01血常规分析.docx
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01血常规分析
会理县妇幼保健院
检验科
作业指导书
血常规分析
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LAB-OP-LJ001
第1页,共11页
版本:
1
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2008-01-01
1标本采集与要求
1.1静脉采血方法
用真空采血针取肘静脉血2ml放入含有干燥抗凝剂(含EDTA·K23.0~4.0mg)的抗凝管中,立即轻轻将试管颠倒混匀5~8次,以使其充分抗凝,并在试管上做好标识,在2小时内送检。
该采血管一支可同时用于血常规、血型正定型、网织红和疟原虫涂片的检测。
1.2毛细血管采血方法
1.2.1器材
一次性采血针、75%乙醇棉球、消毒干棉球、加有EDTA·K2干燥后的抗凝试管、一次性薄膜手套。
1.2.2操作
采血部位:
成人以左手无名指为宜,半岁以上儿童以中指为好,半岁以下婴幼儿通常自拇指或足跟采血。
操作人员戴上薄膜手套,轻轻按摩采血部位,使其自然充血,用75%乙醇棉球消毒局部皮肤,再用消毒干棉球擦干。
紧捏刺血部位,用无菌采血针穿刺取血动作应迅速,深度约2-3mm,以稍加挤压血液能流出为宜,然后用抗凝试管取血0.3~0.5ml。
采血完毕,用于干棉球压住伤口片刻。
注意事项:
末梢采血时,挤压力不能过大,以免过多组织液混入;同时要避开冻疮,发炎,水肿等部位,以避免影响结果;所以,为了保证结果的准确性,尽可能使用静脉采血方法,而不用毛细血管采血方法。
1.3对不合格标本的处理
对有凝块、溶血、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,按程序文件《标本采集与管理的控制程序》处理。
2分析检测前的准备
在进行质控物和病人标本分析检测前,进行仪器状态和试剂检查,确保准备完好后才能进行分析。
并将检查结果记录在相应的《仪器设备使用记录》上。
3质控分析
3.1质控物准备
将质控物从冰箱取出,室温放置15分钟后,轻轻颠倒混匀50次(2分钟左右),直至沉积的血细胞完全分散开。
3.2上机检测
具体操作见相应仪器作业指导书。
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3.3质控规则
12S(警告线)、13S(失控线)。
失控的处理见LAB-OP-LJ025《临检组定标/质控程序》。
3.4质控检测完毕后,及时将质控物放回冰箱原位。
4病人标本的检测
4.1标本的登记与编号
对于有条码的标本,先在标本接收站过单,有血型者,须打印空白单;对于无条码的标本,须检测人员自行打印条码。
然后,进行标本编号,带血型的标本编号在前面。
在编号过程中,检查标本是否合格。
对不合格的标本,按照程序文件《标本采集与管理的控制程序》处理。
4.2血型检查
血型检查的具体操作见《血库作业指导书》。
注意事项:
a)对血常规带血型的标本,先做血型检查,然后上机做血常规,再做血型复检。
b)血型检查必须有第二人复检,并在专用登记本上登记。
c)血型标本的初检采用试管法,复检采用玻片法。
但是当一个人值班期间单独签名发报告时,须两种方法都做,第二人复检仍用玻片法。
d)复检日期或其它事项可以在“备注”栏注明。
e)血型标本的复检必要时在交班登记本上登记。
4.3血常规上机检测
具体操作见相应的仪器作业指导书。
5血细胞的显微镜检查
5.1镜检的条件
满足下列条件之一,或原因未明者必须镜检:
a)医生明确要求涂片镜检的;
b)仪器的图形分析明确异常者;
c)WBC>20×109/L;
d)PLT>400×109/L;
e)PLT<80×109/L;
f)中性粒细胞>90%;
g)淋巴细胞>40%;
h)中间细胞>15%;
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i)单核细胞>15%;
j)嗜酸性粒细胞>8%;
k)嗜碱性粒细胞>2%;
5.2镜检的目的
核实各类细胞的形态学特点,对白细胞进行分类计数,对仪器的检测结果进行确认。
5.3镜检的步骤
5.3.1血涂片的制作
a)在距载玻片的一端1cm的位置滴下一滴抗凝血(约6~7ul)。
