需关闭输液通道,使换能器与静脉导管单向相通。
6、第一次实验记录:
动物稳定10min后,记录正常状态下;
7、第二次实验记录:
颈总A插管的三通开关处断续放血,血压维持于40mmHg左右20-30min,建立失血性休克模型。
每放血10ml即关闭开关,监测BP变化;血压维持于40mmHg时,观察并记录上述指标变化(重点记录BP上升的最高值及变化时间)。
8、第三次实验记录:
休克动物的抢救措施一:
耳缘V缓注1%NA(1ml/kg),观察并记录上述指标变化(重点记录BP上升的最高值及变化时间)
9、第四次实验记录:
休克动物的抢救二:
静脉输入生理盐水,输液速度---40-60滴/分,输液总量---约为失血量的2-3倍,每输液50ml即观察并记录各项指标的变化。
实验记录
结果一:
结果二:
理想结果
注实验并没有很成功:
其中没有进行抢救措施一,所以注射NA后的变化没有记录;抢
救措施二中的生理盐水错误地沿着耳缘静脉输入了,BP,CVP变化不明显。
思考讨论
1、说明各实验因素引起动脉血压变化的机制?
答:
①注射乙酰胆碱后:
乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M受体结合,使细胞膜对K离子通透性增加,对Ca的通透性降低,心率减慢,方式传导速度减慢,心房肌收缩力减弱,心
输出量减少,血压降低,
②注射去甲肾上腺素后:
MA与血管平滑肌细胞膜上的ɑ受体结合,血管
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