手指血则直接用干净玻片蘸血一滴。
b)用手拿好载玻片,将血液沿推片边缘展开。
c)将推玻片与载玻片呈30度角,边轻压推玻片边将血液推动展开。
d)涂片完后立即在空气中挥动干燥。
e)一张良好的血片,要求厚薄适宜,边缘整齐,两侧边有空隙,头、体、尾分明。
5.3.2血涂片的染色
5.3.2.1染色试剂
染液名称:
瑞氏-姬姆萨复合染色液
染色原理:
即瑞氏染色的原理,细胞的染色既有物理的吸附作用又有化学的亲和作用。
各种细胞和细胞的各种成份化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。
因此,用染色液染色后,在同一血片上可以看到不同的色彩。
例如血红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白质与酸性染料伊红结合染成粉红色称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染兰色或紫色称为嗜碱性物质;中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝均可结合,染紫红色,称中性物质。
试剂组成:
瑞氏-姬姆萨复合染色液,PH6.4-6.8磷酸盐缓冲液
生产商:
自制,参照《全国临床检验操作规程》第2版。
试剂保存:
室温
5.3.2.2染色步骤
a)加瑞氏-姬姆萨复合染色液约3-5滴,于干后的血涂片上染色1分钟。
b)再加约为缓冲液5-10滴于玻片上,用洗耳球轻轻吹动染液或轻轻摇动玻片,使两染液充分混匀,染色5-10分钟。
c)平着玻片,用小股流水冲去染液,镜检。
5.3.3镜检的要求
a)将湿片在高倍镜下观察涂片、染色是否良好,否则重新涂片染色。
b)选择涂片体尾交界、细胞分布均匀不重叠的部分进行镜检。
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c)观察白细胞、红细胞和血小板的形态特点,同时估计细胞的数量。
重点是根据镜检的条件,有针对性的进行镜检。
d)当在高倍镜下辨认细胞不清楚时,必须待玻片干后用油镜检查。
6结果编辑和报告签发
血常规标本上机检测完毕后,自动将结果传入实验室信息系统。
然后,在该系统编辑、录入和签发报告。
具体操作见实验室信息系统手册。
7参考值
测定项目的参考值见表4、表5和表6,均为成人参考值。
表4血细胞测定参考值
测定项目
男
女
WBC(×109/L)
4.0~10.0
4.0~10.0
RBC(×1012/L)
4.0~5.5
3.5~5.0
Hb(g/L)
120~160
110~150
HCT(%)
0.40~0.50
0.35~0.45
MCV(fl)
80~100
80~100
MCH(pg)
27.0~34.0
27.0~34.0
MCHC(g/L)
320~360
320~360
RDW(%)
11.0~15.0
11.0~15.0
PLT(×109/L)
100~300
100~300
MPV(fl)
6.5~12.5
6.5~12.5
PDW(%)
15.5~18.1
15.5~18.1
PCT(%)
0.100~0.280
0.100~0.280
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表5白细胞分类计数参考值
分类
百分率(%)
绝对值(×109/L)
中性粒细胞
50~70
2~7
淋巴细胞
20~40
0.8~4.0
单核细胞
3~8
0.12~0.80
嗜酸性粒细胞
1~5
0.05~0.50
嗜碱性粒细胞
0~1
0~0.1
中间细胞
3~13
0.2~0.7
大而未染色细胞(LUC)
0~4
0~0.40
表6网织红细胞计数参考值
项目
百分率(%)
绝对值(×109/L)
网织红
0.5~1.5
24~84
8危急值
表7血液细胞学分析的危急值
测定项目
小于或等于
大于或等于
WBC(×109/L)
1.5
50
Hb(g/L)
60
250
PLT(×109/L)
60
600
9临床意义
9.1白细胞参数的临床意义
9.1.1中性粒细胞的变化
9.1.1.1中性粒细胞生理性增多
a)年龄:
初生儿白细胞较高,一般在15×109/L左右,主要为中性粒细胞,到第6~9天逐渐下降至与淋巴细胞大致相等。
以后淋巴细胞逐渐增多,整个婴儿期淋巴细胞数均较高,可达70%。
到2~3岁后,淋巴细胞逐渐下降,中性粒细胞逐渐上升,到4~5岁二者又基本相等,形成中性粒细胞和淋巴细胞变化曲线的两次交叉,至青春期时与成人基本相同。
b)日间变化:
在静息状态时白细胞数较低,活动和进食后较高;早晨较低,下午较高;一日之间最高值与最低值之间可相差一倍。
剧烈运动、剧痛和激动可使白细胞显著增多。
如剧烈运动,可于短时间内使白细胞高达35×109/L,以中性粒细胞为主。
妊娠与分娩:
妊娠期白细胞常见增多,特别是最后一个月,常波动于(12~17)×109/L之间,分
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娩时可高达34×109/L。
9.1.1.2中性粒细胞病理性增多
a)急性感染:
急性化脓性感染时,中性粒细胞增高程度取决于感染微生物的种类、感染灶的范围、感染的严重程度、患者的反应能力。
如感染很局限且轻微,白细胞总数仍可正常,但分类检查时可见分叶核百分率有所增高;中度感染时,白细胞总数常增高大于10×109/L,并伴有轻度核象左移;严重感染时总数常明显增高,可达20×109/L以上,且伴有明显的核象左移。
b)严重的组织损伤或大量血细胞破坏:
在较大手术后12~36h,白细胞常达20×109/L以上,以中性分叶核粒细胞为主;急性心肌梗死后1~2天内,常见白细胞数明显增高,而心绞痛则不增高;急性溶血反应时,也可见白细胞增多。
c)急性大出血:
在脾破裂或宫外孕输卵管破裂后,白细胞迅速增高,常达(20~30)×109/L,主要是中性分叶核粒细胞。
d)急性中毒:
化学药物如安眠药、敌敌畏等中毒时,常见白细胞数增高,甚至可达20×109/L或更高,
e)代谢性中毒如糖尿病酮症酸中毒及慢性肾炎尿毒症时,也常见白细胞增多。
均以中性分叶核粒细胞为主。
f)肿瘤性增多:
白细胞呈长期持续增多,最常见于粒细胞性白血病,其次也可见于各种恶性肿瘤的晚期,此时不但总数常达(10~20)×109/L或更多,且可有较明显的核象左移现象,而呈所谓类白血病反应。
9.1.1.3中性粒细胞减少
a)某些感染:
某些革兰氏阴性杆菌如伤寒杆菌感染,一些病毒感染如流感,可使白细胞数均减少甚至可低到2×109/L以下。
b)某些血液病:
如典型的再生障碍性贫血时,呈“三少”表现。
此时白细胞可少到1×109/L以下,分类时几乎均为淋巴细胞,乃因中性粒细胞严重减少所致的淋巴细胞相对增多。
小部分急性白血病其白细胞总数不高反而减低,称非白血性白血病(aleukenicleuemia),其白细胞可<1×109/L,分类时也呈淋巴细胞相对增多,此时只有骨髓检查才能明确诊断。
c)慢性理、化损伤:
电离辐射(如X线等)、长期服用氯霉素后,可因抑制骨髓细胞的有丝分裂而致白细胞减少。
d)自身免疫性疾病:
如系统性红斑狼疮等。
e)脾功能亢进:
各种原因所致的脾肿大,如门脉肝硬化、班替综合征等。
9.1.1.4中性粒细胞形态变化
a)核象左移:
指外周血中杆状核粒细胞增多(5%以上)或并出现晚幼粒、中幼粒、早幼粒。
其常伴有明显的中毒颗粒、空泡变性等。
核左移常见于急性化脓性感染、急性中毒、急性溶血、白血病等。
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b)核象右移:
指中性粒细胞5叶以上超过3%,主要见于巨幼性贫血、恶性贫血、抗代谢药物应用之后,疾病恢复期的一过性出现。
9.1.2淋巴细胞的变化
9.1.2.1淋巴细胞增多
a)某些病毒或细菌所致的急性传染病,如风疹、流行性腮腺炎、传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症等。
b)某些慢性感染,如结核病。
c)肾移植后的排斥反应。
d)血液系统疾病:
淋巴细胞性白血病、白血性淋巴肉瘤、再障、粒缺(淋巴细胞相对增高,白细胞总数减低)
9.1.2.2淋巴细胞减少
主要见于接触放射线及应用肾上腺皮质激素或促肾上腺皮质激素时。
9.1.2.3淋巴细胞的形态变化
a)异型淋巴细胞:
分为Ⅰ型(空泡型)、Ⅱ型(不规则型)、Ⅲ型(幼稚型),主要见于传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎、病毒性肺炎、肾病综合征等。
b)放射线损伤后淋巴细胞的形态学变化:
核固缩、核碎裂、微核、双核淋巴细胞等。
9.1.3单核细胞数量变化
9.1.3.1单核细胞生理性增多
儿童外周血中单核细胞较成人稍多,平均为9%。
9.1.3.2单核细胞病理性增多
a)某些感染,如亚急性心内膜炎、疟疾、黑热病、活动性肺结核,急性感染恢复期等。
b)某些血液病,粒缺恢复期、恶组、淋巴瘤、MDS等。
9.1.4嗜酸性粒细胞数量变化
9.1.4.1嗜酸性粒细胞生理性变化
正常人嗜酸性粒细胞白天较低,晚上较高。
在劳动、寒冷、饥饿、精神刺激下,会减少。
9.1.4.2嗜酸性粒细胞增多
a)过敏性疾病,如支气管哮喘、血管性神经水肿、食物过敏、血清病、肠寄生虫病(钩虫病患者,嗜酸性粒细胞可达90%上)。
b)某些传染病,如猩红热。
c)某些血液病,如嗜酸性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、霍奇金病等。
9.1.4.3嗜酸性细粒胞减少
见于伤寒、副伤寒、手术后严重组织损伤以及应用肾上腺皮质激素或促肾上腺皮质激素后。
9.1.5嗜碱粒细胞数量变化
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增多见于:
慢粒白血病、真性红细胞增多症、黏液性水肿、溃疡性结肠炎、变态反应、甲状腺功能减退等。
9.1.6大而未染色细胞(LUC)
包括大淋巴细胞、浆细胞、原始和幼稚细胞。
9.1.7中间细胞
包括大淋巴细胞、浆细胞、原始和幼稚细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱粒细胞等。
9.2红细胞参数与血红蛋白的临床意义
9.2.1红细胞增多
a)生理性增多:
新生儿、精神紧张或兴奋、剧烈的体力劳动。
b)相对性增多:
因脱水血液浓缩所致。
常见于剧烈呕吐、严重腹泻、大面积烧伤、大量出汗、多尿和水的摄入量显著不足的患者。
c)绝对性增高:
与组织缺氧有关。
可引起继发性红细胞增多,如慢性肺源性心脏病、发绀性先天性心脏病,慢性一氧化碳中毒,登山病等。
d)真性红细胞增多症:
以红细胞增多、面色砖红、肝脾肿大为特征,红细胞可达(7~10)×1012/L。
9.2.2红细胞减少
a)生理性贫血:
妊娠期因血浆量相对增多,故红细胞相对减少。
3个月的婴儿至15岁的儿童,因生长发育迅速而致造血原料相对不足,红细胞和血红蛋白可较正常人低10%~20%。
老年人由于骨髓造血功能逐渐减低,均可导致红细胞和血红蛋白含量减少。
b)病理性减少:
①红细胞生成减少所致的贫血:
一是因骨髓造血功能衰竭,如再生障碍贫血、骨髓纤维化等伴发的贫血;二是因造血物质缺乏或利用障碍引起的贫血,如缺铁性贫血、铁粒幼细胞性贫血、叶酸及维生素B缺乏所致的巨幼细胞性贫血。
②因红细胞膜、酶遗传性的缺陷或外来因素造成红细胞破坏过多导致的贫血,如遗传性球型红细胞增多症、地中海性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、异常血红蛋白病、免疫性溶血性贫血、心脏体外循环的大手术及一些化学、生物因素等引起的溶血性贫血。
③失血:
急性失血或消化道溃疡、钩虫病等慢性失血所致贫血。
9.2.3血红蛋白测定的临床意义
血红蛋白增减的临床意义大致与红细胞的增减意义相似,但血红蛋白更准确反映贫血的程度。
血红蛋白的减少与红细胞的减少程度不一定呈比例。
一是在小红细胞贫血时,血红蛋白减少的程度较红细胞减少的程度更为明显,如缺铁性贫血、消化性溃疡、肠息肉、痔疮、月经过多、钩虫病等慢性反复出血等;二是在大红细胞性贫血减少的程度较血红蛋白更为严重,如缺乏维生素B12或叶酸引起的营养
不良性贫血及肝硬化性贫血等;三是在大出血时,血红蛋白减少的程度基本上与红细胞减少相一致,如消化道、肺部大出血及其他原因引起的大出血,再生障碍性贫血、纯红细胞再生障碍性贫血。
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9.2.4MCV、MCH及MCHC检测的临床意义
表8MCV、MCH、MCHC检测临床意义
形态学分类
参考值范围
病因
诊断方法
正细胞性贫血
MCV80~100fl
MCH27~34g
MCHC320~360g/L
再生障碍性贫血
RET计数,骨髓检查。
溶血性贫血
骨髓检查,RET计数,生化免疫检查。
急性失血
妊娠生理性贫血
病史及其它实验诊断
小细胞
低色素贫血
MCV<80fl
MCH<27pg
MCHC<320g/L
缺铁性贫血
铁粒幼贫血
骨髓涂片、骨髓铁染色、血清铁蛋白检查。
地中海贫血
血红蛋白电泳
大细胞性贫血
MCV>100fl
MCH>34pg
MCHC320-360g/L
巨幼红细胞贫血
骨髓涂片检查
慢性再生障碍性贫血
骨髓涂片检查,RET计数。
单纯小细胞性
贫血
MCV<80fl
MCH<27pg
MCHC320-360g/L
慢性感染
慢性肾炎
病史及其它实验诊断
9.2.5红细胞体积分布宽度的临床意义
a)鉴别诊断贫血:
缺铁性贫血红细胞明显大小不均,RDW明显增高;轻型β地中海贫血红细胞大小较均匀,RDW不增高。
b)缺铁性贫血的早期诊断:
在缺铁性贫血临床症状出现前,RDW即明显增高。
RDW只能作为IDA筛选指标,即RDW升高不应排除其他贫血的可能,但RDW正常者IDA的可能性不大(尤其是小细胞低色素性贫血)。
c)贫血的形态学分类
表9贫血的形态学分类
RDWMCV
减低
正常
增高
正常
小细胞均一性
正细胞均一性
大细胞均一性
增高
小细胞不均一性
正细胞不均一性
大细胞不均一性
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9.3血小板参数的临床意义
9.3.1生理变化
a)午后血小板高于晨间,冬季高于夏季,动脉血高于静脉血,静脉血高于末梢血,约为10%。
b)妇女月经早期血小板降低,经期后升高,分娩后1-2天降低。
c)新生儿血小板较少,3个月后才达到成人水平。
9.3.2病理变化
9.3.2.1血小板数减少
a)血小板生成障碍:
如急性白血病、再生障碍性贫血病、某些药物性损害等。
b)血小板破坏过多:
如睥功能亢进、药物中毒、特发性血小板减少性紫癜、免疫性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、X射线照射等。
c)血小板消耗过多:
如DIC、血栓性血小板减少性紫癜等。
9.3.2.2血小板增多
a)骨髓增生性疾病:
慢粒、真红、原发性血小板增多症等
b)急性大出血,急性溶血,急性化脓性感染。
c)睥切除术后。
9.3.3平均血小板体积(MPV)的临床意义
MPV是反应骨髓造血功能的一个良好指标。
但须与血小板计数联合应用。
a)PLT低、MPV增高:
骨髓造血功能正常,外周血血小板破坏增多,MPV反应性增高。
b)PLT高、MPV正常:
骨髓增生性疾病。
c)PLT、MPV均减低:
艾滋病、骨髓纤维化、骨髓占位性病变、再障、骨髓瘤、白血病化疗后、败血症。
d)PLT、MPV均增高:
反应性血小板增多症。
e)PLT正常、MPV增高:
慢性髓细胞性白血病、骨髓纤维化等。
f)提示骨髓功能恢复的预后价值。
MPV增加是白血病化疗后骨髓恢复的第一征候。
在感染病人,局部炎症时MPV正常,败血症时有半数MPV减低。
如果MPV随血小板数持续下降,则为骨髓衰竭的征兆,MPV越小,提示骨髓抑制越严重,MPV上升后,血小板数才逐步上升。
9.4网织红细胞参数的临床意义
9.4.1判断骨髓红系统造血情况
溶血性贫血,网织红可达20%以上,急性失血后5~10天达高峰,HFR和/或MFR升高早而明显。
典型再障,网织红常低于0.5%,绝对值低于15×109/L是诊断再障的标准之一。
9.4.2作为贫血疗效观察的指标
骨髓增生功能良好的患者,给予抗贫血药物后,HFR和/或MFR最先升高,网织红总数后升高,1周左右达高峰。
若网织红不增高,提示治疗无效或骨髓造血功能有障碍。
网织红计数是贫血患者随访检
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查项目之一。
10报告时间
临床急诊标本在2小时内发报告,急救中心和门诊等取标本30分钟内发报告,门诊标本有血小板减低、血细胞分类异常者1小时发报告,非急诊临床标本4小时发报告。
11标本保存
分析前静脉血血常规标本室温可保存4小时。
分析后静脉血血常规标本下午下班前收集,置2~8℃冰箱保存2周。
末梢血标本无法保存。
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审核:
批准:
批准日期:
2008年01与01日
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